酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白ζ及胰岛素样生长因子-1在Luminal B型乳腺癌中的临床价值

目的:检测Luminal B型乳腺癌酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白ζ(YWHAZ)和胰岛素样生长因子-1(IGF-1)蛋白表达并研究其临床价值。方法:选择2014年1月至2017年12月上海交通大学医学院附属第六人民医院诊治的312例Luminal B型乳腺癌患者为研究对象。采用采用链霉亲合素-生物素复合物法检测乳腺癌患者肿瘤组织及癌旁组织YWHAZ及IGF-1蛋白表达。分析YWHAZ及IGF-1蛋白表达与临床病理因素和预后的关系。Cox回归模型分析Luminal B型乳腺癌预后的影响因素。计数资料比较采用χ^(2)检验。Kaplan-Meier法分析YWHAZ、IGF-1蛋白表达与预后的关系,多因素Cox回归分析乳腺癌预后的影响因素。结果:Luminal B型乳腺癌肿瘤组织中YWHAZ、IGF-1蛋白阳性率显著高于癌旁组织(YWHAZ蛋白表达阳性率为77.56%比19.87%,IGF-1蛋白表达阳性率为62.50%比15.06%),差异有统计学意义(χ^(2)=205.526、147.853,P<0.05)。有淋巴结转移、Ⅲ期、人表皮生长因子受体2(Her-2)阳性乳腺癌患者肿瘤组织YWHAZ蛋白表达阳性率高于无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期、Her-2阴性乳腺癌患者(分别为88.28%比68.26%、90.70%比68.31%、86.18%比57.90%);有淋巴结转移、Ⅲ期、细胞核增殖抗原(Ki-67)阳性乳腺癌患者肿瘤组织IGF-1蛋白表达阳性率显著高于无淋巴结转移、Ⅰ~Ⅱ期、Ki-67阴性乳腺癌患者,差异有统计学意义(χ^(2)=17.862、21.800、30.367、18.562、10.088、9.725,P<0.05)。YWHAZ和IGF-1蛋白表达阳性乳腺癌患者预后良好率低于YWHAZ和IGF-1蛋白阴性患者(预后良好率分别为44.21%比60.00%、41.54%比58.12%),差异有统计学意义(χ^(2)=9.986、18.028,P<0.05)。淋巴结转移、TNM分期为Ⅲ期、YWHAZ蛋白表达阳性及IGF-1蛋白表达阳性为Luminal B型乳腺癌患者不良预后的危险因素(P<0.05)。结论:YWHAZ和IGF-1在Luminal B型乳腺癌组织中表达增加,与其不良预后有关,可用于Luminal B型乳腺癌病情及预后评估。

四氢原小檗碱对吗啡成瘾大鼠脑中腹侧被盖区神经胶质纤维酸性蛋白和酪氨酸羟化酶含量的影响

目的 研究吗啡依赖对大鼠中脑腹侧被盖区(VTA)神经元功能变化以及四氢原小檗碱 (THPB)的干预作用。方法 大鼠ip递增剂量的吗啡 10d建立吗啡依赖模型 ,d 11起分别ipTHPB 30mg·kg- 1或等体积生理盐水 (NS) ,每天 2次 ,治疗 12d或 30d。取脑 ,冰冻切片 ,用ABC法测VTA等脑区神经胶质纤维酸性蛋白 (GFAP)和酪氨酸羟化酶 (TH)的免疫组织化学反应 ,测定其阳性神经元的平均吸光度值表示其含量。结果 吗啡成瘾大鼠VTA中GFAP和TH免疫阳性神经元含量持续高于正常对照组 (P <0 .0 5 ) ;THPB治疗 12d或 30d显著降低GFAP和TH免疫阳性神经元含量的增高 ,与正常对照组比无显著性差异。结论 吗啡成瘾造成大鼠脑VTA“特异性损伤” ,THPB可逆转此损伤 ,对吗啡成瘾大鼠脑有保护作用 ,提示其有可能用于阿片类成瘾的防治。

犬尿氨酸-3-单加氧酶SibC的体外蛋白表达纯化与生化反应

目的通过体外基因合成西比罗霉素(sibiromycin)生物合成途径中推测但未验证功能的犬尿氨酸-3-单加氧酶编码基因sibC(GenBank:FJ768674.1:1380-2810),研究该犬尿氨酸-3-单加氧酶SibC的体外生化功能,为解析放线菌素D中相关结构单元的生物合成途径提供参考。方法通过生物信息学分析体外全合成基因sibC的序列并克隆至表达载体,将重组质粒pET28a-sibC转化至E.coli BL21(DE3)中进行表达,利用Ni-NTA亲和层析法纯化SibC,以犬尿氨酸(kynurenine,kyn,1)为底物进行SibC的体外酶活性测试,利用高效液相色谱(HPLC)对酶反应产物进行分析。结果PCR验证证明表达菌株E.coli BL21(DE3)/pET28a/sibC构建成功,SibC蛋白在E.coli BL21(DE3)中获得可溶性表达,经Ni-NTA亲和层析法纯化获得SibC蛋白,纯化的SibC能够催化犬尿氨酸生成3-羟基犬尿氨酸(3-hydroxykynurenine,3-HK,2)。结论体外验证了sibiromycin中SibC的功能为犬尿氨酸-3-羟化酶,为进一步研究犬尿氨酸途径及放线菌素的生物合成奠定了基础。

吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007吲哚-3-乙酰胺IAA合成功能及其依赖途径鉴定

【目的】探索吡咯伯克霍尔德氏菌JK-SH007(Burkholderia pyrrocinia JK-SH007)合成生长素吲哚-3-乙酸(indole-3-acetic acid, IAA)的能力,并阐明B.pyrrocinia JK-SH007存在色氨酸依赖型的吲哚-3-乙酰胺(indole-3-acetamide, IAM)IAA合成途径。【方法】使用Salkowski比色法和酶联免疫吸附法(ELISA)进行L-色氨酸对B.pyrrocinia JK-SH007合成IAA能力影响的检测;以B.pyrrocinia JK-SH007全基因组为模板,设计特异性引物克隆iaaM和iaaH基因,并使用生物信息学方法对其蛋白质和亲缘关系进行分析;通过实时荧光定量PCR方法分析B.pyrrocinia JK-SH007中的iaaM和iaaH基因在L-色氨酸处理下的差异表达。【结果】B.pyrrocinia JK-SH007菌株能够合成15.663μg·mL-1的IAA,在以L-色氨酸为前体的条件下其合成IAA的量显著增加,达到了44.404μg·mL-1。iaaM和iaaH基因均含有一个完整的开放阅读框,其中iaaM基因全长1 782 bp,编码593个氨基酸,属于Aminooxidase super family家族;iaaH基因全长1 368 bp,编码455个氨基酸,属于Amidase super family家族。在L-色氨酸的处理下,B.pyrrocinia JK-SH007中的iaaM和iaaH基因的表达量均显著增加。【结论】B.pyrrocinia JK-SH007具有合成IAA的能力,L-色氨酸对其合成IAA具有显著促进作用,且克隆得到了iaaM和iaaH基因,其在进化上具有一定的保守性,证明B.pyrrocinia JK-SH007中存在吲哚-3-乙酰胺IAA合成途径。

基于IL-6/JAK2/STAT3通路探讨加味三物白散对胃癌裸鼠移植瘤上皮间质转化的抑制作用

目的:研究加味三物白散对胃癌裸鼠移植瘤上皮间质转化(EMT)的抑制作用及与白细胞介素-6(IL-6)/非受体型酪氨酸蛋白激酶2(JAK2)/信号转导及转录激活蛋白3(STAT3)通路的关系。方法:40只裸鼠随机分成模型组、加味三物白散组、阳性药物组、联合组,每组10只。造模、灌胃干预后,ELISA检测裸鼠血清IL-6、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、CEA、CA199含量,HE染色观察瘤组织病理改变,RT-PCR及Western Blot检测EMT及IL-6/JAK2/STAT3通路相关mRNA、蛋白表达情况。结果:与模型组比较,各给药组第12—18天瘤体体积显著缩小(P<0.05),镜下肿瘤细胞有坏死区,血清中IL-6、TNF-α、CEA、CA199含量显著降低(P<0.05),瘤组织中JAK2、STAT3、N-cadherin、Vimentin mRNA及STAT3、N-cadherin、Vimentin蛋白表达显著降低(P<0.01,P<0.05),E-cadherin mRNA及蛋白表达显著增加(P<0.01,P<0.05);且联合组各m RNA表达效果优于两单给药组(P<0.05)。结论:加味三物白散可通过调控IL-6/JAK2/STAT3信号通路抑制胃癌裸鼠移植瘤EMT,效果以联合用药为优。

YWHAZ在非小细胞肺癌中的研究进展

YWHAZ隶属14-3-3蛋白家族成员,在真核细胞中普遍表达,主要作为伴侣蛋白经磷酸化伴侣相互作用的方式调控细胞信号转导、细胞周期、细胞迁移等生理功能。在病理情况下,异常表达的YWHAZ可以参与肿瘤的恶性转化。YWHAZ作为原癌基因,在包括非小细胞肺癌在内的肿瘤的发生发展中发挥重要作用。YWHAZ在非小细胞肺癌中异常高表达,YWHAZ的异常高表达与肿瘤细胞增殖抵抗凋亡、侵袭迁移和抗肿瘤药物耐药等恶性生物学行为密切相关,但其潜在的分子机制仍未完全阐明,未来仍需更多研究揭示其中的分子机制,以将YWHAZ作为潜在诊治靶点进行抗肿瘤药物开发。

miRNA-185-5p通过靶向YWHAZ对人非小细胞肺癌细胞A549恶性生物学行为的影响

目的探讨微RNA(miRNA)-185-5p通过调控酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(YWHAZ)对人非小细胞肺癌(NSCLC)细胞系A549增殖、侵袭凋亡和上皮间质转化的影响。方法获取GSE152702数据集,识别在NSCLC患者和健康者血液中差异性表达的miRNA,收集2018年7月至2019年9月在浙江大学附属第二医院确诊为NSCLC患者的癌组织及癌旁组织,使用RT-qPCR法检测miRNA-185-5p在NSCLC癌组织和细胞系中的表达情况。采用脂质体转染法,分别将miRNA-NC、miRNA-185-5p模拟物、miRNA-185-5p抑制剂和miRNA-185-5p模拟物+pcDNA3.0-YWHAZ转染至人NSCLC细胞A549中,Transwell实验检测各组A549细胞的侵袭能力,CCK-8实验检测各组A549细胞的增殖能力,脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)检测各组A549细胞的凋亡率,Western blot实验检测各组细胞中YWHAZ和上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达情况。检索StarBase、Targetscan和Human protein Atlas数据库,韦恩图绘制与miRNA-185-5p含潜在互补结合位点及与NSCLC患者预后不良有关的基因。检索GEPIA数据库识别YWHAZ表达与肺鳞癌、肺腺癌患者预后的关系。生物学信息技术预测和双荧光素酶报告基因实验验证miRNA-185-5p和YWHAZ之间的关系。结果GSE152702数据集显示miRNA-185-5p在NSCLC患者中明显下调,miRNA-185-5p在NSCLC癌组织中的表达水平低于癌旁组织(P<0.01)。miRNA-185-5p在NSCLC细胞株中的表达水平低于正常人肺上皮细胞株(P<0.05),与miRNA-NC组比较,miRNA-185-5p模拟物组miRNA-185-5p表达水平明显升高(P<0.05),YWHAZ表达水平明显降低(P<0.01),miRNA-185-5p抑制剂组中miRNA-185-5p表达水平明显降低(P<0.05),YWHAZ表达水平明显升高(P<0.01)。过表达miRNA-185-5p能明显抑制A549细胞增殖、侵袭和上皮间质转化,并促进细胞凋亡(P<0.05)。GEPIA数据库显示,YWHAZ在肺鳞癌和肺腺癌患者中明显上调,且与患者预后不良有关。YWHAZ可与miRNA-185-5p靶向结合,过表达YWHAZ可部分逆转miRNA-185-5p模拟物对A549细胞增殖,侵袭和上皮间质转化的抑制作用,以及对细胞凋亡的促进作用。结论miRNA-185-5p在NSCLC癌组织及细胞中明显下调,过表达miRNA-185-5p能明显抑制A549细胞增殖、侵袭和上皮间质转化的能力,并促进细胞凋亡,其机制可能与调控YWHAZ的表达有关。

血清YWHAΗ与类风湿关节炎患者部分炎症因子、骨代谢指标及并发骨质疏松的关系

目的探讨血清酪氨酸3-单加氧酶/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白eta(YWHAΗ)水平与类风湿关节炎(RA)患者部分炎症因子[白细胞介素-6(IL-6)、C反应蛋白(CRP)]、骨代谢指标[Ⅰ型胶原羧基端肽β特殊序列(β-CTX)、骨碱性磷酸酶(B-ALP)、Ⅰ型前胶原氨基端前肽(PⅠNP)、骨密度]及并发骨质疏松的关系。方法选取2020年7月至2021年6月于该院治疗的120例RA患者作为RA组,根据28个关节疾病活动度(DAS28)评分将RA患者分为低度组(2.6~3.2分,39例)、中度组(3.3~5.1分,46例)和高度组(>5.1分,35例),根据RA患者是否发生骨质疏松将其分为骨质疏松组(49例)和无骨质疏松组(71例)。另选取57例健康志愿者作为对照组。检测纳入研究者血清YWHAΗ、炎症因子(IL-6、CRP)、骨代谢标志物(β-CTX、B-ALP、PⅠNP和骨密度)。比较RA组和对照组、不同疾病活动度RA患者及骨质疏松组和无骨质疏松组的上述指标。比较骨质疏松组和无骨质疏松组的临床资料,选取差异有统计学意义的临床资料及血清YWHAΗ作为因变量,采用Logistic逐步回归分析RA患者发生骨质疏松的危险因素。采用Pearson相关分析血清YWHAΗ与各项检测指标的相关性。采用受试者工作特征(ROC)曲线分析YWHAΗ诊断RA并发骨质疏松的价值。结果RA组血清YWHAΗ、IL-6、CRP、β-CTX水平均高于对照组(P<0.05),B-ALP、PⅠNP水平、骨密度低于对照组(P<0.05)。重度组血清YWHAΗ、IL-6、CRP、β-CTX水平高于中度和低度组(P<0.05),B-ALP、PⅠNP、骨密度低于中度和低度组(P<0.05)。RA患者血清YWHAΗ水平与IL-6、CRP、β-CTX水平呈正相关(r=0.584、0.506、0.265,P<0.05),与B-ALP、PⅠNP、骨密度呈负相关(r=-0.595、-0.473、-0.657,P<0.05)。RA病程长、无钙剂摄入、高YWHAΗ是RA患者发生骨质疏松的危险因素(P<0.05)。YWHAΗ诊断RA并发骨质疏松的曲线下面积为0.806(95%CI:0.719~0.892),灵敏度为77.55%,特异度为83.10%。结论RA患者血清YWHAΗ水平增高,且与血清炎症因子水平增高、骨代谢紊乱及骨质疏松的发生有关。

汉黄芩素调控Ywhaz蛋白抑制结肠癌细胞增殖及侵袭转移

目的:探讨汉黄芩素对人结肠癌细胞HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭能力的影响,并研究汉黄芩素对酪氨酸3/色氨酸5-单加氧酶激活蛋白(Ywhaz)蛋白水平的影响。方法:体外培养HCT116和HT29细胞系,设空白组、汉黄芩素不同浓度组(浓度分别为5,10,20,40μmol·L-1)作用不同时间后,采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测汉黄芩素对结肠癌细胞增殖的影响,并用Annexin V-FITC/PI双标后流式细胞仪检测结肠癌细胞的凋亡率;穿透小室(Transwell)小室法检测处理24 h后细胞侵袭和迁移力的变化;实时荧光定量-聚合酶链式反应(q PCR)检测不同浓度汉黄芩素作用24 h后Ywhaz mRNA的水平,并运用蛋白质免疫印迹(Western blot)检测该蛋白及其磷酸化水平。结果:与空白组比较,汉黄芩素可明显抑制结肠癌细胞系的增殖,具有浓度和时间依赖性,并促进结肠癌细胞系的凋亡率,其中20和40μmol·L-1的汉黄芩素抑制细胞增殖作用显著(P<0.01),且不同浓度的汉黄芩素(10,20,40μmol·L-1)作用于结肠癌细胞后,明显降低肿瘤细胞的穿膜数(P<0.05,P<0.01),汉黄芩素可下调Ywhaz mRNA水平和蛋白水平的表达,并降低Ywhaz的磷酸化水平(P<0.05,P<0.01)。结论:汉黄芩素可显著抑制HCT116和HT29细胞系的增殖、侵袭和迁移能力,并诱导细胞凋亡,其抗肿瘤机制可能与下调Ywhaz的蛋白水平及其蛋白的磷酸化水平有关。