欧芹酚甲醚肟酯类化合物的制备及其抗乙酰胆碱酯酶活性研究

为研发具有AChE双位点抑制的新型乙酰胆碱酯酶抑制剂,本论文以香豆素类化合物欧芹酚甲醚为先导化合物,通过氧化、还原、酯化等反应设计合成了14个欧芹酚甲醚肟酯衍生物,并经核磁共振波谱(NMR)和质谱(MS)进行结构确证。采用Ellman法测定了目标化合物在1μmol·mL^(-1)下对乙酰胆碱酯酶的抑制活性,结果显示目标化合物4i和4n对乙酰胆碱酯酶的抑制率分别达到61.6%和51.2%,且与化合物浓度呈正相关。分子对接分析表明化合物4i可以和AChE的催化位点和外周阴离子位点结合。

3,4-吡喃并香豆素类化合物的合成及其抗胆碱酯酶活性

以取代苯酚为起始原料,合成了一系列取代4-羟基香豆素,再使其与取代芳香醛、丙二腈和DMAP发生多组分反应,成功制备了36种具有烯胺腈结构的3,4-吡喃并香豆素类化合物,它们的结构通过1H NMR谱、13C NMR谱和质谱得到证实。采用Ellman法筛查了化合物体外抑制AChE和BuChE的活性,结果显示:所有化合物对AChE和BuChE均有不同程度的抑制活性,但对BuChE的抑制活性总体较高,有9个化合物的抑制率超过80%。进一步测定9个高活性化合物的IC50值,发现E10和E11的活性最佳,其IC50分别为11.40μg·mL^(-1)和13.35μg·mL^(-1),与阳性对照加兰他敏的IC50值比较接近。分子对接实验证明,E10能够与BuChE的催化活性中心结合。以上研究不仅丰富了香豆素类化合物的分子库,还为选择性胆碱酯酶抑制剂的研发奠定了理论基础。

RP-HPLC法测定正常人血浆中阿司匹林酯酶活性

目的:建立同时测定血浆中阿司匹林和水杨酸浓度的高效液相色谱法,采用水杨酸浓度与阿司匹林和水杨酸浓度之和的比值表示阿司匹林酯酶的活性。方法:色谱条件:采用 Phenomenex C_(18)(4.6 mm×150 mm,5μm)色谱柱,流动相为乙腈-0.072 mmol·L^(-1)磷酸(22:78,v/v),流速1.0 mL·min^(-1),检测波长228 nm,柱温30℃。测定阿司匹林和水杨酸浓度,计算水杨酸浓度与阿司匹林和水杨酸浓度之和的比值,绘制概率分布直方图。结果:100名健康人血浆阿司匹林酯酶活性呈正态性分布;33名健康女性和67名健康男性血浆中阿司匹林酯酶活性均显示呈正态性分布。结论:本方法简便、准确、快速,适合于体外血浆中阿司匹林酯酶活性测定研究。

四种植物精油对蚊虫的熏杀活性及酯酶活性的影响

为了筛选高效、环保、低抗性的植物源灭蚊剂,揭示植物精油熏杀蚊虫的作用机理,测试了湖南香薷Elsholtzia hunanensis、藿香Agastache rugosus、八角Illicium verum和剑叶金鸡菊Coreopsis lanceolata精油对白纹伊蚊Aedes albopictus和致倦库蚊Culex pipiens quinquefasciatus成蚊的熏杀活性及对2种蚊虫体内乙酰胆碱酯酶(AChE)和非特异性酯酶(NSE)活性的影响。结果表明,4种植物精油对蚊虫的熏杀效果显著,但同种植物精油对2种蚊虫的熏杀活性有差异。藿香精油对白纹伊蚊的熏杀效果最好(LC50值为26.12μg·cm 3),八角精油对致倦库蚊的熏杀活性最强(LC50值为29.31μg·cm 3)。4种植物精油对白纹伊蚊和致倦库蚊体内AChE活性起诱导作用;对致倦库蚊体内NSE活性均有抑制作用,其中八角精油的酶活性抑制率最高(19.79%)。湖南香薷和八角精油对白纹伊蚊NSE活性有抑制作用,酶活性抑制率分别为34.90%和25.26%;藿香和剑叶金鸡菊精油对白纹伊蚊NSE活性有促进作用,酶活性增长率分别为25.66%和66.35%。综合分析4种植物精油对蚊虫的熏杀活性及对酯酶活性的影响,湖南香薷和藿香精油更适宜作为植物源灭蚊产品的备选材料。

高效氯氰菊酯对德国小蠊乙酰胆碱酯酶和非特异性酯酶活性的影响

目的 :了解高效氯氰菊酯对德国小蠊乙酰胆碱酯酶和非特异性酯酶活性的影响 ,为探索抗性机制及抗药性生化检测方法提供理论依据。方法 :采用Groun改进的Ellman方法和Valles方法分别测定施用不同浓度高效氯氰菊酯后 2 4h和 3 0h德国小蠊乙酰胆碱酯酶的酶活性及施药后 2 4h后德国小蠊非特异性酯酶的活性。结果 :随着施药浓度增加 ,乙酰胆碱酯酶酶活性受抑制程度逐渐增加 ,施药浓度在 0 .0 0 2 %以上各剂量组的乙酰胆碱酯酶酶活性与对照组相比 ,差异均有显著性。各施药组和对照组非特异性酯酶活性差异无显著性。结论

绶草中活性成分Spiranthol-A的快速制备及抑制乙酰胆碱酯酶活性研究

为建立“大孔吸附树脂柱色谱-凝胶柱色谱-HPLC”三步法快速制备绶草中活性成分Spiranthol-A方法,并评价其抑制乙酰胆碱酯酶活性,在HPLC导向下,将绶草95%乙醇提取物先经大孔吸附树脂柱色谱分离得到含Spiranthol-A部位,再通过Sephadex-LH 20柱色谱和HPLC纯化,得单体化合物Spiranthol-A;采用微孔板法评价Spiranthol-A体外抑制乙酰胆碱酯酶活性。结果表明:Spiranthol-A纯度较高且抑制乙酰胆碱酯酶活性较强,IC_(50)值仅为(10.58±0.44)μg·mL^(-1)。综上,该研究所建立的快速制备Spiranthol-A方法具有一定的应用前景,且Spiranthol-A具有显著抑制乙酰胆碱酯酶作用,值得深入研究。

磷酸酯酶活性对餐厨垃圾单相厌氧消化抑制的预警作用

为了研究磷酸酯酶活性对键厨垃圾单相厌氧消化抑制的预警作用，考察了单相CSTR反应器在容积负荷2．0-8．5kgVS／（m3.d）条件下的酸性和碱性磷酸酯酶活性，并同步分析了挥发性脂肪酸（VFAs）、容积产气率、pH值的变化．结果表明，酸性和碱性磷酸酯酶活性在容积负荷为2．0-4．0kgVS／（m3．d）时，平均值为14．1，9．8ugNP／（h.mL）；容积负荷为5．0-7．5kgVS／（m3.d）时，其平均值为138．4，23．6ugNP／（h.nlL）；容积负荷为8．5kgVS／（m3．d）的超负荷阶段达到峰值318．1，51．5rtgNe／（h.mL）后快速下降．磷酸酯酶活性骤升的时间较VFAs、容积产气率骤降超前2d、较pH值的骤降提前1d．磷酸酯酶活性较常规指标VFAs、容积产气率和pH值等对单相厌氧消化抑制具有一定的预警作用。

稻褐飞虱保幼激素酯酶活性的测定

稻褐飞虱保幼激素酯酶活性的测定戴华国程薇吴晓毅武淑文（南京农业大学植保系，农业部病虫监测与治理重点开放实验室，南京２１００９５）ＤＥＴＥＲＭＩＮＡＴＩＯＮＯＦＪＵＶＥＮＩＬＥＨＯＲＭＯＮＥＥＳＴＥＲＡＳＥＡＣＴＩＶＩＴＹＩＮＴＨＥＢＲＯＷＮＰＬＡＮ...

寄主植物对甜菜夜蛾的发育和繁殖及体内酯酶活性的影响

在恒温(2 8±1 )℃条件下考察了葱、苋菜、豇豆、蕹菜、菜心5种寄主植物对甜菜夜蛾SpodopteraexiguaH櫣ｂｎｅｒ的营养效应及体内羧酸酯酶、乙?铛ッ富钚缘挠跋?,结果表明,不同寄主植物对甜菜夜蛾幼虫和蛹的发育历期、存活率、蛹重、雌成虫产卵量等有显著影响,其中对雌成虫产卵量的影响最大。雌成虫产卵量最高为取食菜心的处理,其次是取食葱的处理。寄主植物对甜菜夜蛾体内羧酸酯酶、乙酰胆碱酯酶活性也有显著影响,但这些酶的活性与发育历期、存活率、产卵量无明显相关性。在进行预测预报、田间防治时应充分考虑寄主植物对甜菜夜蛾发育历期、产卵量、解毒酶活性的影响。

HPLC测定人血浆乙酰水杨酸酯酶活性及其测定培养条件的优化选择

目的建立测定血浆中乙酰水杨酸和水杨酸浓度的高效液相色谱法,采用水杨酸/（乙酰水杨酸＋水杨酸）表示乙酰水杨酸酯酶的活性,并对乙酰水杨酸酯酶体外培养条件进行了优化,测定血浆乙酰水杨酸酯酶活性可为临床合理用药提供科学依据。方法采用反相高效液相直接进样法测定血浆中乙酰水杨酸和水杨酸的浓度,并用正交实验设计分析法对其体外培养条件进行优化选择。结果乙酰水杨酸在0.08-5.12mg·L^-1内线性关系良好,水杨酸在0.05-4mg·L^-1内线性关系良好,体外最佳培养条件是A2B2C3D1,即以1mmol·L^-1乙酰水杨酸,200μL血浆,在pH为7.6的培养液中培养20min。结论本法操作简便、灵敏、快速,适用于血浆中乙酰水杨酸和水杨酸的浓度测定。

杭州淡色库蚊抗性及酯酶活性测试

目的 :用淀粉电泳酯酶谱区别酯酶 ,检测淡色库蚊成蚊个体酯酶 ,并结合对幼虫的生物测试结果 ,探讨抗性生化机制及防制对策。方法 :幼虫的生物测试采用浸渍法 ,成虫的非特异性酯酶测试采用淀粉电泳法。结果 :淡色库蚊对氯氰菊酯抗性最高 ,是敏感品系的 12 .30倍 ;其后顺次为敌敌畏、高效氯氰、溴氰菊酯、残杀威、仲丁威 ,抗性倍数分别为 5 .6 1、5 .0 9、4.6 5、4.43、3.98,胺菊酯、二氯苯醚菊酯、EBT、三氯杀虫酯抗性不明显。淀粉电泳结果蚊虫个体中存在过量产生的非特异性酯酶Estβ11和Estα 2 /β2 ,且蚊虫的酯酶谱较为复杂。 结论 :淡色库蚊对氯氰菊酯产生了中等抗性 ;其次对敌敌畏、高效氯氰、溴氰菊酯产生低抗性 ,宜换用药物。酯酶染色结果 ,存在引起有机磷抗性增高活性酯酶 ,酯酶谱且呈多态分布 ,与生物测试结果相一致 ,所以应减少敌敌畏的使用 ,注意轮换用药。

酶性DNA（Ⅱ）──蜘蛛和小牛胸腺DNA具有酯酶活性

发现虎纹捕鸟蛛（Ｓｅｌｅｎｏｃｏｓｍｉａｈｕｗｅｎ）和小牛（Ｂｏｓｔａｕｒｕｓ）胸腺ＤＮＡ具有酯酶活性；其与底物作用后最大吸收波长范围在５２０ｎｍ～５８０ｎｍ；具有一般酶促反应动力学的特点。认为ＤＮＡ酯酶活性可能与ＤＮＡ结构有关。

有机磷农药中毒后血乙酰胆碱酯酶与丁酰胆碱酯酶活性变化关系

目的观测有机磷农药中毒后全血、红细胞的乙酰胆碱酯酶和血清丁酰胆碱酯酶活性变化情况,分析乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶之间的相关性。方法①体外实验:以新鲜人血制备红细胞和血清,等量酶原中分别加入不同浓度的敌敌畏进行染毒后,观测全血、红细胞乙酰胆碱酯酶和血清丁酰胆碱酯酶染毒前后活性变化情况。②动物实验:将雄性Wistar大鼠随机分为3组,每组10只,3组按中毒程度轻、中、重分别予敌敌畏2mg/kg、5mg/kg、7mg/kg进行肌注染毒,观测大鼠染毒前后血中全血、红细胞乙酰胆碱酯酶和血清丁酰胆碱酯酶活性变化情况。结果敌敌畏中毒后,全血、红细胞乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶活性均出现降低,并且活性抑制变化趋势基本是平行的,两酶之间呈正相关关系,但反映的中毒程度存在差异。结论有机磷农药中毒时,不应以乙酰胆碱酯酶的分级诊断标准作为丁酰胆碱酯酶的分级诊断标准,可用乙酰胆碱酯酶和丁酰胆碱酯酶之间的差异系数加以修正。

7种有机磷农药对不同来源乙酰胆碱酯酶活性的抑制作用比较

目的研究7种不同有机磷农药对不同来源的乙酰胆碱酯酶的敏感性,筛选出适于指示这些农药的敏感酶。方法测定倍硫磷、草甘磷、对硫磷、马拉硫磷、毒死蜱、久效磷、甲拌磷7种有机磷农药对家蝇(Musca domestica)AChE、电鳗(Electrophorus electricus)电器官AChE活性。结果倍硫磷、草甘磷、对硫磷、毒死蜱、久效磷对家蝇AchE敏感,活性抑制率高于电鳗电器官AchE,在农药质量浓度为1000μg/L时,抑制率最高,分别为85.14%、75.28%、40.94%、85.43%、55.68%;马拉硫磷、甲拌磷对电鳗电器官AchE敏感,抑制率高于家蝇AchE,在农药质量浓度为1000μg/L时,抑制率最高,分别为45.29%、80.58%。结论倍硫磷、草甘磷、对硫磷、毒死蜱、久效磷对家蝇AChE敏感,马拉硫磷、甲拌磷对电鳗电器官AChE敏感。

不同种群棉铃虫三龄幼虫酯酶活性频率分布与抗药性的关系

选用室内饲养的棉铃虫Helicoverpaarmigera偃师和湖北 2个敏感品系、对辛硫磷高抗的PCP2 0品系、对氰戊菊酯高抗的YG4 5品系及 1999或 2 0 0 0年采自山东阳谷、河北邯郸和河南安阳的田间高抗种群 ,江苏徐州、湖北武汉的田间中等抗性水平种群和新疆沙湾的田间敏感种群 ,采用酶标板酶动力学法测定了各品系 (种群 )的 3龄幼虫个体酯酶活性频率分布和平均酯酶活性。结果表明 ,偃师敏感品系、湖北敏感品系和新疆沙湾田间敏感种群的酯酶活性个体频率分布相似 ,三个品系 (种群 )的平均酯酶活性相近 ,分别为 991、 1138、 10 5 5mOD·min- 1 ·larva- 1 。室内选育的PCP2 0抗性品系、YG4 5抗性品系及山东阳谷、河北邯郸、河南安阳田间高抗种群的高酯酶活性 (活性在 180 0mOD·min- 1 ·larva- 1 以上 )个体频率明显高于三个敏感品系 (种群 ) ,平均酯酶活性在 15 10～ 2 4 82mOD·min- 1 ·larva- 1 之间。江苏徐州、湖北武汉的田间中抗水平种群高酯酶活性个体频率及平均酯酶活性都介于敏感和高抗品系 (种群 )之间 ,平均酯酶活性为 12 5 8～ 14 0 4mOD·min- 1 ·larva- 1 。棉铃虫各品系 (种群 )平均酯酶活性与对拟除虫菊酯类杀虫剂抗性个体频率的相关性要比对有机磷类的高 ,相关系数分别为 0 82和 0 4 2。分?

太湖浮游植物细胞裂解速率的酯酶活性法初步研究

本研究从2009年8月至2010年10月,每月采集太湖3个不同富营养化湖区水样,运用酯酶活性法,测定了颗粒态酯酶、溶解性酯酶活性以及酯酶衰变周期,估算了太湖浮游植物细胞裂解速率.研究结果表明,太湖颗粒态酯酶活性为0.58～35.15 nmol FDA/(L.h),溶解性酯酶活性为0.55～7.59 nmol FDA/(L.h),酯酶衰变周期为7～75 h,细胞裂解速率为0.02～0.77 d-1,三个采样点细胞裂解速率没有显著差异.颗粒态酯酶活性与叶绿素a浓度之间具有显著的线性关系,说明运用酯酶活性法估算太湖浮游植物细胞裂解速率是可行.此外,叶绿素a浓度与温度变化趋势基本一致,梅梁湾和湖心叶绿素a浓度具有显著差异.贡湖湾叶绿素a浓度与细胞裂解速率之间具有显著的反比例关系,说明细胞裂解速率也是影响太湖藻类生物量的重要因素.