高湿环境对大鼠肝脏异柠檬酸脱氢酶及α-酮戊二酸脱氢酶的影响

目的观察高湿环境对肝脏异柠檬酸脱氢酶（IDH）与α-酮戊二酸脱氢酶（α-KGDHc）含量的影响。方法32只sD大鼠按随机数字表法分为常温常湿对照组及高湿环境20、30、40d组，每组8只大鼠。采用人工气候箱模拟高湿环境，条件设置为温度25℃、相对湿度90％～95％RH。实验组大鼠每天置于箱中10h，其余时间与常温常湿对照组饲养于清洁环境（温度22～26℃，相对湿度40％～60％RH）。动物模型制作完成后，取腹主动脉血及肝组织，酶联免疫法（EusA）检测肝脏组织IDH及α-KGDHc，比色法检测血清乳酸含量，并行肝组织HE病理切片观察。结果高湿环境20d组，肝脏IDH、α-KGDHc及血清乳酸含量较常温常湿对照组无显著变化。高湿环境30、40d组，肝脏IDH含量分别降至常温常湿对照组的75.98％和79.90％（P〈0.05），α-KGDHc含量分别降至常温常湿对照组的80.00％和81.01％（P〈0.05）。血清乳酸含量较常温常湿对照组分别升高了34.58％和23.33％（P〈0.01）。病理切片显示高湿环境40d大鼠肝脏点状坏死灶增多。结论高湿环境可致大鼠肝脏组织IDH、α-KGDHc含量降低，血乳酸升高，机体有氧代谢功能不足。

创伤性脑损伤大鼠脑组织中α-酮戊二酸脱氢酶的活性变化及意义

目的探讨创伤性脑损伤(TBI)大鼠脑组织中α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)活性变化及意义。方法将80只Sprague Dawley大鼠随机分为假手术组、TBI组、TBI-溶剂对照组、TBI-3-甲基-2-氧基戊酸(KMV)组,每组20只。TBI组、TBI-溶剂对照组和TBI-KMV组大鼠建立中度液压TBI模型,假手术组大鼠给予相同的手术步骤,但不实施液压冲击。TBI前24 h,TBI-KMV组大鼠侧脑室注射10μL KMV,TBI-溶剂对照组大鼠侧脑室注射10μL生理盐水,注射速度为lμL·min^-1;假手术组和TBI组大鼠侧脑室不做注射。分别于TBI后24、72 h及7 d时,每组随机选取5只大鼠,采用Shapira和Wahl脑损伤神经功能评分法进行神经功能评分,Morris水迷宫实验检测大鼠学习记忆功能;Morris水迷宫实验后快速断头处死大鼠,完整取出脑组织,迅速分离出损伤侧大脑皮层、海马及丘脑,采用比色法检测脑组织中α-KGDHC活性。TBI后72 h,每组随机选取5只大鼠,应用40 g·L^-1多聚甲醛溶液灌注固定,断头取脑组织,采用Fluoro-Jade染色液对坏死神经元进行染色并计数。结果TBI后24、72 h及7 d,TBI组和TBI-溶剂对照组大鼠神经功能评分显著低于假手术组(P<0.05),TBI-KMV组大鼠神经功能评分显著低于TBI-溶剂对照组和TBI组(P<0.05),TBI-溶剂对照组与TBI组大鼠神经功能评分比较差异无统计学意义(P>0.05)。TBI后24、72 h及7 d,TBI组和TBI-溶剂对照组大鼠登台时间及登台累计距离显著长于假手术组(P<0.05),TBI-KMV组大鼠登台时间及登台累计距离显著长于TBI-溶剂对照组和TBI组(P<0.05),TBI-溶剂对照组与TBI组登台时间及登台累计距离比较差异无统计学意义(P>0.05)。TBI后24、72 h及7 d,TBI组和TBI-溶剂对照组大鼠损伤侧大脑皮层、海马及丘脑组织中α-KGDHC活性显著低于假手术组(P<0.05),TBI-KMV组大鼠大脑皮层、海马及丘脑组织中α-KGDHC活性显著低于TBI组和TBI-溶剂对照组(P<0.05),TBI-溶剂对照组与TBI组大鼠大脑皮层、海马及丘脑组织中α-KGDHC活性比较差异无统计学意义(P>0.05)。TBI后72 h,TBI组和TBI-溶剂对照组大鼠损伤侧大脑皮层、海马和丘脑坏死神经元数显著多于假手术组(P<0.05),TBI-KMV组大鼠损伤侧大脑皮层、海马和丘脑坏死神经元数显著多于TBI组和TBI-溶剂对照组(P<0.01),TBI组与TBI-溶剂对照组大鼠损伤侧大脑皮层、海马和丘脑坏死神经元数比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论TBI大鼠脑组织中α-KGDHC活性降低,抑制α-KGDHC活性可加重脑损伤,α-KGDHC可能参与了TBI和继发性脑损伤的发生与发展。

低温对脑缺血-再灌注大鼠α-酮戊二酸脱氢酶复合物活性及脑梗死体积的影响

目的观察不同温度下脑缺血-再灌注大鼠线粒体α-酮戊二酸脱氢酶复合物(α-KGDHC)活性及脑梗死体积的变化,进一步探讨不同低温的神经保护机制。方法取雄性SD大鼠35只,按随机数字法分为假手术组(n=5)及大脑中动脉闭塞2h再灌注组(n=30),后者根据再灌注时温度的不同,再分为37℃、33℃及28℃组(n=10)。采用线栓法制备脑缺血-再灌注大鼠模型,再灌注时利用降温毯降温,使肛温分别保持37℃、33℃及28℃,时间为3 h。在缺血后24h时检测各组大鼠双侧大脑皮质和海马区线粒体α-KGDHC活性及脑梗死体积。结果①假手术组、37℃组、33℃组、28℃组缺血侧皮质α-KGDHC分别为(20.1±1.3)、(9.5±0.9)、(15.2±1.1)、(5.5±1.2)mU/mg(蛋白);海马区为(17.1±1.1)、(8.1±1.1)、(12.2±1.0)、(4.1±1.1)mU/mg(蛋白)。33℃组与37℃组和28℃组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。②37℃组脑梗死的体积最大,占对侧大脑半球的(48.2±1.1)%,33℃组梗死体积最小,占(31.6±1.3)%,28℃组占(34.8±1.2)%,三组比较差异有统计学意义(P<0.01)。结论提高缺血-再灌注大鼠线粒体α-KGDHC活性是低温干预的神经保护作用机制之一。33℃低温比28℃低温有更好的效果。

α-酮戊二酸脱氢酶复合物在缺血性脑卒中后的适应性再灌注中的保护作用研究

目的:研究α-酮戊二酸脱氢酶复合物(α-KGDHC)在大鼠缺血性脑卒中后的适应性再灌注中的保护作用,且探讨其作用机制。方法:建立脑中动脉闭塞(middle cerebral artery occlusion,MCAO)大鼠的缺血/再灌注(ischemia/reperfusion,I/R)模型,TTC染色后使用成像软件计算缺血后的脑梗死体积。化学方法检测α-KGDHC活性,评估α-KGDHC活性随脑缺血时间的变化趋势,并比较普通再灌注组和适应性再灌注组的差异;用CoCl 2处理大鼠神经母细胞瘤细胞B35和人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y模拟细胞缺氧,用E1K siRNA抑制α-KGDHC活性,Western blot检测凋亡抑制蛋白Bcl-2,促凋亡蛋白Bax和Caspase 3的表达变化。结果:在MCAO模型中适应性再灌注较普通再灌注进一步减少了脑梗死体积(P<0.05),凋亡蛋白Caspase 3表达量降低;大脑皮层和海马脑组织中α-KGDHC活性随着缺血时间延长而降低(P<0.05),适应性再灌注抑制了α-KGDHC活性衰减的速率(P<0.05)。通过干扰α-KGDHC的组分E1K可以抑制Bcl-2的表达(P<0.05),促进Bax的表达(P<0.05)和Caspase 3的表达(P<0.05)。结论:研究表明,α-KGDHC是脑缺血后适应性再灌注脑保护作用的重要因子,其发挥脑保护作用可能与抑制凋亡通路的活化有关。

钙浓度对聚谷氨酸合成通路中α-酮戊二酸脱氢酶的表达调控

本文研究了钙离子在纳豆芽孢杆菌HSF1410发酵聚谷氨酸过程中对α-酮戊二酸脱氢酶调控机制。实验发现,随着发酵液中添加钙离子浓度不断增大,ogdh基因转录水平也逐渐提高,进而提高酶表达量、增强酶活、提高聚谷氨酸产量。本实验为下一步从分子生物学角度研究聚谷氨酸合成途径与调节机制提供思路。

亚低温对创伤性脑损伤后线粒体α-酮戊二酸脱氢酶活性的影响

目的研究亚低温对脑损伤后病理学,α-酮戊二酸脱氢酶(α-ketoglutarate dehydrogenase complex,α-KGDHC)活性以及Caspase-3活性的影响。方法雄性SD大鼠50只随机分七组：假手术组(n=5),液压脑损伤常温组(1．8～2．2atm)(n=25),液压脑损伤亚低温组(n=20)。常温组伤后6h,24h,72h,7d检测创伤侧皮层、海马及丘脑线粒体α-KGDHC活性及Caspase-3的活性。伤后15min应用亚低温,30min内脑温降至33℃并维持4h,检测24h及72h酶活性以及Caspase-3的活性。以及亚低温对损伤后24h皮层丘脑及海马CA3区神经病理的影响。结果Fluoro-jade染色显示亚低温显著减少损伤后24h坏死神经元数目(P＜0．05),伤后24h及72h KGDHC酶的活性显著增加(P＜0．05)。伤后24h Caspase-3的活性显著降低(45%)。结论创伤性脑损伤后早期亚低温能够恢复能量代谢酶的活性,抑制神经元凋亡,减轻损伤后神经元的变性。

补肾、健脾、活血法对骨质疏松症小鼠骨骼、骨骼肌α-酮戊二酸脱氢酶的影响

目的:观察中医不同治法对骨质疏松症小鼠骨骼、骨骼肌α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC)含量变化的影响。方法:除正常组外,将护骨素(OPG)基因敲除小鼠随机分为模型组、补肾组、健脾组、活血组和福善美组。测定小鼠骨骼、骨骼肌α-KGDHC含量变化。结果:与正常组比较,模型组、健脾组、活血组小鼠骨骼、骨骼肌的α-KGDHC显著降低(P<0.01);与模型组比较,补肾组和福善美组小鼠骨骼、骨骼肌的α-KGDHC明显升高(P<0.01)。结论:①骨质疏松症的形成,可能与骨骼、骨骼肌α-KGDHC含量异常变化有关。②补肾、健脾方法通过提高骨质疏松症小鼠的骨骼、骨骼肌α-KGDHC,对骨质疏松症具有一定的防治作用。

光滑球拟酵母中α-酮戊二酸脱氢酶系生理作用解析

【目的】研究α-酮戊二酸脱氢酶系在光滑球拟酵母碳代谢流、能量代谢和氨基酸代谢中的生理作用。【方法】通过敲除光滑球拟酵母中编码α-酮戊二酸脱氢酶系中E1酶的基因kgd1,构建α-酮戊二酸脱氢酶活性缺失菌株T.glabratakgd1::kan,并考察KGDH缺失引起TCA循环关键酶活性,碳代谢流量以及胞内氨基酸和能荷水平等方面的变化。【结果】光滑球拟酵母中α-酮戊二酸脱氢酶活性的缺失导致:(1)细胞启动乙醛酸途径,通过形成TCA-乙醛酸循环实现TCA循环的正常代谢;(2)胞内NADH/NAD+水平下降33.7%,ATP/ADP水平下降31.8%,而与NADH代谢相关的丙酮酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶和苹果酸脱氢酶的活性分别提高58.1%、33.3%和32.5%;(3)胞内丙酮酸含量下降50.1%,而胞内琥珀酸、苹果酸和α-酮戊二酸含量则分别增加了172.7%、66.1%和41.1%;(4)丙酮酸族氨基酸含量下降29.3%,而胞内谷氨酸族氨基酸和天冬氨酸族氨基酸含量则提高了34.7%和26.8%。【结论】上述研究结果表明,α-酮戊二酸脱氢酶系在微生物细胞中心碳代谢、能量代谢和氨基酸代谢中发挥着重要作用。

α-酮戊二酸半醛脱氢酶的定点突变及酶学性质变化

3-HP是一种性质优良的化学中间体,以甘油为底物生产3-HP的研究备受青睐,而限制3-HP产量的主要原因是Ald H活力过低。对源于Azospirillam brasilense的α-酮戊二酸半醛脱氢酶(KGSADH)基因同源建模和结构分析,采用定点突变方法得到高活力KGSADH,将突变酶表达纯化,探讨酶学性质的变化。结果表明,TU-KGSADH(E120D/P219A)酶活力达6.03U/mg,比原始酶比酶活提高了322%,最适温度由35℃降低为30℃,且热稳定性降低,最适p H为8.0,在p H 6.0-8.0条件下酶活力有所提高。Zn^(2+)对KGSADH的酶活有较强的抑制作用,而Co^(2+)、Fe^(3+)、Fe^(2+)对KGSADH的酶活有较大的激活作用。在酶的动力学方面,TU-KGSADH对乙醛的K_m由7.58降为6.28 mmol/L,V_(max)由10.6提高为12.3 U/mg。对酶学性质改变的因素分析发现,120位突变与最适p H下降和p H稳定性向酸性偏移有关,219位突变可能是最适温度和热稳定性降低的原因,为醛脱氢酶进一步定向改造提供参考。

ICL、ICDH、ODH和GDH酶与L-谷氨酸的合成

通过对对数生长期细胞的异柠檬酸裂解酶(ICL)、异柠檬酸脱氢酶(ICDH)、α-酮戊二酸脱氢酶(ODH)和谷氨酸脱氢酶(GDH)的分析以及对细胞L-谷氨酸产生量和发酵残糖的综合分析,发现由于乙醛酸循环关键酶ICL的缺失,L-谷氨酸产生量大幅下降,说明乙醛酸循环是谷氨酸棒杆菌中的主要回补途径,L-谷氨酸合成需要乙醛酸循环。在保证乙醛酸循环回补功能的前提下,提高ICDH活性,减弱ODH活性,有利于L-谷氨酸的合成。

α-KGDHC酶活性及琥珀酰化修饰对缺血性脑卒中的适应性再灌注大鼠脑保护的机制研究

目的:探究α-酮戊二酸脱氢酶复合物(α-KGDHC)活性及琥珀酰化修饰对缺血性脑卒中的适应性再灌注(AR)大鼠脑保护的机制研究。方法:从50只雄性清洁级大鼠中随机选取10只作为Sham组(仅分离颈动脉,不结扎),其余大鼠通过结扎颈动脉建立脑缺血模型。35只大鼠建模成功后进行再灌注,将其随机分为4组,普通再灌注(NR)组、AR组、NR+3-甲基-2-氧代戊酸(KMV)组、AR+KMV组,其中AR+KMV组8只,其余各组9只。NR组为完全开放脑血流量,AR组仅开放1/2脑血流量,再灌注后NR+KMV组、AR+KMV组腹腔注射10μL的KMV(0.2 mol/L),未给予KMV的各组注射等量的生理盐水。灌注完成后,检测大鼠α-KGDHC活性,分析比较脑梗区域占比,并分析蛋白质琥珀酰基表达量。结果:各组α-KGDHC活性、脑梗区域占比及赖氨酸琥珀酰基表达量,经方差分析,差异均有统计学意义(P<0.05);与Sham组比较,NR组α-KGDHC活性及赖氨酸琥珀酰基表达量低,脑梗区域占比高(P<0.05);与NR组比较,AR组α-KGDHC活性及赖氨酸琥珀酰基表达量高,脑梗区域占比低,NR+KMV组α-KGDHC活性及赖氨酸琥珀酰基表达量低,脑梗区域占比高(P<0.05);与AR组比较,AR+KMV组α-KGDHC活性及赖氨酸琥珀酰基表达量低,脑梗区域占比高(P<0.05)。结论:α-KGDHC酶活性及琥珀酰化修饰能够改善缺血性脑卒中大鼠的AR损伤,对脑组织起到保护作用。

维生素B_(1)在中枢认知功能中的作用研究进展

维生素B_(1),又称为硫胺素,是影响脑能量代谢的关键物质。硫胺素的代谢物焦磷酸硫胺素是糖酵解、三羧酸循环及磷酸戊糖旁路的三种关键酶(丙酮酸脱氢酶复合体、α-酮戊二酸脱氢酶复合体和转酮醇酶)的辅因子。脑内硫胺素水平以及硫胺素依赖酶的活性和表达会影响脑内能量代谢,进而影响中枢神经系统的认知功能。补充硫胺素对中枢神经认知功能异常有改善作用。本文对近年来相关的研究进展进行综述,以阐明脑内硫胺素缺乏及硫胺素依赖酶的功能与表达的损伤对中枢认知功能的影响,为脑能量代谢障碍的相关研究提供参考。

高温对大鼠组织CS、OGDH含量和下丘脑线粒体数量的影响

为了解高温环境对正常大鼠和中枢麻醉大鼠腓肠肌、肝组织柠檬酸合酶(CS)、酮戊二酸脱氢酶(OGDH)含量和下丘脑线粒体数量等能量代谢指标的影响。将40只SPF级SD大鼠,随机分为常温正常对照组(常对组)、高温正常对照组(高对组)、常温中枢麻醉组(常麻组)、高温中枢麻醉组(高麻组),连续饲养30d后测定大鼠葡萄糖(GLU)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)和腓肠肌、肝组织CS、OGDH含量,并观察下丘脑线粒体数量。结果显示,高对组和高麻组的体重和肝组织OGDH的含量、常麻组和高麻组血清TC、高对组和常麻组肝组织CS的含量均显著下降(P<0.01,P<0.05),而高对组和高麻组血清TG和腓肠肌OGDH的含量、常麻组和高麻组腓肠肌CS的含量和下丘脑线粒体数量均显著升高(P<0.01,P<0.05);与常麻组比较,高对组和高麻组的体重和肝组织OGDH的含量、高对组腓肠肌CS的含量和下丘脑线粒体数量均显著下降(P<0.05,P<0.01),但高对组和高麻组血清TG的含量、高麻组肝组织CS的含量显著升高(P<0.05,P<0.01)。由此认为,高温可降低大鼠体重、血清TC、肝组织OGDH含量,增高血清TG、腓肠肌OGDH、CS含量,中枢神经麻醉对以上结果均有一定的协同作用;中枢神经麻醉可显著增加大鼠下丘脑线粒体数量,高温环境对其增加有一定协同作用。

肉毒碱的代谢作用及在运动实践中的应用

近年来,肉毒碱的补充对运动实践中的应用价值引人注意,不断有人从理论和实践使用中进行探讨。本文将着重介绍其概况。一、肉毒碱的生物合成途径和组织间的转运肉毒碱系季胺（β-羟-γ-三甲基-氨基丁酸）,结构式为（CH3）N+-CH2-CH-CH2-COO- 分子量161.20 （一）肉毒碱的组织中合成人类体内仅有肝、肾和脑组织中有完全合成肉毒碱的功能,以肝、肾两种器官为主要。合成肉毒碱的原料是两种必需氨基酸赖氨酸和甲硫氨酸,还需要维生素C、尼克酸。

构建OGDH基因敲除型SD大鼠模型

目的构建酮戊二酸脱氢酶(OGDH)基因敲除SD大鼠模型。方法设计、构建TALEN重组子,用荧光素酶活性法筛选出最有效重组子,显微注射法将质粒打入受精卵后测序鉴定。对同一时间点的野生型和基因敲除型大鼠分别进行饮食习惯、活动状态、毛发颜色及质量检测,Western Blot检测两者肝组织OGDH蛋白表达。结果成功构建了靶向OGDH基因的TALEN质粒,并筛选了最有效的TALEN重组子(OGDH-T2),成功培育出杂合子18只,成功率为22.5%,未发现OGDH-KO8纯合子的出生。质量检测显示OGDH-KO8大鼠的质量明显高于野生型,且在第10周时最为显著,增幅率达50.2%(P<0.001),KO组大鼠的OGDH蛋白表达水平显著降低,下降率为50.6%(P<0.01)。结论利用TALEN技术成功构建了OGDH基因敲除型SD大鼠模型。

马来酸桂哌齐特对大鼠颅脑损伤的作用

目的:探讨新型脑血管治疗药物马来酸桂哌齐特注射液(克林澳)对创伤性脑损伤后病理组织学、活化部分凝血活酶时间(APTT)及线粒体酶活性的影响。方法:Sprague-Dawley大鼠随机分3组:假手术组(n=10);液压(压力1.8～2.2atm)脑损伤对照组(n=20):创伤后30min和24h尾静脉注射生理盐水0.5ml;液压脑损伤药物组(n=20):创伤后30min和24h尾静脉注射克林澳3.0mg/kg。于损伤后72h检测创伤侧皮层、海马组织病理损伤,同时检测不同时间点出凝血系列指标以及代谢关键酶α-酮戊二酸脱氢酶(KGDHC)的活性变化。结果:脑损伤后72h血液呈高凝状态,APTT显著低于对照组(P<0.05),α-KGDHC活性显著降低(P<0.05),应用克林澳后出凝血指标与对照组差异无显著性,而α-KGDHC活性显著增高,神经元损伤显著减轻。药物组的皮层和海马神经元计数较对照组分别增加51%和35%(P<0.05)。结论:脑损伤后早期应用克林澳不改变血液学特性,但对代谢酶有显著影响,减轻神经元损伤。

低氧训练对骨骼肌p53及其调控的线粒体有氧代谢信号通路基因表达的影响

目的:探讨低氧训练对大鼠骨骼肌p53及其调控的线粒体有氧代谢信号通路基因表达的影响,以及对线粒体有氧氧化供能能力的影响。方法:30只雄性Wistar大鼠随机分为3组(n=10),低住低练组(LoLo)、高住高练组(HiHi)和高住高练低训组(HiHiLo)。以当地海拔1500 m为常氧环境,模拟海拔3500 m为低氧环境,各组大鼠按训练方案训练5周后,取股四头肌行匀浆及提取线粒体。Real-time PCR检测p53、细胞色素c氧化酶合成2(SCO2),细胞色素c氧化酶亚基Ⅰ(COXⅠ)和谷氨酰胺酶2(GLS2)mRNA表达,Westem blot检测p53、SCO2、COXⅠ和GLS2蛋白表达;ELISA测定α-酮戊二酸脱氢酶(α-KGDHC),细胞色素c氧化酶(COX)及ATP合酶(ATP synthase)活性。结果:①与LoLo组比较,HiHi和HiHiLo组p53 mRNA水平显著升高(P<0.01),HiHiLo组p53蛋白表达水平显著下降(P<0.01);HiHi和HiHiLo组SCO2 mRNA水平和蛋白表达水平均显著升高(P<0.01);HiHiLo组COXⅠmRNA水平显著升高(P<0.01),HiHi组显著降低(P<0.01),HiHi组COXⅠ蛋白表达水平显著升高(P<0.05);HiHi和HiHiLo组GLS2 mRNA水平均显著升高(P<0.05,P<0.01),HiHiLo组GLS2蛋白表达水平显著下降(P<0.01)。②与LoLo组比较,HiHi组ɑ-KGDHC和COX活性均显著降低(P<0.01,P<0.05),HiHiLo组均显著升高(P<0.01);HiHi和HiHiLo组ATP synthase总活性和特异性活性均显著升高(P<0.01)。结论:高住高练低训上调大鼠骨骼肌p53及其调控的线粒体有氧代谢信号通路相关因子基因转录水平,提高骨骼肌线粒体有氧氧化供能能力。

人铁调节蛋白1依靠其亚细胞定位进行折叠和转换

顺乌头酸酶是不同生物体中催化柠檬酸盐和异柠檬酸盐的相互转变的铁-硫水解酶。真核生物中的顺乌头水解酶具有额外角色，如多细胞生物双重活性细胞溶质顺乌头酸酶-铁调节蛋白1。在酵母线粒体中这种蛋白质的产生用于检测某些特定细胞器中铁调节蛋白1的折叠，这些细胞器是硫铁蛋白合成的部位。人铁调节蛋白1的这种行为类似于酵母和人类的真正的线粒体顺乌头酸酶。所有在酵母线粒体中的酶都是有活性的，但在电子显微镜观察下铁调节蛋白1形成高密度颗粒。纯化的包涵体进行MS分析证实了人铁调节蛋白1和酮戊二酸脱氢酶合成元件1，一个酮戊二酸脱氢酶亚单位的存在。酮戊二酸脱氢酶合成元件1触发线粒体聚集物的形成，因为后者在酮戊二酸脱氢酶合成元件1-突变体中缺乏，使得聚集物形成不像在细胞溶质中那么有效。对经过纯化的线粒体进行元素分析可知，虽在线粒体中铁调节蛋白1的铁结合量和硫铁簇合成迅速，但这种高密度颗粒含铁并不充足。数据表明，具有双重活性的细胞溶质铁调节蛋白1顺鸟头酸酶的适当折叠在线粒体中比在真正线粒体顺鸟头酸酶少。此外，有效清除聚集铁调节蛋白1-酮戊二酸脱氢酶合成元件1复合物，并不发生在细胞器中，这就强调分子的相互作用决定了铁调节蛋白1的命运。此外，人铁调节蛋白1的正确折叠相对于其他顺乌头酸酶家族的成员来说很大程度上决定于它所在的细胞环境。

吐温-80对钝齿棒杆菌产L-赖氨酸的影响

对吐温-80提高L-赖氨酸产量的分子机制进行探究。以钝齿棒杆菌MT-M4Δpro B为出发菌株,在菌株生长至对数初期36 h时,添加5 mg/m L吐温-80进行摇瓶发酵,通过反转录实时荧光定量聚合酶链式反应(reverse translate?real-time?fluorescence?quantitative?polymerase?chain?reaction,RT-q PCR)监控相关基因的转录水平、胞内的还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(nicotinamide adenine dinucleotide phosphate reduced form,NADPH)水平及α-酮戊二酸脱氢酶复合物(α-oxoglutarate dehydrogenase complex,ODHC)的活力。摇瓶发酵结果表明,添加吐温-80使L-赖氨酸产量提高了215%;RT-q PCR结果表明,编码ODHC的基因odh A、suc B和lpd A、参与ODHC调控的基因pkn G、dts R和ppp以及合成NADPH的磷酸戊糖途径基因zwf的转录水平均发生了变化,其中odh A、suc B、lpd A、pkn G及dts R1基因分别发生了上调,ppp基因下调,相应ODHC活力提高了32.9%;zwf基因上调了17.6倍,相应胞内NADPH水平提高了137%。因此,在对数生长初期36 h添加吐温-80具有双重功效,既提高了ODHC的表达又使NADPH积累,从而诱导L-赖氨酸的高产。