BCR-ABL融合基因ABL激酶区突变对慢性髓系白血病酪酸激酶抑制剂(TKI)耐药的研究

目的:探讨BCR-ABL融合基因ABL激酶区突变对慢性髓系白血病(chronic myelogenous leukemia, CML)酪酸激酶抑制剂(Tyrosine kinase inhibitors, TKI)耐药的影响。方法:随机抽取于我院就诊的60例接受伊马替尼治疗的CML患者为研究对象,采用巢式RT-PCR对患者骨髓液BCR-ABL mRNA内ABL激酶区序列进行逆转录扩增和测序,进行同源性比较分析ABL激酶区突变,并分析其与伊马替尼耐药的关系。结果:(1)60例CML患者中发生21例ABL激酶区突变,共检测出22种点突变共38次,CML患者发生ABL激酶区突变的阳性率35.00%;60例患者中共发生耐药19例,伊马替尼治疗CML患者的总耐药率为31.67%(19/60),伊马替尼治疗CML患者发生突变后的耐药率为90.48%(19/21)。(2)分层研究中CML慢性期、加速期、急变期患者的突变率和耐药率分别为16.67%(3/18)、33.33%(1/3)、30.77%(8/26)、100.00%(8/8)、62.50%(10/16),100.00%(10/10)。各疾病时期患者的突变率和耐药率比较有统计学意义(P<0.05)。结论:伊马替尼治疗CML患者容易引起ABL激酶区突变,导致患者耐药。ABL激酶区突变存在突变位点广泛,性质多样等特点,且与疾病进展情况有明显关联。

酪氨酸蛋白激酶抑制兔角膜新生血管的实验研究

目的:探讨酪氨酸蛋白激酶抑制剂sunitinib对碱烧伤诱导的兔角膜新生血管的抑制作用。方法:采用碱烧伤法诱导兔角膜新生血管模型。将30只新西南大白兔随机分为3组,A组:给予0.5mg/ml sunitinib滴眼,B组:给予1mg/ml sunitinib滴眼,C组:给予生理盐水滴眼作为实验对照组。于碱烧伤后4d、7d、14d显微镜观测新生血管长度及面积。在4d、14d时各组处死4只兔,角膜作病理分析和免疫组织化学法测定血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)的表达。结果A、B组的角膜新生血管长度及面积均显著少于C组(p<0.01);A、B组VEGF蛋白表达较C组弱,具有统计学差异(p<0.01);结论:酪氨酸蛋白酶抑制剂sunitinib能降低兔角膜碱烧伤后角膜VEGF的表达,有效抑制角膜新生血管的形成。

肿瘤新抗原疫苗对EGFR-TKI耐药肺癌的作用及机制研究

目的通过采用肿瘤新抗原疫苗对产生表皮细胞生长因子受体-酪酸激酶抑制剂(EGFR-TKI)耐药性的肺癌大鼠模型进行治疗,并进一步探究其机制。方法采用胸部X射线照射,剂量为3 Gy,每周3次,构建大鼠肺癌模型,对EGFR-TKI治疗2周后,大鼠肿瘤大小不再减小,视为耐药性大鼠肺癌模型建立成功。采用标准的固相合成肽化学和反相高效液相色谱法合成和纯化多肽制备特异性新抗原,将大鼠肺癌EGFR-TKI耐药模型随机分为模型组、传统化疗组[采用传统一线联合化疗方式,先ip培美曲塞10 mg/(kg·d),再ip顺铂0.6 mg/(kg∙d),连续用药10 d],新抗原组(采用sc特异性新抗原进行化疗,剂量3 mL/只,连续用药2次)。PET-CT检测各组大鼠的肿瘤大小,苏木素-伊红(HE)染色观察组织病变情况,流式细胞术检测各组大鼠外周血淋巴细胞CD4^(+)、CD8^(+)、CD127^(+)表达,酶联免疫吸附实验检测外周血γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素(IL)-2、IL-5水平。结果新抗原组肿瘤质量显著低于模型组和传统化疗组(P<0.05),同时PET-CT扫描新抗原组肿瘤病灶出现缩小趋势;HE染色中,相比于模型组和传统化疗组,新抗原组肺组织中炎性浸润现象呈现显著下降趋势,同时新生毛细血管的增加量和肺泡腔的孔径呈现上升趋势;相比于模型组和传统化疗组,新抗原组大鼠外周血淋巴细胞中CD4^(+)、CD4^(+)/CD127^(+)、CD8^(+)/CD127^(+)的表达情况呈现显著升高,CD8^(+)的表达则显著降低(P<0.05);相比于模型组和传统化疗组,新抗原组大鼠外周血中IL-2、IFN-γ、IL-5水平显著下降(P<0.05)。结论采用肿瘤新抗原疫苗对EGFR-TKI耐药后肺癌大鼠模型进行干预,能够有效地缩减肿瘤质量,对肺部组织炎性病变程度起到一定的缓解作用,能够减轻炎症浸润情况,通过升高外周血淋巴细胞内CD4^(+)、CD4^(+)/CD127^(+)、CD8^(+)/CD127^(+),减少CD8^(+)因子的表达,起到免疫抑制作用。另外,新抗原疫苗能够降低外周血IFN-γ、IL-2、IL-5炎性因子水平,减轻肺部炎性程度。