何首乌抗性淀粉-玉米醇溶蛋白负载酯蟾毒配基纳米粒的制备及工艺优化

为了改善酯蟾毒配基的成药性,提高其生物利用度,本文通过反溶剂法制备了负载酯蟾毒配基的何首乌抗性淀粉-玉米醇溶蛋白纳米粒,以包封率为指标,采用单因素实验和正交试验进行纳米粒制备工艺的优化。优化后的制备工艺为pH值为4,搅拌速度为400 r·min^(-1),何首乌抗性淀粉和玉米醇溶蛋白比例为1∶1,玉米醇溶蛋白和酯蟾毒配基比例为1∶1,制备的纳米粒包封率为86.84%。

液相色谱法测定强力救心滴丸中蟾酥的华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量

目的:测定强力救心滴丸中蟾酥的主要成分华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量。方法:样品经甲醇超声处理提取,采用高效液相色谱法测定,色谱柱为 Alltima C_(18)色谱柱(4.6mm×250mm,5μm);柱温:40℃;流速:1mL·min^(-1);流动相:乙腈-0.5%磷酸二氢钾(pH=3.2)(50:50);检测波长:296nm。结果:华蟾酥毒基在0.25-1.51μg范围内、酯蟾毒配基在0.26-1.55μg范围内具有良好线性关系。华蟾酥毒基平均加样回收率为99.6%,RSD=2.1%(n=5);酯蟾毒配基平均加样回收率为98.2%,RSD=1.4%(n=5)。结论:该法准确、可靠,可用于强力救心滴丸中蟾酥的酯蟾毒配基和华蟾酥毒基含量测定。

酯蟾毒配基选择性杀伤肿瘤细胞的研究

背景与目的:酯蟾毒配基是我国传统抗肿瘤中药-蟾酥主要成分之一。前期的研究表明,酯蟾毒配基能在不影响静息人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)存活的浓度下杀伤肿瘤细胞,本研究将进一步探讨酯蟾毒配基是否具有选择性杀伤肿瘤细胞的作用。方法:分别将酯蟾毒配基作用于Jurkat细胞、Hep3B细胞、PBMC以及PHA活化后PBMC。采用CCK-8显色法对肿瘤细胞生长抑制率进行测定;利用流式细胞术对药物作用PBMC前后细胞数量进行精确计数。结果:酯蟾毒配基对Jurkat和Hep3B肿瘤细胞有明显杀伤作用,而对静息PBMC细胞影响轻微。喜树碱、多柔比星和依托泊苷同酯蟾毒配基相似,对静息的PBMC没有影响,却能杀伤PHA活化后的PBMC。结论:酯蟾毒配基同其他抗肿瘤药物一样,都作用于肿瘤细胞增殖环节,而非选择性杀伤肿瘤细胞;强心苷类化合物选择性杀伤肿瘤细胞的观点不确切。

干蟾皮中酯蟾毒配基和华蟾酥毒基的纯化及其体外抗结肠癌活性的研究

目的：探讨干蟾皮中酯蟾毒配基和华蟾酥毒基的分离和纯化方法,并考察其体外抗结肠癌活性。方法：采用硅胶柱层析法纯化干蟾皮中的酯蟾毒配基和华蟾酥毒基,考察径高比、上样量及洗脱曲线对酯蟾毒配基和华蟾酥毒基纯化的影响;采用MTT法测定纯化产物对结肠癌细胞CT-26的生长抑制作用,考察其体外抗结肠癌活性。结果：纯化条件径高比为2∶14,上样量为10g（干蟾皮原生药材）,洗脱溶剂用量为160m L。在9.32~300μg/m L浓度范围内纯化产物对结肠癌细胞有较强的抑制作用,并且呈时间和剂量依赖关系。结论：硅胶柱层析法适合于干蟾皮中脂蟾毒配基和华蟾酥毒基的分离、纯化,且纯化产物体外抗结肠癌作用明显。

高效液相色谱-串联质谱法测定肝组织中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基

目的建立灵敏、准确的高效液相色谱-串联质谱法（HPLC-MS/MS）测定肝组织中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量的方法。方法肝组织匀浆液中加入内标地塞米松,用二氯甲烷提取后挥干,残渣加入甲醇溶液溶解并上样到ProElut C18固相萃取柱上分离净化,应用HPLC-MS/MS正离子多反应监测模式测定。结果肝组织中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基分别在1~204 ng/g和1~206 ng/g范围内线性关系良好。检测限（S/N≥3）均为0.3 ng/g。基质效应为96.5%~126.7%。萃取回收率为70.0%~82.3%。日内及日间精密度均小于10%。结论所建方法灵敏、可靠,能满足法医毒物分析的鉴定需要。

HPLC测定清金得生片华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量

目的:建立清金得生片中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量测定方法。方法:采用Hypersil ODS色谱柱(250mm×4mm,5μm);以乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液(用磷酸调pH至3.2)(45:55)为流动相;检测波长为296nm;柱温35℃。结果:华蟾酥毒基和酯蟾毒配基分别在0.04～1.25μg(r=0.999 9)、0.04～1.24μg(r=0.9998)范围内线性关系良好,加样回收率分别为99.37%(RSD=1.71%),100.20%(RSD=1.37%)。结论:方法简便、结果准确。

反相高效液相色谱法测定梅花点舌丸中酯蟾毒配基、华蟾毒配基的含量

目的 :建立测定梅花点舌丸中酯蟾毒配基、华蟾毒配基的反相高效液相色谱法。方法 :采用KromasilC18 柱 ,流动相为乙腈∶0 5 %KH2PO4 溶液 (50∶50) ,检测波长为296nm。结果 :该方法线形关系良好 ,酯蟾毒配基的平均加样回收率为97 40 % ,RSD为2 2 % ;华蟾毒配基的平均加样回收率为97 78 % ,RSD为2 6 %。结论 :方法简便可靠 ,分离度较好 ,可用于梅花点舌丸的质量控制。

RP-HPLC法测定梅花点舌丸中酯蟾毒配基和华蟾毒配基的含量

目的:建立梅花点舌丸中酯蟾毒配基、华蟾毒配基的含量测定方法。方法:采用反相高效液相色谱法,使用C_(18)柱,乙腈-0.5％KH_2PO_4溶液(50:50)为流动相,检测波长:296nm。结果:线性关系良好,酯蟾毒配基的平均加样回收率为97.4％,RSD为2.3％。华蟾毒配基的平均加样回收率为97.8％,RSD为2.7％。结论:方法简便可靠,分离度较好,结果稳定,可用于梅花点舌丸的质量控制。

高效液相色谱法检测华蟾素注射液中蟾毒灵、华蟾毒精及酯蟾毒配基限量

目的采用HPLC法对华蟾素注射液中蟾毒灵、华蟾毒精及酯蟾毒配基进行限量检测。方法 Sunfire C18色谱柱,流动相为乙腈-水(50:50),柱温30℃,检测波长296nm。结果 9批样品在与蟾毒灵、华蟾毒精及酯蟾毒配基对照品色谱峰相同的保留时间处,未出现色谱峰。结论方法准确、快速、重现性好,可用于华蟾素注射液限量检测。

HPLC测定静脉给药后大鼠血清中得力生注射液中酯蟾毒配基与柔红霉素的含量

目的:建立大鼠血清中酯蟾毒配基与柔红霉素浓度的测定方法。方法:血清经乙酸乙酯提取,炔诺酮(酯蟾毒配基)、多柔比星(柔红霉素)作内标,采用高效液相色谱法测定酯蟾毒配基与柔红霉素浓度。色谱柱:phenomenex C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相:甲醇-0.01 mol/L磷酸二氢铵溶液(pH 4.65)-冰醋酸(V∶V∶V=30∶20∶0.1)(柔红霉素),乙腈-水(55∶45)(酯蟾毒配基),检测波长:柔红霉素233 nm;酯蟾毒配基296 nm。结果:酯蟾毒配基在55.0～8800μg/L范围内,柔红霉素在0.1478～14.778 mg/L范围内,待测物与内标物的峰面积与浓度呈现良好线性关系,r=0.9997(酯蟾毒配基),r=0.9984(柔红霉素),平均回收率均>80%,日内、日间RSD均<5%(n=3)。结论:该方法快速、简便、准确,适合于临床得力生注射液与柔红霉素浓度的监测。

反相高效液相色谱法测定麝香保心丸中酯蟾毒配基和华蟾酥毒基的含量

为了建立麝香保心丸中酯蟾毒配基和华蟾酥毒基的含量测定方法,以控制麝香保心丸的质量,采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Hypersil(ODS 2)C_(1H)柱(5μm,4.6mm×200mm),流动相为四氢呋喃—甲醇—水(8:31:61),检测波长为298nm,内标为炔雌醇。结果表明,脂蟾毒配基在4.3～86μg/ml、华蟾酥毒基在3.9～78μg/ml范围内线性关系良好(τ分别为0.9999.0.9998),平均回收率分别为99.2%、99.5%,RSD分别为1.7%、1.4%(n=3)。该法简便、准确、重现性好,可作为麝香保心丸质量控制的方法之一。

HPLC法测定六神丸中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量

目的采用HPLC法对六神丸中蟾酥的主要成分华蟾酥毒基和酯蟾毒配基进行含量测定。方法样品经甲醇回流提取,采用HPLC法测定。色谱柱为Hypersil C18(250 mm×4．6 mm,5μm);流动相为乙腈-水(43:57,V/V);流速1．0 mL·min-1;检测波长296 nm;温度25℃。结果华蟾酥毒基为0．052 5～1．050μg(r=0．999)、酯蟾毒配基为0．052～1．040μg(r=0．999)时呈良好的线性关系。华蟾酥毒基平均加样回收率为100．18％,RSD=1．85(n=6);酯蟾毒配基平均加样回收率为100．40％, RSD=1．14(n=6)。结论此方法简单、快速、准确,可用于六神丸中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量测定。

HPLC法同时检查华蟾素片中蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基限量和测定蟾蜍噻咛的含量

目的采用HPLC法对华蟾素片中有毒成分蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基进行限量检查;并利用HPLC法测定其有效成分蟾蜍噻咛的含量。方法限量检查:色谱柱为Agela C18柱,流动相为乙腈-0.5%磷酸二氢钾溶液(50∶50)(用磷酸调节pH为3.2),检测波长为296nm。含量测定:色谱柱为Kromasil C18柱,流动相为乙腈-水(10∶90),检测波长为226nm。结果在与蟾毒灵、华蟾酥毒基及酯蟾毒配基对照品色谱峰相同的保留时间处,5批样品出现的色谱峰面积之和小于对照品峰面积之和。蟾蜍噻咛在0.1045～1.0448μg范围内呈良好的线性关系,r=0.9998;平均回收率为98.9%,RSD=1.6%;每片含量不得少于0.15mg。结论方法快速、准确、重复性好,可用于华蟾素片质量标准的控制。

高效液相色谱法测定牛黄消炎片中酯蟾毒配基的含量

应用高效液相色谱法，对中成药牛黄消炎片中蟾酥的主要成分酯蟾毒配基进行了含量测定。所测酯蟾毒配基的回收率是１００．２％，ＲＳＤ为１．４２％，线性范围是０．１２～０．７２ｍｇ／ｍｌ，相关系数为０．９９９８。

HPLC法同时测定蟾酥药材中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量

目的建立同时测定蟾酥药材中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的高效液相色谱方法。方法以Boston Green ODS C18为分析色谱柱,乙腈-2mL·L-1磷酸水溶液(含0.02mol·L-1磷酸二氢钠)(60∶40)等度洗脱,检测波长为296nm,柱温为35℃作为色谱条件。结果华蟾酥毒基和酯蟾毒配基线性良好,各项方法学参数都达到定量要求,回收率分别为98.92%和99.04%,36h内样品稳定性良好。结论该方法准确,操作较为简便易行,可用于蟾酥药材的质量控制。

HPLC法测定麝香保心丸中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基含量

目的 :建立测定麝香保心丸含量的方法。方法 :用高效液相色谱法测定。色谱柱 :十八烷基硅烷键合硅胶柱 ,流动相 :乙腈与 0 .5 %磷酸二氢钾溶液梯度洗脱法 ,流速 (1.0mL·min-1) ,检测波长 2 96nm .柱温 :35℃。结果 :线性范围 :华毒0 .14 8μg～ 0 .74 6 μg,酯毒 0 .116 μg～ 0 .5 80 μg。回收率 :华毒为 10 0 .90 % ,RSD =1.0 0 4 % ,n =5 ;酯毒为 10 0 .6 4 % ,RSD =1.0 0 6 % ,n =5。结论 :本法简便、灵敏、准确、专属性强 。

HPLC法测定安替可胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量

高效液相色谱法测定安替可胶囊中华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量,色谱柱采用Kromasil C18;流动相为0.5%磷酸二氢钾溶液-乙腈（60∶40）（用磷酸调节pH值为3.2）;流速为0.8mL·min^-1,检测波长为296nm;两种成份总平均回收率为96.5%,RSD=0.8%;华蟾酥毒基与酯蟾毒配基的浓度分别在0.05-0.45mg·mL^-1范围内,质量浓度与峰面积具有良好的线性关系。本法稳定、准确,重现性好。

薄层扫描法测定强痛宁制剂中酯蟾毒配基的含量

目的 提供合适的方法，以控制强痛宁制剂中蟾酥的含量。方法 双波长薄层扫描法测定强痛宁制剂中酯蟾毒配基的含量，λs=295nm，λR=370nm，在1．102～5．510范围内与吸收面积积分值呈良好的线性关系（r=0．9994）。结果 平均加样回收率为98．88％，RSD值为0．71％（n=5）。结论 本法简单、准确，可作为蟾酥质量控制方法。

高效液相色谱双波长法同时测定七味清咽气雾剂中苦参碱、华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量

目的建立HPLC双波长同时测定七味清咽气雾剂中苦参碱、华蟾酥毒基和酯蟾毒配基的含量测定方法。方法采用Agilent XDB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm,5μm）,以乙腈-0.1%磷酸溶液（用三乙胺调节p H=7.8）为流动相梯度洗脱,流速1.0 m L·min-1,检测波长0~18 min为225nm,18~40 min为296 nm,柱温40℃。结果苦参碱、华蟾酥毒基、酯蟾毒配基的进样量分别在0.2632~3.1584（r=0.9999）、0.0504~0.7560（r=1.000）、0.0515~0.7725μg（r=0.9999）与峰面积呈良好的线性关系;平均回收率分别为100.2%（RSD=0.42%）、100.7%（RSD=1.3%）、96.6%（RSD=0.85%）。结论本法简便、准确,可用于七味清咽气雾剂的质量控制方法。