芳基硫酸酯酶A在帕金森病发病中的作用机制研究进展

帕金森病(PD)是第二大常见的神经退行性疾病,主要影响中枢神经系统的多巴胺神经元。目前其确切病因不明,尚无有效疗法,科研人员致力于寻找PD早期诊断生物标志物及其早期干预措施,以减缓或阻止PD进展。芳基硫酸酯酶A(ARSA)作为溶酶体基因编码的水解酶,其结构和功能及水平改变与PD的发生发展密切相关,因此,血浆ARSA水平可作为评价PD及其严重程度的潜在生物标志物。未来深入研究ARSA在PD发病中的可能作用机制,可为PD的防治提供新思路。

盐酸处理蚕卵酯酶A4的活性变化及其与滞育性的关系

从家蚕C108品种蚕卵精制酯酶A4，首次测定了产卵后24～96h浸酸蚕卵酯酶A4的ATPase活性。蚕卵经盐酸处理后在体外5℃1～2d或体外25℃1～3h出现酶活性峰。与低温活化蚕卵比较，产卵后24～96h的浸酸蚕卵，在体外5℃酶活性峰出现时间提早了8．5～22d，在体外25℃提早了3～9h。浸酸后蚕卵迅速解除滞育，滞育发育时间显著缩短。将不同卵龄未浸酸蚕卵与盐酸处理蚕卵酯酶A4的ATPase活性峰出现时间差制成曲线，在体外5℃或25℃的结果几乎都完全与5℃冷藏时蚕卵的滞育发育时间曲线重叠。盐酸处理蚕卵酯酶A4的活性变化与蚕卵活化有高度相关性。

体外盐酸处理与PIN对酯酶A4活性影响的关系

从家蚕Ｃ１０８ 品种产下后２ｄ 的滞育性卵纯化酯酶Ａ４ 及其活性抑制多肽ＰＩＮ，体外调查了盐酸处理与ＰＩＮ 对酯酶Ａ４ 的ＡＴＰａｓｅ 活性影响的关系。结果表明：盐酸处理不仅迅速消除了ＰＩＮ 对酯酶Ａ４ 的ＡＴＰａｓｅ 活性抑制作用；盐酸处理使蚕卵酯酶Ａ４ 的ＡＴＰａｓｅ 活性峰提早出现的时间还反映了蚕卵的滞育发育时间。

黑曲霉阿魏酸酯酶A的克隆、表达及快速酶活检测体系的建立

阿魏酸酯酶是参与半纤维素降解的重要酶类.为了提高阿魏酸酯酶的活性和其它性能,本文作者采用RT-PCR技术从黑曲霉CIB423.1中克隆了编码阿魏酸酯酶A的cDNA,构建了外泌表达的质粒,并将其转化到毕赤酵母GS115进行表达.通过检测培养液上清中的酶活,表明阿魏酸酯酶已成功在这一体系表达.同时,本文还建立了快速、稳定的酶活检测体系,为后续对阿魏酸酯酶酶突变体活性进行高通量筛选奠定了基础.

宇佐美曲霉阿魏酸酯酶A基因的克隆表达及酶学性质研究

本研究通过RT-PCR技术从宇佐美曲霉（Aspergillus usamii）E001中克隆了编码阿魏酸酯酶A的成熟肽cDNA（AusfaeA）,构建重组表达质粒pPIC9K-AusfaeA,将其经SacⅠ线性化后转化毕赤酵母（Pichia pastoris）GS115,通过抗G418筛选获得高拷贝重组子GS115/AusfaeA,用甲醇诱导表达重组阿魏酸酯酶（reAusFaeA）。SDS-PAGE显示,纯化后的reAusFaeA为单一条带,其表观相对分子质量为36 000;以阿魏酸甲酯为底物,经高效液相色谱法测定,该酶的酶活为29.4 U/mg;reAusFaeA的最适反应温度为45℃,并在45℃以下稳定;最适反应pH为5.0,在pH 4.0～6.0范围内稳定;多数测定的金属离子及EDTA对该酶的活性影响不大。结果表明在P.pastoris中成功实现了AusfaeA的异源表达,该重组酶优良的酶学性质表明其具有较大的工业应用潜力。

盐酸刺激量对家蚕卵酯酶A4活性的影响及其与蚕卵活化的关系

将产卵后 2 4～ 96h( 2 5℃ )的蚕卵 ,用相同或最佳盐酸刺激量 (浸酸后点青最快、点青卵率最高 )浸酸处理 ,卵龄越大 ,蚕卵点青越迟。蚕卵的点青时间在一定范围内随盐酸刺激量增大而提前 ,超过这一范围 ,则随刺激量增大而延迟。卵龄增大 ,蚕卵酯酶A4和ATPase特征性活性峰出现时间延迟 ;蚕卵经盐酸处理 ,该时间明显提前。产卵后 96h盐酸处理蚕卵 ,酯酶A4的活性峰出现时间随盐酸刺激量增大而提前。随着浸酸卵龄和盐酸刺激量的改变 ,蚕卵酯酶A4的活性峰出现时间与蚕卵点青时间发生一致的变化。盐酸刺激量能够影响蚕卵的活化 (或滞育发育期 )和发育速度。

脂蛋白相关磷酯酶A2在急性脑血栓形成诊断中的价值

目的探讨脂蛋白相关磷酯酶(Lp-PL)A2对急性脑血栓形成(CT)的诊断价值。方法选取通过病史、症状和体查拟诊为疑似脑CT患者115例,再采用诊断金标准分为脑CT(65例)和非脑CT组(50例),所有研究对象均采用,ELISA法测定Lp-PLA2,采用循证检验医学的方法统计各诊断价值性能指标。结果脑CT组Lp-PLA2为(250.6±145.6)ng/ml,较非脑CT组〔(152.9±59.0)ng/ml〕浓度非常显著升高(P<0.001)。Lp-PLA2对脑CT具有最高诊断效率的诊断界值为173.5 ng/ml,在该界值的诊断灵敏度为67.7%,特异性为84.0%,阳性预测值84.6%,阴性预测值66.7%,阳性似然比4.23,阴性似然比0.38,诊断效率74.8%。根据拟诊率50.5%,计算获得Lp-PLA2对脑CT的诊断概率81.2%,误诊概率18.8%,漏诊概率27.8%,排除概率72.2%。结论单一指标Lp-PLA2对急性脑CT的诊断价值为中等。

特发性膜性肾病肾组织磷酯酶A_2受体的检测及其临床意义

目的探讨特发性膜性肾病(idiopathic membranous nephropathy,IMN)患者肾组织磷酯酶A2受体(phospholipase A2receptor,PLA2R)的检测情况并分析其临床意义。方法回顾性分析101例经临床和肾脏病理确诊为IMN并随访1年以上的患者(在本单位肾活检前均未接受激素或免疫抑制剂治疗);13例临床和病理确诊为系统性红斑狼疮Ⅴ型、乙型肝炎、干燥综合征相关等继发性膜性肾病及20例非膜性肾病患者作为对照组。检测各组患者肾组织PLA2R及IgG分型的结果,并分析PLA2R阳性及阴性IMN患者治疗前后尿蛋白、肾功能的变化。结果 86.14%IMN患者肾组织PLA2R阳性,而继发性膜性肾病患者肾组织PLA2R阳性率仅为23.08%(vs.IMN组,P<0.001)。83.75%IMN患者肾组织PLA2R阳性伴IgG4中度以上阳性;继发性膜性肾病患者中,无一例肾组织PLA2R阳性同时伴IgG4中度以上阳性(vs.IMN组,P<0.01)。47例肾组织PLA2R阳性的IMN患者予激素或激素联合免疫抑制剂治疗,随访6个月以上,85.11%患者尿蛋白缓解,而9例肾组织PLA2R阴性的IMN患者尿蛋白缓解率只有30.0%(vs.IMN PLA2R阳性组,P<0.01)。结论 IMN患者肾组织PLA2R阳性率高。肾组织PLA2R阳性伴IgG4中度以上阳性是鉴别IMN和继发性膜性肾病的重要指标。激素或/和免疫抑制剂可以更有效地降低肾组织PLA2R阳性IMN患者的蛋白尿。肾组织PLA2R阳性可能可以作为预测激素或免疫抑制剂治疗有效与否的重要指标。

急性冠状动脉综合征患者脂蛋白相关磷酯酶A2血浆水平及其临床意义

目的研究脂蛋白相关磷酯酶A2在冠心病患者中的血浆水平,为临床早期诊治急性冠状动脉综合征提供客观指标。方法 230例行冠状动脉造影的心内科住院患者,根据临床表现及冠状动脉造影结果分组:急性冠状动脉综合征组98例,其中包括不稳定型心绞痛组61例,急性心肌梗死组37例;非急性冠状动脉综合征组81例,其中包括稳定型心绞痛组49例、冠状动脉慢性完全闭塞组32例;正常冠状动脉为对照组51例。采用夹心酶联免疫吸附法检测血浆脂蛋白相关磷酯酶A2水平。结果冠心病组脂蛋白相关磷酯酶A2和高敏C反应蛋白水平显著高于对照组(P<0.001);急性冠状动脉综合征组脂蛋白相关磷酯酶A2和高敏C反应蛋白水平显著高于非急性冠状动脉综合征组(P<0.05或P<0.001)。与对照组比较,稳定型心绞痛组血浆脂蛋白相关磷酯酶A2水平无显著性增高(P>0.05),不稳定型心绞痛组、急性心肌梗死组、冠状动脉慢性完全闭塞组血浆脂蛋白相关磷酯酶A2水平有极显著性增高(P<0.001),而高敏C反应蛋白水平在所有亚组显著增高(P<0.001)。结论急性冠状动脉综合征患者血浆脂蛋白相关磷酯酶A2水平明显增高,其水平升高提示冠状动脉粥样硬化斑块的不稳定性,有可能作为急性冠状动脉综合征的有效预测指标。

家蚕多肽抑制因子对酯酶A4的ATP酶活性影响

从产下后２ｄ的家蚕Ｃ１０８品种滞育性卵精制酯酶Ａ４和其多肽抑制因子ＰＩＮ，体外调查了ＰＩＮ对酯酶Ａ４的ＡＴＰ酶活性影响。酯酶Ａ４和ＰＩＮ５℃混合２５～１３ｄ，除去ＰＩＮ后５℃保护，ＡＴＰ酶活性峰都在１２～１４ｄ后出现；２５℃混合时，除去ＰＩＮ后，ＡＴＰ酶活性峰出现时间为混合时间再加１２～１４ｄ。利用ＭＡＬＤＩＭＳ方法，首次检测到纯化的酯酶Ａ４和合成ＰＩＮ的结合体。

家蚕卵温汤处理酯酶A4的活性变化

温汤孵化法是一种重要的家蚕卵人工孵化方法。酯酶A4 (EsteraseA4 ,EA4 )是家蚕卵的滞育生物钟蛋白质。将家蚕C10 8品种卵温汤处理 ,纯化出EA4 ,测定了EA4的ATP酶 (ATPase)活性变化。结果显示 :产卵后 15h(2 5℃ )的温汤处理蚕卵 ,其EA4的ATP酶最大活性 ,体外 5℃或 2 5℃条件下 ,分别出现在处理后 2 4h或 1.5h ,蚕卵也随即解除滞育 ,获得孵化能力 ;产卵后 30h(2 5℃ )的温汤处理蚕卵 ,其点青卵率随温汤刺激量增大而提高 ,点青时间随刺激量增大而缩短 ;蚕卵EA4的ATPase最大活性出现时间也随温汤刺激量增大而提前 ;且温汤处理蚕卵EA4的活性变化与蚕卵活化有高度相关性。

Ⅰ型磷酯酶A＿2免疫分析及初步应用研究

Ⅰ型磷酯酶Ａ＿２免疫分析及初步应用研究郝秀华，颜光涛，李振甲（解放军总医院生化研究室北京１００８５３）磷酯酶Ａ＿２（ＰＬＡ＿２）是一类广泛存在于机体，具有多种生物活性的磷酯水解酶类。该酶激活后强烈影响细胞膜磷脂代谢，可破坏胞膜稳定性及信号传递。研究表...

体外25℃家蚕卵酯酶A4的ATP酶活性变化及其与滞育性的关系

从家蚕卵纯化出EA4酶蛋白 ,调查了温度对EA4的ATP酶最高活性和其出现时间的影响以及与蚕卵滞育性的关系。EA4的酶活性反应温度为 2 5℃时比 5℃时提高约 1 0倍。从滞育性卵和盐酸处理卵纯化EA4 ,或者用EA4的活性抑制多肽 (PIN)体外处理酶蛋白质 ,2 5℃中EA4的最高活性出现时间比 5℃中显著提早。随纯化时卵龄或PIN处理时间的改变 ,2 5、5℃中EA4的最高活性出现时间以及与蚕卵 5℃冷藏时滞育发育时间有相同趋势的变化。体外 2 5℃和体外 5℃一样 。

加味参芪地黄汤治疗气阴两虚肾络瘀阻型血清抗M型磷酯酶A2受体抗体阳性膜性肾病低中风险患者的临床疗效观察

目的探讨加味参芪地黄汤治疗气阴两虚肾络瘀阻型血清抗M型磷酯酶A2受体(M-type phospholipase A2 receptor,PLA2R)抗体阳性膜性肾病低中风险患者的临床疗效。方法选取2020年10月至2021年10月首都医科大学附属北京中医医院收治的60例血清PLA2R抗体阳性低中风险膜性肾病患者,采用随机数字表法分为治疗组和对照组,每组30例。对照组采用常规西药治疗,治疗组在对照组的治疗基础上予加味参芪地黄汤治疗。两组均治疗24周。比较两组进入高危组例数、血栓栓塞发生风险,以及治疗前后血清ALB、24 h尿蛋白定量和血清PLA2R抗体指标变化及中医证候评分,比较两组中西医治疗的临床疗效。结果与对照组比较,治疗组进入高危组及发生血栓栓塞类事件总例数较少[2例(6.7%)比8例(26.7%),0例(0.0%)比4例(13.3%)],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,治疗组血清ALB在第8周[(32.27±4.10)g/L]、第16周[(33.53±4.69)g/L]及第24周[(35.33±4.63)g/L]均较治疗前[(30.85±4.19)g/L]明显升高,差异有统计学意义(P<0.05),对照组血清ALB在第24周高于治疗前[(32.60±3.98)g/L比(29.72±2.24)g/L],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗后,两组24 h尿蛋白定量均低于本组治疗前,治疗组24 h尿蛋白定量在第16周[(2274.83±1669.53)mg]和第24周[(1883.23±1905.88)mg]时均低于对照组[(3160.37±2438.51)mg,(3013.47±2784.83)mg],差异有统计学意义(P<0.05)。治疗组血清PLA2R抗体滴度在第8周、第16周及第24周时均低于本组治疗前[(68.27±39.61)Ru/ml,(47.07±44.87)Ru/ml,(36.87±54.20)Ru/ml比(89.53±35.91)Ru/ml],且均低于对照组[(88.80±79.61)Ru/ml,(74.50±88.22)Ru/ml,(71.57±90.74)Ru/ml],差异均有统计学意义(P<0.05)。治疗组的中医疗效和西医疗效均明显高于对照组(93.3%比60.0%,80.0%比46.7%),差异均有统计学意义(P<0.05)。结论加味参芪地黄汤治疗气阴两虚肾络瘀阴型血清PLA2R抗体阳性的低中风险膜性肾病患者安全有效,可早期缓解膜性肾病病情。

蝰蛇ammodytes磷酯酶A_2基因密码运用的研究

运用多变量统计分析法，对蝰蛇ａｍｍｏｄｙｔｅｓ五种磷酯酶Ａ＿２基因的密码运用进行了研究。结果提示：①基因的密码运用有明显的偏爱性，喜欢在密码的第三位上使用鸟嘌呤（Ｇ）和胞嘧啶（Ｃ）。表明这些基因在进化中承受了ＧＣ突变的压力，位于染色体Ｒ带上和ＧＣ丰富的区域。②基因密码的有效数（ＮＣ）从５０．９至５６．７；在ＮＣ坐标里，它们位于ＧＣ３Ｓ曲线之上部（ａｍｍｏｄｙｔｉｎＩ＿２除外）；在密码第三位上Ｃ的量不等于Ｃ。提示这些基因同义密码的偏爱性不仅由ＧＣ突变压力所致，也受到翻译选择性作用的影响。③与来自单细胞生物（如大肠杆菌、酵母菌等）和较高等的真核细胞生物（果蝇）的高表达基因密码运用方式相比较，发现它们都偏爱密码ＴＡＣ、ＴＴＣ、ＡＴＣ和ＧＡＣ。这是世界上第一篇关于ＰＬＡ＿２基因密码运用的报道。

家蚕滞育卵中酯酶A_4的生理作用研究

家蚕卵中酯酶A_4与滞育发育具有密切的关系。研究表明:此酶具有较低的水解专一性,是一种广泛作用于生物体内各种酯键的酶。酯酶A_4能水解结合型胆甾醇的酯键,并且其活性表现与滞育发育的时间进程相一致。酯酶A_4对cAMP的水解作用表现为两个峰,而对cGMP的水解作用,在精制后第10—13日间活性高于其它时间,但变化较缓慢。

脂蛋白相关磷酯酶A2基因A379V多态性与冠心病关系的Meta分析

目的对脂蛋白相关磷酯酶A2基因A379V多态性与冠心病的相关性进行Meta分析。方法制定文献的纳入标准及检索策略,计算机检索PubMed、ElsevierSDOS系统、外文医学核心期刊、维普中文科技数据库、万方数据库和中国期刊全文数据库中的文献,收集脂蛋白相关磷酯酶A2基因A379V多态性与冠心病相关性的病例对照研究,剔除不符合要求的文献,应用STATA10.0和RevMan5.0软件进行Meta分析。结果共7篇文献符合纳入标准,包括6718例病例和3824例对照。Meta分析结果显示脂蛋白相关磷酯酶A2基因A379V位点VV/AA和VA/AA与冠心病的关系的合并OR值(95%CI)分别为0.98(0.66～1.46)和0.98(0.89～1.07),均无统计学意义(P>0.05)。按种族进行分组后,亚洲人群和欧洲人群脂蛋白相关磷酯酶A2基因A379V位点VV/AA与冠心病易感性的关系研究的合并OR值(95%CI)分别为1.15(0.50～2.61)和0.89(0.68～1.17),均无统计学意义(P>0.05);亚洲人群和欧洲人群VA/AA与冠心病易感性的关系研究的合并OR值(95%CI)分别为1.11(0.96～1.27)和0.88(0.66～1.18),无统计学意义(P>0.05)。结论根据目前研究结论 ,未发现脂蛋白相关磷酯酶A2基因A379V多态性与冠心病易感性有关。

家蚕滞育生物钟蛋白质酯酶A4研究进展

生物钟普遍存在于生物体内，协调肌体的功能。与光感知型昆虫生物钟依赖视叶或脑驱动不同，家蚕的滞育生物钟依赖酯酶Ａ４（ＥＡ４）感知低温、盐酸刺激等信息，从而启动基因，开始 胚胎发育。ＥＡ４由 Ｈｉｓ到 Ｔｙｒ的 １５５个氨基酸残基构成，在 ２２位 Ａｓｎ处有糖基结合，ＥＡ４的测时功 能与自身的结构有关，受多肽抑制因子（ＰＩＮ）调控。ＰＩＮ是蚕卵内的一种由Ｓｅｒ到 Ａｓｎ的 ３８个氨基 酸残基的多肽，从卵特异蛋白质（ＥＳＰ）加工而来。

老年急性脑梗死患者血浆脂蛋白相关磷酯酶a2水平变化及其临床意义

目的探讨通过检测血浆脂蛋白相关磷酯酶a2(Lp-LPA2)的水平变化评价老年急性脑梗死患者的病情。方法选取2011年1月至2013年1月在该院入院治疗的103例老年急性脑梗死患者作为观察组,选取91例健康老人作为对照组。采用酶联免疫吸附法测定两组的血浆Lp-LPA2水平。采用Spearman相关分析老年急性脑梗死患者的血浆Lp-LPA2水平与神经功能缺损评分(NIHSS)评分的关系。再根据梗死体积将患者分为大体积梗死、中体积梗死和小体积梗死3个亚组患者,以及根据患者的神经功能损伤程度将患者分为重度神经损伤、中度神经损伤和轻度神经损伤三个亚组。再分别分析血浆Lp-LPA2与梗死体积和神经功能损伤程度的相关性。结果急性脑梗死患者的血浆Lp-LPA2水平明显高于对照组(P<0.05);各亚组血浆脂蛋白相关Lp-LPA2水平也存在显著性差异(P<0.05)。结论老年急性脑梗死患者的血浆Lp-LPA2水平明显高于健康时的水平,可通过测定血浆脂蛋白相关磷酯酶a2的水平帮助判定患者的病情。