3种单酯型乌头碱的NMR研究

利用3种双酯型乌头碱(乌头碱、新乌头碱、次乌头碱)经水解得到3种单酯型乌头碱,即苯甲酰乌头碱(化合物1)、苯甲酰新乌头碱(化合物2)、苯甲酰次乌头碱(化合物3).应用1D和2DNMR(包括1H-1H COSY、HMQC和HMBC)对这3种化合物的结构进行了分析,纠正了文献对化合物1和化合物2的归属错误,对化合物3的1H和13C化学位移进行了全归属.

离子液体均匀提取-高效液相色谱法测定参附注射液中4种单酯型乌头碱的含量

采用离子液体均匀提取-高效液相色谱法测定了参附注射液中苯甲酰乌头碱(BA)、苯甲酰新乌头碱(BM)、苯甲酰次乌头碱(BH)和苯甲酰脱氧乌头碱(BD)的含量.通过优化离子液体的用量、样品溶液的pH值、提取时间和盐浓度等参数,确定了最佳的提取条件:pH为中性,盐浓度为50 g/L,采用0.058 g的[C6Mim][BF4]和0.26 g的NH4PF6作为提取剂,样品用量为5 mL,提取时间1 min.在优化的实验条件下测得4种单酯型乌头碱的检出限分别为45.5(BM),19.8(BA),26.3(BH)和12.2μg/L(BD);对参附注射液样品进行了分析,加标回收率范围为86.54%～110.67%,RSD值均小于6.12%.

毛细管电泳柱头场强富集技术测定康复新胶囊中3种双酯型乌头碱含量

目的:探讨建立毛细管柱头场强放大技术分离测定康复新胶囊中乌头碱、次乌头碱、新乌头碱含量的方法。方法:将样品用1 mol·L-1盐酸溶液超声提取后,碱化,乙醚萃取生物碱,用30%乙腈溶液定容。运行缓冲液为60 mmol·L-1磷酸盐缓冲液(pH 8.0)-乙腈(7:3),运行电压10 kV,进样电压10 kV,进样时间30 s,在进样之前设定用水冲洗,压力为1.379 kPa,冲洗时间0.2 min。结果:新乌头碱、乌头碱、次乌头碱在O.7～μg·mL-1范围内,线性关系良好,其回收率大于95%,RSD<4%。结论:该方法前处理简单,灵敏度高,线性范围宽,分离效果好。

不同产地生附子在破格救心汤中双酯型乌头碱含量差异研究

目的研究不同产地生附子在破格救心汤中双酯型乌头碱质量分数的差异。方法采用高效液相色谱法,以Technologies Athena C_(18)-WP(4.6 mm×250 mm,5μm)为色谱柱,甲醇(0.1%三乙胺)-水(体积比70∶30)为流动相,流速为1.0 mL/min,柱温为35℃,检测波长为235 nm。对13个不同产地生附子组成的破格救心汤中双酯型乌头碱的质量分数进行检测,比较不同产地生附子在破格救心汤中毒性成分质量分数的差异。结果 13个不同产地生附子组成的破格救心汤水煎液中3种毒性双酯型乌头碱的质量分数具有明显差异,以四川江油产地的附子总双酯型乌头碱质量分数为标准,与其相近的为陕西汉中、江苏常州的样品;质量分数较高的为云南腾冲、辽宁大连、四川凉山的样品,其中云南腾冲样品约为四川江油的3倍;质量分数较低的为河北石家庄、河南南阳、广西百色的样品。结论本文可为临床应用破格救心汤时,附子产地选择、剂量使用、安全性评价及临床安全用药提供科学依据。

双酯型乌头碱完全抗原的制备与鉴定

为制备双酯型乌头碱(DAC)的完全抗原,通过活化酯法将小分子的DAC偶联到牛血清白蛋白(BSA)和鸡卵清白蛋白(OVA),合成免疫原DAC-BSA、检测原DAC-OVA,采用紫外扫描光谱法、BCA试剂盒法、酶联免疫吸附法(ELISA)鉴定偶联结果。结果表明,免疫原和检测原均偶联成功;按100μg/只的剂量每2周免疫一次小鼠,共免疫5次,最后一次免疫4d后,眼眶静脉采血,测定多抗血清的效价均达到1∶25 600,且第2组小鼠多抗血清的敏感性最好,半数抑制浓度(IC50)为30ng/mL,最低检出限为1ng/mL,与其他药物的交叉反应率均小于1%,具有很好的特异性。成功合成了DAC人工抗原,并得到了敏感性高、特异性好的多抗血清。

复方三生注射液酯型乌头碱含量测定

复方三生注射液(简称三生针)由生附子(Aconitum carmichaeli Dcbx.的干燥子根片)等六味中药制成。本品对中晚期肺癌有确切疗效,其主要有效成分为乌头类生物碱。本实验测定三生针酯型乌头碱含量,以便衡量和控制乌头碱水解程度,保证药品临床安全、有效。

破格救心汤中双酯型乌头碱溶出规律研究

目的研究破格救心汤中生附子剂量及煎煮时间对双酯型乌头碱的溶出量的影响。方法采用高效液相色谱法(HPLC),检测破格救心汤临床煎煮过程中双酯型乌头碱溶出量的动态变化,明确双酯型乌头碱溶出量与生附子剂量和煎煮时间的关系。结果以甲醇(0.1%三乙胺)-水(70∶30)为流动相,流速1.0 m L·min-1,柱温35℃,检测波长235 nm条件下进行测定。结果显示,复方中3种双酯型乌头碱溶出比例变化不大,其溶出量符合新乌头碱>次乌头碱>乌头碱这一趋势,其溶出规律为先增后减,且2 h达到最大值。结论该方法学考察符合定量要求,结果准确,可以解释破格救心汤水煎液中双酯型乌头碱溶出量的动态变化规律。

生附子水煎过程中双酯型乌头碱溶出的动态变化研究

目的研究生附子临床煎煮过程中双酯型乌头碱的溶出动态变化规律,建立双酯型乌头碱含量与煎煮剂量和煎煮时间的关系。方法采用高效液相色谱法(HPLC),Technologies Athena C18-WP色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相:甲醇(0.1%三乙胺)-水(70∶30),流速:1.0 mL·min-1,柱温:35℃,检测波长:235 nm。结果生附子水煎液中双酯型乌头碱水煎极不稳定,随煎煮时间的增加,乌头碱比例不断增加,4 h达到峰值。新乌头碱和次乌头碱相似,均有下降趋势,其中次乌头碱明显下降,0.5 h最高,4 h最低。结论该方法学考察符合定量要求,结果准确,可说明生附子临床水煎液中双酯型乌头碱的溶出动态变化规律。

乌头属药材中单酯型乌头碱的ELISA法测定

以苯甲酰新乌头原碱合成人工半抗原3-戊二酰基苯甲酰新乌头原碱，并采用活泼酯法使其与牛血清白蛋白（BSA）结合，制得苯甲酰新乌头原碱免疫抗原。以此抗原免疫新西兰兔，获得苯甲酰新乌头原碱抗体，可特异性识别单酯型乌头碱类生物碱。由此建立了酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测乌头属药材中的单酯型乌头碱类生物碱。本法的线性范围为0．005～5gg／ml，检测限为139pg，定量限为575Pg，平均回收率97．31％（RSD≤1．68％）。ELISA法的灵敏度较HPLC法高约112倍。

近红外光谱测定桂附止痛凝胶膏单酯型乌头碱的含量

目的：采用近红外光谱（NIR）测定桂附止痛凝胶膏（GZC）中单酯型乌头碱（AMA）的含量。方法：测定53批次桂附止痛凝胶膏的NIR图,运用TQ Analyst 8.0软件,运用原始光谱,在10 000～4 000 cm-1,选择1个主因子数,采用偏最小二乘法（PLS）建立桂附止痛凝胶膏中单酯型乌头碱含量NIR定量模型。结果：所建模型相关系数r=0.942 0;校正均方根偏差（RMSEC）0.013 5;交叉验证均方根偏差（RMSECV）0.014 4;验证集平均预测回收率为101.44%。结论：本试验所建立的模型性能较好,对桂附止痛凝胶膏中单酯型乌头碱含量的预测准确,可以应用于桂附止痛凝胶膏中单酯型乌头碱的质量控制。

草乌中酯型生物碱的提取动力学

目的研究草乌中酯型生物碱提取过程的动力学机理。方法采用改良异羟肟酸铁-高氯酸铁比色法,测定不同提取温度条件下草乌提取液中酯型生物碱的含量。以Fick扩散定律为基础,建立其提取过程的动力学方程,并由此推算出提取的速率常数、活化能、半衰期等动力学函数值。结果所得的动力学模型能较好地描述草乌中酯型生物碱提取的动态过程,其表观活化能为12.33 kJ/mol。结论草乌中酯型生物碱提取过程的动力学符合一级动力学方程特征。

黑顺片总生物碱对番泻叶致小鼠腹泻及大鼠离体小肠平滑肌运动的影响

目的:考察黑顺片总生物碱对番泻叶致小鼠腹泻及大鼠离体小肠平滑肌运动的影响。方法:采用番泻叶致小鼠腹泻模型,以小肠推进率为考察指标,观察黑顺片总生物碱对小鼠腹泻的影响;采用大鼠离体小肠平滑肌实验,以小肠平滑肌收缩的振幅和张力为考察指标,观察黑顺片总生物碱对小肠平滑肌运动的影响及其作用机理;采用HPLC法,分析黑顺片总生物碱中的化学成分。结果:黑顺片总生物碱能显著减慢腹泻小鼠小肠推进运动(P<0.05),并能剂量依赖性降低正常大鼠离体小肠平滑肌收缩的振幅和张力,对氯化乙酰胆碱、甲硫酸新斯的明所兴奋的小肠平滑肌运动均具有一定的抑制作用,但对硫酸阿托品所抑制的小肠平滑肌运动无明显影响。经HPLC分析,苯甲酰新乌头碱、苯甲酰乌头碱及苯甲酰次乌头碱均是黑顺片总生物碱的主要化学成分。结论:黑顺片总生物碱对腹泻小鼠具有一定的止泻作用,其作用机理可能与抑制M胆碱受体有关。

乌头汤和改良乌头汤药代动力学-药效学动物实验比较

目的建立3种单酯型乌头碱(苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱)在大鼠血浆中的超高效液相色谱-串联四级杆质谱(UPLC-MS/MS)测定方法,探讨乌头汤与改良乌头汤中3种单酯型乌头碱的药代动力学行为及差异和对药效的影响。方法流动相为乙腈-0. 1%甲酸水溶液(梯度洗脱),流速为0. 35 mL/min;采用ESI源,正离子检测模式扫描,多反应监测模式(MRM)检测生物碱类成分的血药浓度。运用PKSolver V2. 0软件计算药代动力学参数;建立以角叉菜胶诱发小鼠足跖炎症模型及小鼠醋酸扭体模型,对乌头汤和改良乌头汤的药效进行评价。结果乌头汤与改良乌头汤中,苯甲酰乌头原碱血浆半衰期(t1/2)为(416±24) min和(439±16) min,达峰浓度(Cmax)为(21. 6±3. 5) ng/mL和(20. 2±2. 1) ng/mL,药-时曲线下面积(AUC0-t)为(3 126±246) ng/(h·mL)和(2 916±198) ng/(h·mL);乌头汤与改良乌头汤中苯甲酰新乌头原碱t1/2为(654±39) min和(634±28) min,Cmax为(40. 8±12. 4) ng/mL和(30. 2±8. 04) ng/mL,AUC0-t为(5 016±453) ng/(h·mL)和(3 653±146) ng/(h·mL);苯甲酰次乌头原碱t1/2为(459±42) min和(461±26) min,Cmax为(32. 5±10. 8) ng/mL和(23. 8±5. 63) ng/mL,AUC0-t为(3 045±146) ng/(h·mL)和(2 039±117) ng/(h·mL)。乌头汤和改良乌头汤对角叉菜胶引起的足肿胀抗炎作用明显,对乙酸刺激小鼠诱导的疼痛反应有明显的抑制作用。结论防风、黑豆配伍可降低单酯型乌头碱在大鼠体内的含量。改良乌头汤的抗炎活性和镇痛作用较强,更有利于关节炎的治疗。

AHP-CRITIC混合加权法优选风湿痹痛膏提取工艺

目的确定指标权重,优选风湿痹痛膏的最佳提取工艺。方法以出膏率及芍药苷、单酯型乌头碱含量为考察指标,采用层次分析法(AHP)、基于指标相关性的权重确定方法(CRITIC)、AHP-CRITIC混合加权法确定权重系数,结合正交试验优选风湿痹痛膏复方提取工艺最佳参数。结果采用AHP-CRITIC混合加权法确定的权重系数更符合实际,按该权重系数进行综合评分,优选的最佳提取工艺为:加6倍量的水,提取1.5 h,提取2次。结论AHP-CRITIC混合加权法较单一方法更全面、合理,所确定的提取工艺稳定可行,可为风湿痹痛膏的研制开发提供参考依据。

附子的水解程度测定

附子是常用中药，但具有大毒，其剧毒成分为双酯型乌头碱，临床上常用水解法（即长时间煎）减缓毒性，但水解程度难于控制。本文采用异羟肟酸铁法测定其酯型乌头碱含量，可衡量乌头碱水解程度，取得满意结果。

LC-MS/MS法同时测定复方附子口服液中10种成分含量

目的:建立LC-MS/MS同时测定复方附子口服液中10个成分(毛蕊异黄酮葡萄糖苷、苯甲酰新乌头碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰乌头碱、党参炔苷、新乌头碱、次乌头碱、乌头碱、黄芪甲苷和麦冬皂苷D)含量的分析方法。方法:采用Agilent SB-C18色谱柱(2.1 mm×50 mm,1.8μm),柱温为25℃,流动相A为0.05%甲酸水溶液,流动相B为0.05%甲酸甲醇溶液,梯度洗脱(0～3.5 min,40%B;3.5～4 min,40%B→70%B;4～5 min,70%B→90%B;5～6 min,90%B;6～6.1 min,90%B→40%B;6.1～7 min,40%B),流速0.3 m L·min^(-1);电喷雾离子源(ESI),正、负离子扫描方式,多反应监测扫描模式进行定量分析。结果:所测10种成分在一定范围内具有良好的线性关系,线性相关系数r均大于0.998 1,精密度、重复性、稳定性的RSD均小于3.6%;加样回收率在95.24%～104.1%,RSD均小于4.2%。3个批次双酯型生物碱(以新乌头碱、次乌头碱、乌头碱总量计)平均含量为9.29μg·mL^(-1),满足用药安全。单酯型生物碱(以苯甲酰新乌头碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰乌头碱总量计)、毛蕊异黄酮葡萄糖苷、党参炔苷、黄芪甲苷、麦冬皂苷的平均含量分别为604.3、72.3、47.8、308、7.69μg·mL^(-1)。结论:所建立的分析方法经方法学验证,可为复方附子口服液的质量控制提供依据。

附子对心血管系统作用研究的回顾及再评价(一)

附子是中医常用药物,也是有毒中药之一。由于它的效果良好而倍受重视,但又由于它的毒性而使其临床应用受到限制。因此,历代医药学家从植物,化学,药理,分析,炮制等诸方面进行了广泛的研究,试图找到发挥药效作用如强心等有效成分,但因受到附子的"毒性成分,又是有效成分"的传统观念的束缚,至今没有取得突破性进展。上世纪70～80年代,发表了附子对心血管系统作用研究的一系列文章,证明了附子的有效成分和毒性成分不是同一类物质,而是可分的。乌头碱类双酯型生物碱只具毒性作用,而无任何心血管活性作用;而强心成分是耐热的水溶性物质。同时证明附子水溶性物质对心血管系统有广泛的作用,并存在特异性对抗乌头碱类双酯型二萜类生物碱的致心律失常作用,因而具有极大的科学意义,社会效益和经济意义,并为附子的研究和应用提供了一条崭新的思路和广阔的前景。