全氟辛酸对HK-2细胞的毒性及对α-酮戊二酸盐受体1表达的影响

目的:研究全氟辛酸(perfluorooctanoic acid,PFOA)对HK-2细胞的毒性,及其对α-酮戊二酸盐受体1(oxoglutarate receptor 1,OXGR1)表达的影响。方法:采用MTT法检测不同浓度(0、0.1、1、10、100、1 000μmol/L)PFOA对HK-2细胞增殖的影响。RT-PCR法检测0、100、300μmol/L PFOA对HK-2细胞中OXGR1、琥珀酸盐受体1(succinate receptor 1,SUCNR1)、缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor 1α,HIF-1α)mRNA表达的影响。当PFOA为300或0μmol/L时,采用MTT法检测不同浓度(0、1、10、100、1 000、10 000μmol/L)OXGR1配基α-酮戊二酸钠(α-ketoglutarate sodium,AKG)对HK-2细胞增殖的影响。流式细胞术检测300μmol/L PFOA和100μmol/L AKG共同作用HK-2细胞48 h后细胞的凋亡情况。结果:在培养24 h条件下,PFOA达1 000μmol/L时可表现出毒性作用(P<0.01)。在培养48或72 h条件下,PFOA≥100μmol/L时表现出毒性作用(P<0.01)。RT-PCR结果显示,PFOA可上调HK-2细胞中OXGR1 mRNA表达(P<0.01),但对SUCNR1及HIF-1αmRNA表达无明显影响(P>0.05)。MTT及流式细胞术检测结果显示,AKG与PFOA可协同作用抑制HK-2细胞增殖(P<0.01)并诱导细胞凋亡(P<0.05)。结论:PFOA对HK-2细胞具有增殖抑制作用,并可上调细胞OXGR1 mRNA表达;PFOA可诱发HK-2细胞凋亡;AKG可与PFOA产生协同作用,该协同作用可能与OXGR1有关。

α-酮戊二酸盐对酿醋废水厌氧发酵产沼气的影响

酿醋废水接种活性污泥后在厌氧、37℃和120rpm条件下进行批培养,添加α-酮戊二酸盐(终浓度0.2g/L)促进甲烷菌的三羧酸循环碳代谢和胞内的镍同化作用,使同化镍含量比对照提高53.2%,这反映了以镍为中心离子的F430的合成和以F430为辅酶的甲基CoM还原酶活性得到增强,并最终从产气效率上反映出来,其添加α-酮戊二酸盐(终浓度0.2g/L)挥发性乙酸盐残留量比对照减少27.3%,而沼气总产量、TS和YP/V以及qp分别比对照提高了23.0%、11.1%、20.1%和10.7%,说明厌氧体系中添加α-酮戊二酸盐可以促进食醋废水中的乙酸底物代谢流向终产物甲烷而非仅用于菌群繁殖,α-酮戊二酸盐是通过提高菌群的甲烷合成能力来提高产气,而非仅通过促进菌群生长的群体优势。

α-酮戊二酸钠对转化生长因子β_1诱导的HK-2细胞上皮-间充质转分化的影响

目的探讨α-酮戊二酸钠对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的HK-2细胞上皮-间充质转分化(EMT)的影响。方法 TGF-β10.5,2和5μg.L-1分别作用于葡萄糖5和30 mmol.L-1培养的HK-2细胞72 h,通过RT-PCR法检测EMT标志物E-钙黏着糖蛋白和波形蛋白mRNA表达的变化,以选择EMT病变模型的最佳诱导条件。在此基础上,观察α-酮戊二酸钠10,100和500μmol.L-1对HK-2细胞EMT病变及G蛋白偶联受体80(GPR80)mRNA表达的影响。结果①在葡萄糖5和30 mmol.L-1条件下,当TGF-β1为5μg.L-1时,与对照组比较,E-钙黏着糖蛋白mRNA的降低和波形蛋白mRNA的升高最明显(P<0.01),表明HK-2细胞发生了典型的EMT病变;②选择TGF-β15μg.L-1和葡萄糖30 mmol.L-1制备EMT病变模型,同时加入α-酮戊二酸钠100和500μmol.L-1作用72 h,与模型组比较,E-钙黏着糖蛋白mRNA明显升高,波形蛋白mRNA明显降低,GPR80 mRNA表达增加(P<0.01),表明α-酮戊二酸钠可逆转HK-2细胞EMT的发生。结论在葡萄糖5和30 mmol.L-1培养条件下,TGF-β15μg.L-1作用72 h,HK-2细胞可出现典型的EMT病变;α-酮戊二酸钠对该病变具有抑制作用。

HTK液与含血心脏停搏液对复杂冠状动脉病变合并左心功能不全心肌的保护作用

目的比较组氨酸—色氨酸—酮戊二酸盐液(HTK液)与含血心脏停搏液对复杂冠状动脉病变合并左心功能不全心肌的保护作用。方法采用随机分组的方法将134例复杂冠状动脉病变合并左心功能不全的患者分为两组,每组67例,分别使用HTK液和含血心脏停搏液,比较两组手术前后血清心肌损伤标志物水平、钾、钠离子水平、心功能以及不良事件发生率。结果两组患者治疗前后以及主动脉开放12h、24h、72h肌钙蛋白、肌酸激酶同工酶、钾离子、钠离子、左心室射血分数、左心室收缩末期容积指数、左心室舒张末期容积指数等指标的差异具有统计学意义(P<0.05);两组患者主动脉阻断时间、主动脉开放到心脏复跳、体外循环时间、多巴胺用量比较差异有统计学意义(P<0.01);两组患者围术期不良事件发生情况差异有统计学意义(P<0.01)。结论 HTK液与含血心脏停搏液均可对复杂冠状动脉病变合并左心功能的不全的患者提供安全有效的心肌保护效果,但是HTK液的效果优于含血心脏停搏液,不良事件的发生率更低,安全性更高。

经保存的大鼠胚胎后肾同种腹腔内移植模型的建立

目的建立胚胎后肾大网膜内移植大鼠模型,并探讨其在受者体内生长、发育情况。方法取孕16d(E16)和17d(E17)的SD大鼠胚胎,切取胚胎后肾,以组氨酸色氨酸酮戊二酸盐液(HTK液)保存3d,然后移植到切除单侧肾脏的成年SD大鼠的大网膜内,另设未经保存的E16胚胎后肾直接移植对照组。术后给予环孢素A皮下注射,术后3～4周后开腹观察器官形成情况;术后8周,切除受者自体肾脏,观察移植后肾的组织学形态,测定后肾功能。结果移植后3周,移植后肾肾单位、集合管及输尿管的结构正常,组织中少有淋巴细胞浸润,电镜显示移植后肾发育的肾血管球细胞及基底膜、近端肾小管、远端肾小管和集合管上皮细胞超微结构正常。移植后8周,移植后肾的湿重、体积、分泌尿量及内生肌酐清除率与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论E16、E17胚胎后肾大网膜内移植,并辅以环孢素A皮下注射,可以形成器官,并发挥功能。