运动与δ-氦基-γ酮戊酸合成酶的调节作用

运动与δ-氦基-γ酮戊酸合成酶的调节作用华东师范大学体育系生化室（上海２０００６２）丁树哲，许豪文血红素是体内血红蛋白、细胞色素类及肌红蛋白等的辅基，是含铁的叶琳类化合物。机体的运动能力，特别是耐力运动能力与血红素的代谢关系非常密切。－氨基酮戊酸合成酶...

δ-氨基-γ-酮戊酸合成酶(ALAS)基因的克隆与原核表达

为获得ALAS的重组表达蛋白,以人肝脏组织cDNA为模板,通过PCR扩增得到ALAS全长片段并测序,成功构建了pET30a(+)-ALAS融合表达载体并转化大肠杆菌Rosetta(DE).IPTG诱导融合蛋白表达.SDS变性凝胶电泳结果显示,融合蛋白的分子量约70kDa,并且在上清液中有少量表达.经镍柱一步纯化得到His6-ALAS融合蛋白.

中国北方汉族男子ALAS_2基因复合重复多态性分布及与HiHiLo训练敏感性的关联性研究

目的:探讨δ-氨基γ-酮戊酸合成酶2(ALAS2)基因复合重复多态性在中国北方汉族男性中的分布特征及其与Hi HiLo训练敏感性的关联性。方法:①选取244名中国北方汉族男性健康受试者,观察A-LAS2基因第7内含子中复合二核苷酸重复多态的频率分布;②从上述受试者中选取72名再进行4周高住高练低训(Hi HiLo),方案为每日在低氧环境(相当于海拔3000米)中休息10h,每周进行3次低氧下(相当于海拔2500米)75%V.O2max强度蹬功率自行车训练,其余时间在常氧下训练;测定受试者Hi HiLo前后V.O2max等相关生理指标。使用GeneScan和测序方法分析该基因多态性的分布特征,并进行该多态与Hi HiLo训练敏感性的关联性分析。结果:(1)在中国北方汉族男性中观察到13种基因型,其中分布频率较高的是164bp、166bp、168 bp、170bp和172 bp;(2)选取的72名受试者进行Hi HiLo训练,按照分割点法划分基因型及分组分析,发现按166 bp长度划分时,≤166 bp基因型携带者训练后△V.O2max、△rV.O2max均非常显著性高于>166 bp基因型携带者(P<0.01)。结论:ALAS2基因复合重复多态与男性Hi HiLo训练敏感性有关联,可作为预测Hi HiLo训练敏感性的分子遗传学标记。

miR-330-3p调控ALAS2在红细胞分化中的作用

目的探讨miR-330-3p在红细胞分化中的作用和机制。方法胚胎干细胞诱导分化为红系细胞,分别测定0 d、7 d、14 d、21 d miR-330-3p和ALAS2表达水平。比较红系细胞(K562细胞)和非红系细胞(HELA细胞)miR-330-3p和ALAS2表达差异。K562分转染miR-330-3p抑制物组、miR-330-3p模拟物组,考察miR-330-3p对ALAS2表达的影响。K562分别进行ALAS2过表达和ALAS2过表达+miR-330-3p模拟物共转染,考察对Ferritin蛋白和HO-1蛋白表达的影响。结果随分化时间增加,ALAS-2蛋白表达逐步增高(F=29.124,P=0.000),miR-330-3p表达逐步下降(F=21.323,P=0.000);K562细胞ALAS-2蛋白水平显著高于HELA细胞(t=6.977,P=0.002),K562细胞miR-330-3p水平显著低于HELA细胞(t=4.538,P=0.011);转染miR-330-3p inhibitor后,ALAS2蛋白表达上调(t=6.977,P=0.002),miR-330-3p表达下调(t=4.397,P=0.012);转染miR-330-3p模拟物后,ALAS2蛋白表达下调(t=18.971,P=0.000),miR-330-3p表达上调(t=3.910,P=0.017)。过表达ALAS2,Ferritin蛋白表达下调(t=2.170,P=0.032),HO-1蛋白表达上调(t=3.755,P=0.020);ALAS2过表达和miR-330-3p模拟物共转染,Ferritin蛋白表达上调(t=3.791,P=0.019),HO-1蛋白表达下调(t=3.618,P=0.022)。结论 miR-330-3p可能通过调控ALAS2转录,进而影响Ferritin和HO-1的表达,发挥促进红系细胞分化的作用。

一个遗传性铁粒幼细胞贫血家系ALAS2基因K156E突变报道并文献复习

目的报告一个遗传性铁粒幼细胞贫血（CSA）家系并进行文献复习，以提高对CSA发病机制及其治疗的认识。方法检测先证者及其家族成员外周血血常规及铁代谢相关指标；应用基因组-DNAPCR技术扩增先证者及其家族成员6-氨基v酮戊酸合成酶2（ALAS2）基因第1-11号外显子，应用直接测序法检测外显子突变状态，采用T载体连接测序鉴定其突变类型。结果先证者血常规检查示小细胞低色素性贫血（血红蛋白84g／L、红细胞平均体积64fl、红细胞平均血红蛋白含量16．5Pg），血清铁44．7μmol／L、血清铁蛋白3123μg／L，转铁蛋白饱和度O．84。基因分析显示先证者与先证者母亲、胞妹及侄女ALAS2基因第5号外显子466碱基A〉G杂合突变，引起156位氨基酸由赖氨酸转变为谷氨酸。家系成员分析示该家系为x-连锁铁粒幼细胞贫血（XLSA），男性ALAS2基因突变半合子发病，女性该基因突变携带者均无贫血表现，仅有红细胞分布宽度的异常。先证者接受持续1年的维生素B。联合去铁治疗，血红蛋白升至98g／L，血清铁蛋白降至1580μg／L。结论该家系为中国一新发现的XLSA家系，ALAS2基因K156E突变为其致病基因；CSA的诊断有赖于相关基因突变分析，维生素B。是CSA的首选治疗药物。

中国北方汉族男子ALAS_2基因复合重复多态性与HiHiLo训练后左心室结构功能的关联性研究

目的：探讨δ-氨基γ-酮戊酸合成酶2（ALAS2）基因复合重复多态性与高住高训低练（HiHiLo）训练后左心室结构功能的关联性。方法：选取72名中国北方汉族男性健康受试者进行4周高住高练低训（Hi-HiLo）,方案为每日在低氧环境（O2浓度为14.5%~14.8%,相当于海拔3000 m）中休息10 h,每周进行3次低氧下（O2浓度为15.4%,相当于海拔2500 m）75%.VO2max强度蹬功率自行车训练,其余时间在常氧下训练;测定受试者HiHiLo前后不同状态下左心室结构功能等指标。使用GeneScan和测序方法分析该基因多态性的分布特征,并进行该多态与HiHiLo训练敏感性的关联性分析。结果：HiHiLo后,≤166bp组在安静及不同运动负荷下每博输出量的增加幅度（△b-SV、△b-SVI、△100W-SV、△100W-SVI）显著性低于〉166 bp组（P〈0.05）;≤166 bp组在安静及不同运动负荷下心输出量的下降幅度（△b-CO、△50W-CO、△100W-CO、△150W-CO、△b-COI、△50W-COI、△150W-COI）、射血分数的下降幅度（△100W-EF）、心率的下降幅度（b-△HR、50W-△HR、100W-△HR、150W-△HR）均显著性高于〉166bp组（P〈0.05）。结论：ALAS2基因复合重复多态中≤166bp基因型在心脏功能指标中HiHiLo训练敏感性最高,可作为预测HiHiLo训练后左心室功能变化的分子遗传学标记。

ALAS2基因复合重复多态性与心脏功能表型的关联性研究——以中国北方汉族男子为例

目的:探讨中国北方汉族男性δ-氨基γ-酮戊酸合成酶2(ALAS2)基因复合重复多态性与心脏功能表型的初始值与耐力训练效果的关联性。方法:选取102名中国北方汉族新兵健康受试者,进行18周的5 000 m跑训练。测定训练前后安静、次最大负荷下(50 w、100 w、150 w)及恢复期的心脏结构与功能指标。使用GeneScan和测序方法分析该基因多态性的分布特征,并进行该多态与上述生理指标等关联性分析。结果:1)按照分割点法划分基因型及分组分析,发现按166 bp长度划分时,≤166 bp基因型的左心室结构指标(EDD、LVM)及不同负荷下的每搏量和每搏量指数(b-SV、50W-SV、100W-SV、150W-SV、b-SVI)、心动周期等初始值均显著性高于>166 bp基因型(p<0.05);2)≤166 bp基因型在次最大负荷(50 W)下的心输出量及心指数下降幅度高于>166bp基因型,但无统计学差异(p<0.1)。结论:ALAS2基因复合重复多态与中国北方汉族男性心脏功能的初始水平存在关联,与耐力训练效果无关联。

X连锁显性遗传性原卟啉症一家系及ALAS2基因突变分析

目的：报道中国人X连锁显性遗传性原卟啉症一家系，并对其5-氨基酮戊酸合成酶2（ALAS2）基因突变进行研究。方法收集该家系成员资料，进行临床调查。用二代测序方法检测后再行Sanger测序，测定该家系中患病者及部分表型正常者ALAS2致病基因。用皮肤镜观察皮肤卟啉皮损，根据Fotofinder系统和甚高频皮肤超声系统评估皮肤卟啉症的光损伤严重程度，对该家系成员做肝胆B超检查，同时检测血液学改变。结果该家系中所有患者X染色体的1706号到1709号碱基发生AGTG缺失，导致转录时移码突变，最终导致翻译得到的ALAS2酶C端19、20个残基替换或缺失，ALAS2酶活性升高。XLDPP患者皮肤光损伤显著，肝胆可出现卟啉损伤，随年龄增加而加重，可出现贫血和铁过载。结论 X染色体1706-1709碱基AGTG缺失突变可能是该ALDPP家系患者的发病原因。