单酯型生物碱类对CHF大鼠心肌细胞的保护作用及机制

目的 分析单酯型生物碱类对慢性心力衰竭大鼠心肌细胞的保护作用及对PI3K/AKT通路的影响。方法 将100只大鼠随机分为空白组(A组)、模型组(B组)、低剂量组(C组)、中剂量组(D组)和高剂量组(E组),每组20只。C、D、E组在慢性心力衰竭模型建模成功后给予附子浓缩液灌胃,剂量分别为2.79、5.57、11.14 g/kg。灌胃6周后检测各组大鼠病理组织学变化、超声心动图指标、心肌细胞凋亡率,心肌组织促凋亡蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、半胱氨酸蛋白酶8(Caspase-8)表达量,心肌细胞自噬蛋白、BNP、AI、PO_(2)、IL-6、TNF-α水平及PI3K/AKT通路蛋白表达量。结果 B~E组超声心动图指标室间隔收缩末期厚度(IVSs)、室间隔舒张末期厚度(IVSd)、左心室后壁收缩末期厚度(LVPWs)、左心室后壁舒张末期厚度(LVPWd)。心肌细胞凋亡率,Bax、Caspase-8表达量,IL-6、TNF-α水平,心肌细胞自噬蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/Ⅰ,BNP及AI水平均高于A组,LVEF、Bcl-2表达量、PO_(2)水平、心肌细胞自噬蛋白P62及p-PI3K、p-AKT表达量均低于A组(P<0.05);C~E组IVSs、IVSd、LVPWs、LVPWd、心肌细胞凋亡率及Bax、Caspase-8表达量,IL-6、TNF-α水平、自噬蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/Ⅰ、BNP及AI水平低于B组,LVEF、Bcl-2表达量、PO_(2)水平、心肌细胞自噬蛋白P62及p-PI3K、p-AKT表达量高于B组(P<0.05);随着附子浓缩液剂量的增加,IVSs、IVSd、LVPWs、LVPWd、心肌细胞凋亡率、Bax、Caspase-8表达,IL-6、TNF-α水平、心肌细胞自噬蛋白LC3-Ⅱ、LC3-Ⅱ/Ⅰ、BNP及AI水平降低,LVEF及Bcl-2表达、PO_(2)水平、心肌细胞自噬蛋白P62及p-PI3K、p-AKT表达量升高(P<0.05)。结论 单酯型生物碱类通过上调p-PI3K、p-AKT蛋白表达量,激活PI3K/AKT通路,缓解心力衰竭恶性进展,且呈剂量依赖性。

UPLC同时测定铁棒锤中6种酯型生物碱类成分的含量

目的:建立超高效液相色谱法同时测定铁棒锤药材中苯甲酰乌头碱、苯甲酰次乌头碱、苯甲酰新乌头碱、乌头碱、次乌头碱、新乌头碱6种生物碱类成分的含量测定方法。方法:采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×50mm,1.7μm);乙腈-0.2%冰醋酸水溶液(三乙胺调节PH=6.2)梯度洗脱为流动相;流速0.4mL·min-1;柱温为35℃;检测波长235nm。结果:6种单酯型和双酯型生物碱的线性范围、相关系数良好(r=0.999 4~0.999 9),加样回收率试验的RSD均小于2.0%。结论:该方法简便、快捷、灵敏度高,可用于铁棒锤药材的质量控制。

附子中单酯型生物碱类成分靶向ACE2-Ang1-7轴治疗慢性心力衰竭的研究进展

心力衰竭是指心脏无法泵血,除了心脏移植或心室辅助装置外,尚无更有效的治疗方法的一个公共卫生问题.肾素-血管紧张素系统(RAS)在调节正常生理和心血管疾病的发病机制中具有重要作用.血管紧张素转换酶2(ACE2)及其产物血管紧张素1-7(Ang1-7)被认为对其他已知的RAS成员的不良反应具有抵消作用.现代药理学研究发现,单酯型生物碱是附子二萜类双酯型生物碱的水解产物,具有明显降压,抑制心肌收缩力等作用,但其作用机制还有待研究.本文论述了慢性心衰中ACE2、Ang(1-7)的基本特性及其相互关系,探讨了通过靶向ACE2-Ang(1-7)-MAS受体轴从而产生心血管保护作用的机制,总结了近年来附子中单酯型生物碱靶向ACE2-Ang(1-7)-MAS轴的抗心衰作用研究进展,为深入研究心力衰竭以及药物的开发利用提供依据.

不同灭菌工艺对生川乌中乌头类双酯型生物碱成分及产品质量影响研究

目的:在保证生川乌药效的前提下,筛选最优灭菌工艺。方法:分别采用热压灭菌、干热灭菌、钴-60辐照灭菌三种方法进行灭菌处理,采用HPLC法考察灭菌后乌头类双酯型生物碱含量变化情况,同步考察药材及其产品微生物数量是否符合标准,以综合评估大生产适用工艺。结果:3种灭菌方法均能使产品符合成品质量标准,综合考虑灭菌后样品微生物数量、指标成分含量、效率等因素,干热灭菌工艺是最优工艺。结论:在干热灭菌条件下,产品微生物限度符合要求,乌头类双酯型生物碱转移率较优,生产效率可接受,可作为工业生产最优工艺。

乌头类双酯型生物碱水解转化规律及含量计算方法研究

目的研究乌头类双酯型生物碱水解转化规律,建立LC-MS定性分析及HPLC定量分析乌头类双酯型生物碱及其水解产物方法。方法通过控制乌头碱、新乌头碱、次乌头碱3种双酯型生物碱的水解条件,分别获得不同阶段的水解产物,从而推导各水解产物的精确质量浓度。结果根据LC-MS定性分析结果,乌头类生物碱水解规律为乌头类双酯型生物碱先水解生成焦乌头碱类生物碱,再继续水解生成苯甲酰乌头原碱类生物碱;并根据水解规律分别计算出焦乌头碱类生物碱、苯甲酰乌头原碱类等乌头类生物碱水解产物的精确质量浓度。HPLC方法学表明,焦乌头碱、焦新乌头碱、焦次乌头碱、苯甲酰乌头原碱、苯甲酰新乌头原碱、苯甲酰次乌头原碱分别在0.70～44.64μg.mL-1(r=0.999 7);0.34～21.77μg.mL-1(r=0.999 9);0.38～24.37μg.mL-1(r=0.999 9);0.48～30.74μg.mL-1(r=0.999 9);0.41～26.38μg.mL-1(r=0.999 9);0.42～27.08μg.mL-1(r=0.999 7)内线性关系良好。结论本实验得出了乌头类双酯型生物碱水解转化规律,并建立了计算不同水解阶段水解产物的方法,其专属性高、定量简便,为乌头类生物碱及其水解产物的定量分析和乌头类中药材炮制、质量控制等提供了简便可行的方法。

响应曲面法优化生草乌干热抑菌最佳工艺

目的:通过响应曲面法优化生草乌干热抑菌工艺条件。方法:以成品制剂微生物(细菌、霉菌)数量和乌头类双酯型生物碱转移率为评价指标,选取加热温度、加热时间、铺盘厚度为考察因素,利用响应曲面法优选生草乌抑菌最佳工艺。结果:生草乌最佳抑菌工艺条件:加热温度为106℃,加热时间为10 h,铺盘厚度为3 cm。结论:此工艺条件经工艺验证试验,干热后选用生草乌入药的制剂成品微生物指标可达到《中国药典》2020年版要求,重复性好,且干热前后乌头类双酯型生物碱转移率较高。

HPLC分析不同蒸制温度下川乌化学成分的变化

目的:HPLC分析不同蒸制温度下川乌化学成分变化情况。方法:在100℃、110℃条件下分别蒸制川乌0、0.5、1、2、4、8 h,测定制川乌中双酯型生物碱和单酯型苯甲酰类生物碱含量,并通过指纹图谱结合主成分分析(PCA)对川乌蒸制过程中化学成分变化进行分析。结果:2种蒸制条件下,双酯型生物碱水解转化成单酯型苯甲酰类生物碱,110℃在1~2 h完成乌头碱的转化,达到炮制目的。结论:高温蒸制方法简单、可行而且易于控制,可作为代替川乌传统炮制工艺的新方法。

乌头属药材中单酯型乌头碱的ELISA法测定

以苯甲酰新乌头原碱合成人工半抗原3-戊二酰基苯甲酰新乌头原碱，并采用活泼酯法使其与牛血清白蛋白（BSA）结合，制得苯甲酰新乌头原碱免疫抗原。以此抗原免疫新西兰兔，获得苯甲酰新乌头原碱抗体，可特异性识别单酯型乌头碱类生物碱。由此建立了酶联免疫吸附测定法（ELISA）检测乌头属药材中的单酯型乌头碱类生物碱。本法的线性范围为0．005～5gg／ml，检测限为139pg，定量限为575Pg，平均回收率97．31％（RSD≤1．68％）。ELISA法的灵敏度较HPLC法高约112倍。

附子对心血管系统作用研究的回顾及再评价(一)

附子是中医常用药物,也是有毒中药之一。由于它的效果良好而倍受重视,但又由于它的毒性而使其临床应用受到限制。因此,历代医药学家从植物,化学,药理,分析,炮制等诸方面进行了广泛的研究,试图找到发挥药效作用如强心等有效成分,但因受到附子的"毒性成分,又是有效成分"的传统观念的束缚,至今没有取得突破性进展。上世纪70～80年代,发表了附子对心血管系统作用研究的一系列文章,证明了附子的有效成分和毒性成分不是同一类物质,而是可分的。乌头碱类双酯型生物碱只具毒性作用,而无任何心血管活性作用;而强心成分是耐热的水溶性物质。同时证明附子水溶性物质对心血管系统有广泛的作用,并存在特异性对抗乌头碱类双酯型二萜类生物碱的致心律失常作用,因而具有极大的科学意义,社会效益和经济意义,并为附子的研究和应用提供了一条崭新的思路和广阔的前景。