日本血吸虫酪蛋白激酶Ⅱβ亚基的序列分析

目的 发现并克隆日本血吸虫新基因。方法 对已获得的日本血吸虫表达序列标签 (EST)进行同源性分析 ,识别血吸虫新基因 ;根据EST设计引物 ,用 3′RACE从mRNA中扩增获得新基因全长 ,用生物信息学技术对获得的编码基因进行结构与功能分析 ,将新基因的完整编码阅读框克隆入原核表达载体 pGEX -4T -1。 结果 用 3′RACE获得一个EST的 3′端所缺序列 ,得到完整编码阅读框 ,其开放阅读框 (ORF) 654bp ,编码 2 17个氨基酸。利用生物信息学技术确定其为日本血吸虫酪蛋白激酶Ⅱβ亚单位的编码基因。重组质粒经双酶切及测序鉴定 ,证明日本血吸虫CKⅡβ原核表达质粒构建成功。 结论 扩增并成功克隆日本血吸虫酪蛋白激酶Ⅱβ亚单位编码基因的全长cDNA 。

5种抗血小板药对大鼠肝酪蛋白激酶Ⅱ的影响

用ＤＥＡＥ－纤维素和肝素－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ层析法部分纯化了大鼠肝酪蛋白激酶Ⅱ（ＣＫⅡ）；研究了５种抗血小板药对ＣＫⅡ活性的影响。结果表明，肝素对ＣＫⅡ有强烈的抑制作用，其ＩＣ５０为０．８８ｍｍ·Ｌ－１；蝙蝠葛碱、川芎嗪对ＣＫⅡ有明显的抑制作用（Ｐ＜０．０１），但较肝素的作用弱得多；汉防己碱对ＣＫⅡ活性没有明显影响；而潘生丁能使ＣＫⅡ活性明显升高，在一定范围内呈剂量依赖关系。这些结果可能对研究ＣＫⅡ是否在血小板的聚集和活化中起某些作用有重要的参考价值。

来源于酵母Yarrowia Lipolytica的酪蛋白激酶Ⅱ对食用蛋白质的磷酸化改性

从食用酵母Ｙ．Ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ中制取，纯化了酪蛋白激酶Ⅱ（ＣＫ－Ⅱ）（分子结构α＿２β＿２四个亚基组成。分子量为１５８Ｋ·Ｄａ），并用此酶对食用蛋白质牛奶酪蛋白及大豆球蛋白（７Ｓ）进行了磷酸化改性。结果表明：ＣＫ－Ⅱ的靶氨基酸是丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸；经磷酸化修饰后，底物的食用功能性质显著改善：在ＰＨ２～３．５及５．５～７．５范围内，磷酸化后的牛奶酪蛋白的溶解度提高约１０％～３０％，大豆球蛋白（７Ｓ）则提高１０％以上。此外，这两种蛋白的溶解度不仅与ＰＨ有关，而且受Ｃａ^（２＋）浓度的影响（随着Ｃａ^（２＋）浓度增加，溶解度降低）。但经ＣＫ－Ⅱ磷酸化改性后，与天然状态相比，这两种蛋白的溶解度受Ｃａ^（２＋）浓度的影响显著降低（ｔ－ｔｅｓｔ，Ｐ＝０．０１）。

酪蛋白激酶Ⅱ及对大豆蛋白和酪蛋白的磷酸化改性

从食用酵母Ｙ．Ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ中制取和纯化了酪蛋白激酶Ⅱ（ＣＫ－Ⅱ），并用此酶对食用蛋白如酪蛋白及大豆球蛋白（７Ｓ）进行了磷酸化改性。结果表明：ＣＫ－Ⅱ的靶氨基酸是丝氨酸、苏氨酸和酪氨酸。经磷酸化修饰后，底物的食用功能特性显著改善。在ｐＨ２－３．５及５．５－７．５范围内，磷酸化后的牛奶酪蛋白的溶解度提高约１０％－３０％，大豆球蛋白（７Ｓ）的溶解度提高１０％以上。此外，这两种蛋白的溶解度不仅与ｐＨ值有关，而且受Ｃａ^（＋＋）浓度的影响（随着Ｃａ^（＋＋）浓度增加，溶解度降低）。但经ＣＫ－Ⅱ磷酸化改性后，它们的溶解度受Ｃａ^（＋＋）浓度的影响显著降低（ｔ－ｔｅｓｔ，Ｐ＝０．０１）。

一种来源于酵母Y．Lipolytica的新型蛋白质激酶──酪蛋白激酶Ⅱ的制取、纯化、分子结构及特性

培育了酵母菌种Ｙ．Ｌｉｐｏｌｙｔｉｃａ（ｗｉｌｄＷ－２９），并从中制取、纯化了一种蛋白质激酶──酪蛋白激酶Ⅱ（ＣＫ－Ⅱ）．这种酶是一个四聚体α２β２，其分子量为１５８ｋＤ．

酪蛋白激酶Ⅱ抑制剂促进MCF-7乳腺癌细胞凋亡

目的观察酪蛋白激酶Ⅱ（CK2）抑制剂四溴苯三唑（TBB）对人乳腺癌细胞株MCF-7生长的影响。方法噻唑蓝（MTT）法检测TBB对MCF-7细胞生长的影响，用流式细胞仪检测细胞凋亡与细胞周期，荧光定量聚合酶链反应（PCR）分析Caspase-3、Caspase-8与bcl-2变化，采用电泳迁移率实验（EMSA）检测核因子-KB（NF—KB）的激活。结果TBB对MCF-7细胞的生长抑制效应随着药物浓度升高而增加。TBB（100umoL／L）作用MCF-7细胞24h后，早期凋亡率增至（15．10±0．65）％，G0／G1期细胞增至76．78％；Caspase-3与Caspase-8表达各增高3．410与5．736倍，而bcl-2表达与NF-KB激活均降低（P〈0．05）。结论CK2抑制剂TBB可促进人乳腺癌细胞株MCF-7细胞凋亡，并可能与NF—KB的激活降低有关。

人源酪蛋白激酶Ⅱ催化亚基的构建及表达纯化

目的:构建人源CK2催化亚基pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2重组质粒,并进行原核表达纯化得到高纯度融合蛋白,为进一步开展CK2生理病理机制研究以及CK2作为肿瘤抑制靶点相关抑制剂的筛选和评价提供实验基础。方法:利用合成的人源csnk2a1和csnk2a2目的基因片段,将酶切连接得到的重组质粒经测序验证后,进行大肠杆菌感受态BL21 (DE3)/Transetta (DE3)转化。使用合适浓度IPTG诱导融合蛋白的表达以得到可溶性的融合蛋白,并应用AKTA avant蛋白纯化仪和Ni2+-NTA预装柱进行纯化,蛋白纯度最后经SDS-PAGE胶分离后考马斯亮蓝染色和Western Blot检测鉴定。结果:测序结果表明pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2质粒均成功被构建;经转化诱导表达后,成功纯化得到相对分子量为42KD的his-hcsnk2a1和38KD的his-hcsnk2a2目的融合蛋白。结论:首次成功构建得到pET-28a(+)-hcsnk2a1和pET-28a(+)-hcsnk2a2质粒;并表达纯化得到高浓度和高纯度的his-hcsnk2a1和his-hcsnk2a2融合蛋白,为后期的蛋白功能研究和抑制剂筛选评价提供了基础。

酪蛋白激酶2相互作用蛋白1在心肌缺血再灌注损伤中的作用

酪蛋白激酶2相互作用蛋白1(CKIP-1)是一种特殊的调控蛋白,自身不具有酶的活性,但是它通过其自身特殊的结构域或模体与其他蛋白质、脂质进行相互作用,因此具有很多非常重要的生物学功能,在癌变,凋亡等许多细胞行为中发挥着重要作用。心肌缺血再灌注损伤机制可能涉及细胞凋亡、炎性反应、钙离子超载、线粒体损伤、能量代谢障碍、氧自由基过度释放等^([1])。我们就CKIP-1参与调节心肌缺血再灌注损伤这一过程进行综述。

非小细胞肺癌组织中蛋白激酶CK2的表达及其意义

目的:酪蛋白激酶Ⅱ(casein kinase Ⅱ,CK Ⅱ)也被称为蛋白激酶CK2。本研究探讨了蛋白激酶CK2的蛋白和基因的表达以及活性与非小细胞肺癌(non-small-cell lung carcinoma,NSCLC)临床病理之间的关系。方法:应用免疫组织化学SP法检测35例石蜡包埋的NSCLC组织及其癌旁"正常"组织和7例非肿瘤性肺组织标本中CK2催化亚基α、α’和调节亚基β蛋白的表达。应用RT-PCR检测10例新鲜肺癌灶组织及其癌旁"正常"组织和4例非肿瘤性肺组织标本中CK2各亚基mRNA的表达。应用同位素参入法测定细胞内CK2的活性。结果:免疫组织化学检测结果显示,CK2α和β亚基在NSCLC组织中的阳性率分别为62.9%和57.1%,高于癌旁"正常"组织的11.4%和25.7%(P<0.05),也高于非肿瘤性肺组织的28.6%和42.9%,但P>0.05。CK2α’亚基在NSCLC组织中的阳性率为65.7%,高于癌旁"正常"组织和非肿瘤性肺组织(42.9%和42.9%,但P>0.05);CK2各亚基的表达与患者的年龄、性别和肿瘤临床分期无关(P>0.05)。CK2α’的表达与细胞的分化程度和组织学分型无关;CK2α的表达与细胞的分化程度相关(r=0.388,P<0.05),与组织分型无关。低分化组的CK2α的表达高于中、高分化组(P<0.05)。CK2β在肺鳞癌中的表达高于腺癌(P<0.05),且与细胞的分化程度无关。在NSCLC组织中,无论是CK2α还是CK2α’,均与CK2β的表达呈正相关(r=0.439,P<0.05;r=0.45,P<0.05)。CK2各亚基mRNA的表达水平均高于其癌旁"正常"组织和非肿瘤良性病变组织。肺癌组织CK2的活性约为其癌旁"正常"组织的5.4倍,是非肿瘤良性病变组织的3.6倍。结论:蛋白激酶CK2在NSCLC组织中有较高表达,其高表达与NSCLC的发生和发展有关。与CK2α’亚基相比,CK2α或β亚基可能是更为理想的生物学标志物。

蛋白激酶CK2α对喉癌细胞凋亡和超微结构的影响

目的 探讨蛋白激酶CK2α对人喉癌细胞凋亡和超微结构的影响及其可能机制.方法 用脂质体转染法分别将蛋白激酶CK2α特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-CK2α及非特异性siRNA表达质粒psiRNA-hH1neo-cont转染人喉癌Hep-2细胞.Western印迹法检测转染细胞蛋白激酶CK2α蛋白表达,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素（Annexin V-FITC）和碘化丙啶（PI）双染色法检测转染细胞凋亡率的变化,透射电镜观察转染细胞形态学变化,Western印迹法检测转染细胞bcl-2和Bax蛋白的表达.结果 转染psiRNA-hH1neo-CK2α质粒后,Hep-2细胞蛋白激酶CK2α蛋白表达明显下降（P＜0.01）.和未转染细胞组和psiRNA-hH1neo-cont转染细胞组比较,psiRNA-hH1neo-CK2α转染组细胞出现典型的凋亡征象,如核固缩、染色质凝集靠近核膜和凋亡小体形成.psiRNA-hH1neo-CK2α转染细胞凋亡率明显高于未转染细胞组和psiRNA-hH1neo-cont转染细胞组（25.66%±0.83%比3.66%±0.43%、5.18%±0.22%,均P＜0.05）;与其他2组比较,psiRNA-hH1neo-CK2α转染组细胞bcl-2蛋白表达较低（相对吸光度比值为0.20±0.09 vs 0.72±0.16、0.56±0.11,均P＜0.01）,Bax蛋白表达较高（相对吸光度比值为0.81±0.17 vs 0.26±0.12、0.33±0.17,均P＜0.01）,bcl-2/Bax较低（0.25±0.05 vs 2.76±0.21、1.70±0.22,均P＜0.01）.结论 蛋白激酶CK2α与喉癌细胞凋亡密切相关,该作用可能与bcl-2/Bax降低有关,蛋白激酶CK2α可能是一个有潜力的喉癌治疗靶点.

乳腺癌缺失基因在关于胃癌发生机制方面的研究进展

乳腺癌组织缺失基因1(deleted in breast cancer-1,DBC1)作为一种近年来新发现的基因已经被证实参与胃癌等多种肿瘤的形成和发展,但具体机制仍所知甚少。通过沉默交配信息校准2同系物(silent mating type inforation regulation 2 homolog 1,SIRT1)去乙酰化活性的负调控,以及与其他因子如酪氨酸激酶2α(CK2α)、核转录因子κB(NF-κB)、蛋白激酶等的相互作用,DBC1对胃癌的发生、进展以及预后有一定影响。因此,DBC1作为治疗胃癌的新靶点逐渐为人们所重视,使我们对防治胃癌有了进一步的了解和突破。

蛋白激酶CK2在白血病中的表达及其意义

蛋白激酶CK2是由2个催化亚基（α或α′亚基）与2个调节亚基（β亚基）组成的异源二聚体，其在细胞生长、增殖及分化过程中起重要作用。蛋白激酶CK2的过度表达与高度激活与血液系统肿瘤的发生密切相关，抑制蛋白激酶CK2的表达可能为白血病的治疗提供新的思路。笔者现就蛋白激酶CK2在白血病中的相关发病机制及意义进行总结。

The Herpes Simplex Virus Type 1 Infected Cell Protein 22

As one of the immediate-early(IE)proteins of herpes simplex virus type 1(HSV-1),ICP22 is a multifunctional viral regulator that localizes in the nucleus of infected cells.It is required in experimental animal systems and some nonhuman cell lines,but not in Vero or HEp-2 cells.ICP22 is extensively phosphorylated by viral and cellular kinases and nucleotidylylated by casein kinase Ⅱ.It has been shown to be required for efficient expression of early(E)genes and a subset of late(L)genes.ICP22,in conjunction with the UL13 kinase,mediates the phosphorylation of RNA polymerase Ⅱ.Both ICP22 and UL13 are required for the activation of cdc2,the degradation of cyclins A and B and the acquisition of a new cdc2 partner,the UL42 DNA polymerase processivity factor.The cdc2-UL42 complex mediates postranscriptional modification of topoisomerase Ⅱα in an ICP22-dependent manner to promote L gene expression.In addition,ICP22 interacts with cdk9 in a Us3 kinase dependent fashion to phosphorylate RNA polymerase Ⅱ.

寄生虫病

9712866 酪蛋白激酶Ⅱ与牛泰累尔梨浆虫病/Ole Moiyoi OK//Science.-1995,267(5199).-834～6 医科图9712867 疟疾疫苗处于困境中/mauriceJ//Science.-1995,267(5196).

刚地弓形虫toxofilin蛋白的研究进展

Toxofilin是刚地弓形虫棒状体蛋白家族成员,但该蛋白有一定的特殊性,其结构中不存在棒状体蛋白典型丝氨酸、苏氨酸激酶区。Toxofilin分泌到宿主细胞质中,能与磷酸脂酶2C(PP2C)、肌动蛋白(actin)相互作用,形成toxofilin-actin-PP2C三聚体复合物,被酪蛋白激酶Ⅱ(CKⅡ)和PP2C激活发生磷酸化,在弓形虫入侵细胞过程中发挥重要作用。本文综述了弓形虫toxofilin的发现及其功能和免疫保护性等方面的研究进展。

中国汉族人群PARK16基因多态性与帕金森病易患性的关联

目的探讨PARK16基因单核苷酸多态性（SNP）与帕金森病（PD）易患性的关系，分析其SNP的基因型和等位基因频率及不同基因型的优势比（OR）和其临床特征。方法采用病例一对照研究选择PD患者226例和362名健康对照，利用TaqMan荧光定量PCR方法检测中国汉族人群中PARK16基因Rs947211和Rs823128基因多态性，并对不同基因型临床资料进行分析。结果PARK16基因的多态性位点Rs947211在PD组基因型频率为：GG34．1％（77／226）、AG46．0％（104／226）、AA19．9％（45／226），对照组分别为23．8％（86／362）、53．0％（192／362）、23．2％（84／362），2组基因型频率差异具有统计学意义（以野生型GG为参考，AG：OR=0．57，95％CI0．38—0．85，P=0．006；AA：OR=0．55，95％CI0．34—0．85，P=0．015）。以PD组野生型GG为参照，暴露于A等位基因型（AA＋AG）的OR=0．56，95％CI0．38～0．82，P=0．003。晚发型PD（LOPD）Rs947211的基因型频率与对照组比较差异亦有统计学意义（AG：OR=0．46，95％CI0．27～0．78，P=0．004；AA：OR=0．35，95％CI0．18—0．68，P=0．002）。PD组3种基因型在临床表现上差异没有统计学意义。Rs823128在PD组基因型频率分布与对照组差异无统计学意义（以野生型AA为参照，AG：OR=1．12，95％CI0．75—1．68，P=0．568；GG：OR=0．99，95％CI0．35—2．76，P=0．994）。结论中国汉族人群中PARK16基因与PD易患性相关。

CK2抑制剂CX4945对肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的逆转作用

目的 :探讨蛋白激酶CK2(casein kinase 2,曾称酪蛋白激酶Ⅱ)抑制剂CX4945对顺铂(cisplatin,DDP)耐药性肺癌A549/DDP细胞生长活性的影响及其可能的作用机制。方法 :CCK-8法检测肺癌A549细胞及其耐药性A549/DDP细胞的DDP半数抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC50),以及抑制剂CX4945对A549/DDP细胞耐药性的影响。蛋白质印迹法检测A549及A549/DDP细胞在DDP干预前后Wnt信号通路相关蛋白(CK2α、β-catenin和cyclin D1)、耐药相关蛋白[多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance-associated protein 1,MRP1)和肺耐药相关蛋白(lung resistance-related protein,LRP)]和凋亡相关蛋白[剪切型半胱天冬酶-3(cleaved caspase-3,c-caspase-3)]的表达变化。将A549/DDP细胞分为未处理对照组、CX4945组、DDP组及CX4945+DDP组,各组药物处理后,采用蛋白质印迹法和FCM法分别检测Wnt信号通路、耐药及凋亡相关蛋白的表达以及细胞凋亡情况。结果:DDP对A549/DDP细胞的IC50值是A549细胞的4.59倍,并在CX4945预处理后A549/DDP细胞耐药性明显降低(P <0.001)。与A549细胞相比,A549/DDP细胞中CK2α、β-catenin、cyclin D1、MRP1和LRP蛋白的表达水平明显较高,并在DDP处理后进一步升高(P值均<0.001);然而A549细胞中,DDP处理后CK2α、β-catenin和cyclin D1蛋白表达水平明显降低(P值均<0.01),而MRP1和LRP蛋白表达则无明显变化(P值均>0.05)。与未处理对照组和DDP组相比,CX4945组和CX4945+DDP组的A549/DDP细胞中β-catenin、cyclin D1、MRP1和LRP蛋白表达水平均明显降低(P值均<0.01)。此外,CX4945+DDP组的A549/DDP细胞凋亡率和c-caspase-3表达水平均较未处理对照组和DDP组明显升高(P值均<0.001)。结论 :CK2抑制剂CX4945可通过抑制Wnt通路,降低耐药相关蛋白的表达,从而逆转肺癌A549/DDP细胞的顺铂耐药性。

奇妙的分子伴侣

新生肽链的折叠与分子伴侣的发现新生肽链是指刚从核糖体上合成出来的多肽链。目前已经知道，新生肽链必须经过一系列加工，诸如二硫键的形成、糖基化作用、羟基化作用、磷酸化作用等１００多种化学修饰；肽链的折叠、去折叠；运输到它发挥生物功能的场所，可能涉及到多次...

大鼠侧脑室注射Apelin-13对急性痛的调节作用及机制

目的探讨Apelin-13对大鼠急性痛的调制作用及可能机制。方法简单随机抽样将50只大鼠分为生理盐水组、Apelin-13 0.05μg/g组、Apelin-13 0.1μg/g组、Apelin-13 0.5μg/g组及吗啡组(阳性对照组),每组10只,采用辐射热甩尾法连续监测60 min内大鼠痛阈的变化;同样采用简单随机抽样将40只大鼠分为生理盐水组、Apelin-13 0.5μg/g组、酪蛋白激酶2(CK2)抑制剂四溴苯三唑(TBB)组及Apelin-13+TBB组,每组10只,监测其痛阈的变化。Western Blot法检测海马内CK2表达量及N-甲基-D-天冬氨酸(NMDA)受体NR2B亚单位(P-NR2B S1480)磷酸化水平,研究Apelin-13对急性痛调制作用可能的机制。结果 Apelin-13可显著升高急性痛痛阈,0.5μg/g组给药10 min时甩尾潜伏期变化率(TWL%)达峰值[(50.03±2.71)%],与生理盐水组比较差异有统计学意义(q=18.054,P=0.003),并且此效应呈剂量和时间依赖(F_(Group)=47.729,P=0.000;F_(Time)=205.301,P=0.000)。同时给予CK2抑制剂TBB 10 min时TWL%降至(17.75±1.67)%,低于Apelin-13组,差异有统计学意义(q=6.976,P=0.005)。Western Blot结果显示TBB可明显减弱Apelin-13的作用,CK2α表达量、NR2B亚单位磷酸化水平均下降[(26.92±4.38)%,(39.90±7.40)%],与Apelin-13组[(41.60±6.65)%,(70.83±3.52)%]比较差异有统计学意义(q=5.246,P=0.010;q=9.757,P=0.010)。结论 Apelin-13可能通过CK2促进NMDA受体NR2B亚单位磷酸化,进而在热甩尾急性痛模型中起镇痛作用。

皮层电刺激联合康复治疗对脑缺血大鼠躯体运动功能的影响及机制

目的探讨皮层电刺激联合康复治疗对脑缺血大鼠躯体运动功能的影响及可能机制。方法采用随机数字表法将60只成年雄性SD大鼠分为假手术组、脑缺血组、脑缺血+单纯运动治疗(跑台训练)组、脑缺血+运动(跑台训练)+皮层电刺激组,每组15只。制备大脑中动脉栓塞模型,筛选成功模型大鼠为实验对象。在患侧肢体相对应的皮层脑区外埋置刺激电极,术后第3天开始皮层电刺激,治疗持续至第13天。第14天时进行Bederson评分、疲劳转棒实验,之后取材进行免疫组织化学染色或免疫蛋白印记(Western Blot),检测缺血侧脑组织酪蛋白激酶Ⅱα亚基(CK2α)和钙调素依赖蛋白激酶Ⅱ(CaM KⅡ)表达水平,研究皮层电刺激联合康复治疗可能的作用机制。结果皮层电刺激联合康复治疗组大鼠存活率改善,Bederson评分为(0.38±0.15)分、疲劳转棒停留时间为(155.37±42.44)s,较脑缺血组有明显好转(t=7.58,8.95;均P<0.01),且结果优于单纯运动治疗组(t=3.80,5.58;均P<0.05)。免疫组织化学染色结果可见脑缺血组CK2α及CaM KⅡ阳性率明显降低,与假手术组相比差异有统计学意义(t=15.99,12.39;均P<0.01)。皮层电刺激联合康复治疗组CK2α、CaM KⅡ阳性比例分别为(24.75±4.55)%、(33.48±3.23)%,较脑缺血组明显升高,差异有统计学意义(t=6.05,7.99;均P<0.01),且阳性比例高于单纯运动治疗组(16.40±2.59)%、(22.53±6.44)%(t=4.52,4.62;均P<0.05)。Western Blot结果显示,脑缺血组CK2α及CaM KⅡ表达水平显著下降,分别为假手术组的(0.31±0.12)、(0.39±0.12)倍,皮层电刺激联合康复治疗组CK2α及CaM KⅡ表达量明显升高,分别升高至假手术组的(0.81±0.08)、(0.76±0.19)倍,与脑缺血组相比差异有统计学意义(t=10.68,4.73;均P<0.05)。结论皮层电刺激联合康复治疗可显著促进脑缺血大鼠运动功能恢复,其机制可能与上调运动皮层区CK2α及CaM KⅡ表达有关。