共转染小干扰RNA质粒联合抑制HeLa细胞葡萄糖-6-磷酸脱氢酶和转酮醇酶样基因-1表达

目的葡萄糖-6-磷酸脱氢酶(glucose-6-phosphate dehydrogenase,G6PD)及转酮醇酶样基因-1(transketolase like-1,TKTL-1)是肿瘤细胞磷酸戊糖代谢途径(pentose phosphate pathway,PPP)的2个重要关键调节酶。拟通过共转染小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)表达载体同时沉默人宫颈癌Hela G6PD及TKTL-1后,观察其对G6PD和TKTL1的联合抑制作用,旨在探讨共转染siRNA表达载体联合抑制PPP的效果及可行性。方法分别构建靶向G6PD和TKTL1基因siRNA干扰质粒载体,通过酶切和测序鉴定siRNA干扰质粒载体构建成功后,单独或共转染HeLa细胞株,RT-PCR检测G6PD、TKTL1 mRNA表达并结合G6PD、转酮醇酶(transketolase,TKT)活性测定判断并比较共转染联合抑制Hela细胞G6PD、TKTL1表达的效果。结果共转染靶向G6PD和TKTL1基因的siRNA干扰载体能显著下调G6PD和TKTL1基因表达水平[(0.96±0.05)vs(0.47±0.04),(0.98±0.05)vs(0.41±0.04),P<0.01]。同时,2个酶的活性也显著下降(99.2%vs34.5%和99.8%vs 40.1%,P<0.01)。共转染抑制G6PD基因mRNA表达较单独转染靶向G6PD基因的siRNA干扰载体的效果有显著下降[(0.47±0.04)vs(0.31±0.04),P<0.01)]。结论共转染siRNA干扰载体对人宫颈癌HeLa细胞PPP代谢通路进行联合抑制是一种有效的实验方案。

TKTL1蛋白及mRNA在食管鳞癌组织中的表达及其临床意义

目的:探讨TKTL1在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义.方法:分别采用原位杂交及免疫组织化学的方法检测62例食管鳞癌组织、31例癌旁不典型增生组织及62例正常食管黏膜组织中TKTL1蛋白及其mRNA的表达.结果:正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中TKTL1蛋白阳性表达率依次增高,分别为17.7%(11/62)、29.0(9/31)、53.2%(33/62),组间比较差异有统计学意义(均P<0.05);TKTL1蛋白表达与癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期密切相关,组间比较差异有统计学意义(均P<0.05).正常黏膜组织、癌旁不典型增生组织及食管鳞癌组织中TKTL1mRNA的阳性表达率依次增高,分别为4.8%(3/62)、22.6%(7/31)、43.5%(27/62),组间比较差异有统计学意义(均P<0.05);TKTL1mRNA表达与癌的浸润深度、淋巴结转移及TNM分期密切相关,组间比较差异有统计学意义(均P<0.05).TKTL1蛋白及其mRNA的表达呈正相关关系(γp=0.302,P<0.01).结论:TKTL1蛋白及其mRNA表达率升高可能与食管鳞癌的发生、发展及浸润、转移有关.