7-酮胆固醇诱导巨噬细胞凋亡与NF-κB

目的:探讨7-酮胆固醇(7KC)诱导的巨噬细胞凋亡与核因子κB(NF-κB)的关系。方法:7KC刺激体外培养的巨噬细胞J774A.1。H-E染色观察细胞形态,应用MTT法、流式细胞术检测在有无NF-κB抑制剂PDTC参与下的细胞凋亡情况。结果:7KC抑制J774A.1细胞增殖,诱导巨噬细胞凋亡甚至死亡,PDTC减弱7KC诱导的凋亡作用。结论:7KC诱导巨噬细胞凋亡。活化的NF-κB介导7KC诱导巨噬细胞凋亡。

高效液相色谱法定量分析人胎肝细胞上清液及细胞裂解液中7-酮基胆固醇

用高效液相色谱法定量分析了７－酮基胆固醇在胎肝细胞上清液及细胞裂解液中的含量。色谱柱为μ－ＰｏｒａｓｉｌＳｉＯ２柱，流动相为正己烷∶异丙醇（９１∶９，Ｖ／Ｖ）。方法回收率高、色谱重复性好。

人血浆7α-羟基-4-胆固醇烯-3-酮及胆汁酸的超高效液相色谱-串联质谱定量方法研究

目的·建立人血浆中7α-羟基-4-胆固醇烯-3-酮(7α-hydroxy-4-cholesten-3-one,C4)以及胆酸(cholic acid,CA)、鹅去氧胆酸(chenodeoxycholic acid,CDCA)的定量方法。方法·采用乙腈提取人血浆中C4、CA、CDCA,利用超高效液相色谱-串联质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,UPLC-MS/MS)技术,通过内标校正的标准曲线法定量C4、CA、CDCA含量。结果·经方法学验证,C4、CA、CDCA的检出限(limits of detection,LOD)分别为0.16、0.02、0.04 nmol/L,均具有良好的线性关系(均R2>0.998);重复性的相对标准偏差(relative standard deviation,RSD)均低于3.0%;日内及日间精密度的RSD均小于6%;4℃保存7 d结果稳定,RSD均小于10%;C4、CA和CDCA的平均加标回收率分别为97.7%、113.3%、105.0%。结论·该方法具有较高的检测灵敏度、良好的精密度和稳定性,可用于血浆生物样本的定量检测。

7-酮基胆固醇诱导心肌细胞凋亡的作用研究

目的研究不同浓度的7-酮基胆固醇(7-ketocholesterol,7-keto)对心肌细胞凋亡的影响。方法采用荧光染料Hoechst33342染核的方式观察7-keto对心肌H9C2细胞凋亡形态学的影响,采用乳酸脱氢酶(LDH)试剂盒检测7-keto对心肌H9C2细胞LDH释放的作用。结果 Hoechst33342形态学观察结果显示:7-keto 25μmol/L时,细胞开始呈现数目减少,形态改变如核浓缩和DNA碎裂的凋亡形态。50μmol/L和100μmol/L时,一个光镜视野下,细胞密度极度下降,DNA荧光碎片增多。LDH定量分析结果显示:7-keto 25μmol/L,50μmol/L和100μmol/L浓度依赖性的增加LDH的释放量。结论 7-keto诱导心肌细胞发生凋亡,其作用可能与增加LDH的释放有关。

胆固醇氧化衍生物在动脉粥样硬化中的研究进展

胆固醇氧化衍生物多达上百种。具有代表性质的胆固醇氧化衍生物主要有7-酮基胆固醇、7-酮基胆甾醇-9-羧基壬酸酯、25-羟基胆固醇、7β-羟基胆固醇、3β,5α,6β-三羟基胆固烷等化合物,这些衍生物广泛存在于胆固醇膳食、高胆固醇血症的血浆、动脉组织、人动脉粥样硬化斑块、斑块内的泡沫细胞、以及氧化型低密度脂蛋白中。大量实验表明胆固醇氧化衍生物对动脉粥样硬化形成有关因素(炎症、氧化应激、凋亡)具有促进作用。提示,胆固醇氧化衍生物在动脉粥样硬化的发生和发展中具有重要的作用。

紫外光照射下胆固醇氧化产物分析

考察了紫外光照射下胆固醇的氧化情况.实验证明,经过0～5h的紫外光照射,用毛细管气相色谱法检测到有7 酮基胆固醇、5α,6α 环氧胆固醇和胆甾烷三醇生成,其含量随照射时间增加而增加.

3β－羟基－5α－胆甾烷－6－酮合成方法的改进

３β－羟基－５α－胆甾烷－６－酮合成方法的改进刘毅，杨群志（北京医科大学怡达厂研究室，北京１０００８３）ＩＭＰＲＯＶＥＤＳＹＮＴＨＥＳＩＳＦＯＲ３β－ＨＹＤＲＯＸＹ－５α－ＣＨＯＬＥＳＴＡＮ－６－ＯＮＥ￥ＬＩＵＹ；ＹＡＮＧＱｕｎ－Ｚｈｉ（Ｂｅｉｊｉｎ...

7-酮基胆固醇通过激活内质网应激通路诱导胰岛β细胞凋亡的研究

目的探讨7-酮基胆固醇(7-KC)对胰岛β细胞凋亡的影响及其可能分子机制。方法用0、0.25、2.5和25μmol/L浓度的7-KC孵育INS-1细胞24 h,应用Western blotting法筛选出引起INS-1细胞凋亡的浓度。再将INS-1细胞分为对照组、25μmol/L 7-KC组、25μmol/L 7-KC+1 mmol/L 4-苯基丁酸(4-PBA)组以及1 mmol/L 4-PBA组。应用Western blotting、流式细胞仪、免疫荧光、电镜和免疫共沉淀技术,检测细胞内质网应激标志蛋白[肌醇需求酶1α(IRE-1α)、蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)、转录激活因子4(ATF4)、磷酸化α亚基的真核起始因子2(p-eIF-2α)、α亚基的真核起始因子2(eIF-2α)、转录因子C/EBP同源蛋白(CHOP)、磷酸化IRE-1α(p-IRE-1α)、磷酸化PERK(p-PERK)和转录激活因子6(ATF6)]、凋亡蛋白[B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)和切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(cleaved-Caspase 3)]、内质网形态和内质网应激相互作用蛋白[葡萄糖调节蛋白78(GRP78)]表达水平,验证内质网应激在7-KC损害β细胞功能中的作用。两组间比较采用t检验,多组间比较采用方差分析,组内两两比较采用Bonferroni多重比较法。结果随着7-KC浓度的增加,cleaved-Caspase 3相对表达量呈剂量依赖性增加,并且在25μmol/L 7-KC时能显著增加cleaved-Caspase 3的水平(P<0.01)。与对照组相比,25μmol/L 7-KC组可引起内质网扩张和囊泡化,诱导内质网应激感受蛋白p-PERK、p-IRE-1α、ATF6及下游效应蛋白p-eIF-1α、ATF4、CHOP的表达。与25μmol/L 7-KC组比较,25μmol/L 7-KC+1 mmol/L 4-PBA组的内质网应激标志蛋白表达下降,同时凋亡蛋白表达减少(P<0.05)。免疫共沉淀结果显示,25μmol/L 7-KC组可抑制分子伴侣GRP78和PERK的结合,促进PERK自体磷酸化激活内质网应激。结论7-KC通过抑制细胞中GRP78与PERK结合来激活内质网应激,促进胰岛β细胞凋亡的发生。

高效液相色谱法分析人胎肝细胞培养液中7-酮基胆固醇

建立了高效液相色谱法分析人胎肝细胞培养液中７－酮基胆固醇。人胎肝细胞培养液经氯仿－甲醇（体积比为２∶１）混合液提取后，水洗，氮气吹干。色谱条件为色谱柱：μＰｏｒａｓｉｌＳｉＯ２，流动相：正己烷∶异丙醇（体积比为９１∶９），２３３ｎｍ检测。这一方法具有快速，灵敏度高，重复性好等特点。

阿托伐他汀减轻巨噬细胞内质网应激及其介导的细胞凋亡

目的探讨阿托伐他汀对7-酮胆固醇(7-KC)诱导的巨噬细胞内质网应激及细胞凋亡的影响。方法Aop E-/-小鼠左肾动脉和左颈总动脉联合部分结扎建立颈动脉易损斑块模型。采用HE染色方法观察斑块病理学改变,用免疫荧光结合激光扫描共聚焦显微镜技术检测斑块中内质网应激(ER stress)相关蛋白CHOP及磷酸化PERK(p-PERK)的表达。体外培养小鼠巨噬细胞RAW264.7,给予7-KC、H_2O_2或联合阿托伐他汀处理后,蛋白质免疫印迹方法(Western blot)测定ER stress相关蛋白CHOP、p-PERK、XBP-1s及凋亡相关蛋白cleaved caspase-3的表达。结果 Aop E-/-小鼠颈动脉易损斑块局部ER stress相关蛋白CHOP的表达及PERK磷酸化水平明显上调;7-KC可诱导小鼠巨噬细胞ER stress,进而诱导细胞凋亡;同时,氧化应激诱导剂H_2O_2也可通过诱导小鼠巨噬细胞ER stress介导细胞凋亡;而阿托伐他汀可抑制7-KC和H_2O_2诱导的巨噬细胞ER stress及其介导的细胞凋亡。结论ER stress可能参与AS易损斑块的形成;阿托伐他汀可通过减少细胞内氧化应激的水平,减轻巨噬细胞ER stress,从而抑制细胞凋亡。

人胎肝中低分子抑瘤物的分离纯化、结构鉴定及其对肿瘤细胞生长的选择性抑制作用

在胎儿组织中存在一类低分子肿瘤抑制物。胎肝细胞的甲醇－丙酮提取物中保留有大部分抑瘤活性。用体外液体培养条件下对人急性粒系白血病细胞系（ＨＬ－６０）的抑制作用为指标，跟踪指导分离过程。提取物经反相Ｃ１８中压液相色谱、ＳｅｐｈａｄｅｘＬＨ－２０凝胶色谱及氨基键合相高效液相色谱分离得到一纯活性物质，经ＮＭＲ和ＭＳ鉴定为７－酮基胆固醇（７－ｋｅｔｏｃｂｌｅｓｔｅｒｏｌ，７－ＫＣ）。体外琼脂培养条件下７－ＫＣ对小鼠ＷＥＨ１－３和Ｓ－１８０细胞较对正常小鼠骨髓粒一巨噬系祖细胞有更强的抑制增殖及集落生成作用。７－ＫＣ对ＨＬ－６０细胞增殖较对正常人骨髓ＣＦＵ－ＧＭ有更强的抑制作用。

高效液相色谱法测定卤制鸡肝中两种胆固醇氧化物

目的建立一种可以分析测定鸡肝中7-酮基胆固醇和胆甾烯酮的方法。方法样品与弗罗里硅土填料混合研磨后装柱，乙腈为洗脱剂，萃取与净化一步完成。无水乙醇为流动相，在240～285nm变波长条件下液相色谱测定。结果2种胆固醇氧化物在0．25～100μg／ml范围内线性关系良好，r均〉0．9993，方法检出限分别为0．015、0．045μg／g。优化条件下，组分在鸡肝样品中的平均回收率在74．1％～97．0％之间，RSDs〈5．57％。结论该方法适合于鸡肝中胆固醇氧化物的测定。

Study on the Effects of Reducing Blood Lipid by Flavonoids from Ampelopsis grossedentata on Hyperlipidemia Rats

In order to study the effects of Ampelopsis grossedentata on endogenous cholesterol biosynthesis and the effects of reducing blood lipid in hyperlipidemia rats,extraction of flavonoids from Ampelopsis grossedentata by using ethanol(TFAG),and the effects of TFAG on intracellular cholesterol synthesis were detected by amphotericin B-cell model;SD hyperlipidemia rat model was established by feeding high fat diet.A formulated medicine called Xuezhikang was used as a positive control,and TFAG of different doses were administered to the stomach for 30 d continuously to measure the indexes of heart,liver tissue homogenate and serum;part of the liver was taken for pathological observation.The results showed that TFAG could significantly inhibit the synthesis of cholesterol in cells.TFAG of different doses could significantly reduce the content of TC and TG in serum of hyperlipidemia rats,and increase the content of HDL;TC and TG in heart and liver were also decreased;besides,it could increase the content of SOD,CAT and GSH in the liver of hyperlipidemia rats,and reduce the content of MDA.The results of pathological section showed that TFAG could improve the damage degree of hepatocytes in hyperlipidemia rats,and the effect of high dose group was similar to that of Xuezhikang group.In general,TFAG has good antioxidant and reducing blood lipid effects,and can effectively inhibit liver steatosis.

龙眼果核化学成分的研究

目的研究龙眼Dimocarpus longan果核的化学成分。方法采用硅胶柱色谱、聚酰胺柱色谱以及葡聚糖凝胶色谱等手段对龙眼果核95%乙醇提取物进行分离,并利用理化性质和光谱数据鉴定化合物的结构。结果从龙眼果核的95%乙醇提取物中分离得到12个化合物,分别鉴定为β-谷甾醇(1)、苯乙醇(2)、2-甲基-1,10-十一烷二醇(3)、(24R)-6β-羟基-24-乙基-胆固醇-4-烯-3-酮(4)、齐墩果酸(5)、松脂醇(6)、烟酸(7)、对羟基苯甲酸(8)、β-胡萝卜苷(9)、1-O-甲基-D-肌-肌醇(10)、尿嘧啶(11)、腺嘌呤核苷(12)。结论化合物2～8和10为首次从龙眼果核分得,其中化合物3是新化合物,命名为龙眼二醇(longandiol)。