长效胰岛素类似物的临床研究进展

现有中/长效胰岛素制剂存在变异性高、作用峰值明显及夜间低血糖危险性高的缺点。每天注射1次,大多数糖尿病患者不能维持24h基础胰岛素水平。目前延长胰岛素作用的方法一种是使胰岛素等电点接近中性,如Glargine可延缓胰岛素在皮下的吸收,能显著降低空腹血糖水平,同时夜间低血糖发生率降低;另一种是使用可溶性脂肪酸酰化胰岛素,如Detemir,吸收后与白蛋白结合,延缓其作用。

脂肪酸酰化修饰胰岛素的纯化

目的:脂肪酸酰化修饰的胰岛素类似物是常见的获得长效胰岛素的手段,但因其反应位点的偏差易产生多种传统纯化工艺较难以分离的杂质。本文探索以聚苯乙烯类有机聚合物填料为固定相纯化脂肪酸酰化修饰的胰岛素方法。方法:经过填料对比,有机溶剂浓度和pH选择后,再经过一系列正交试验优化,HPLC方法检验纯度和含量,质谱分析定性终产品,从而确定最佳条件。结果:经过对不同厂家不同型号的聚苯乙烯类有机聚合物填料的比较,填料选定采用纳微Uni Ps 30-300为最佳,其目的蛋白吸附量比为6.32 mg/ml,洗脱率为95.27%。在一系列的梯度实验中证实采用30-50%异丙醇浓度最佳。之后的pH对比得出,pH在4.0以下才能分离得到纯度在95%以上的产品。在以上一系列的单因素实验基础上,最后经过正交实验优化证实最佳的洗脱方案为采用A相为含25 mM硫酸铵的0.1 M磷酸盐缓冲液,pH 3.0;B相为异丙醇流动相,洗脱梯度为30-50%B的10 CV洗脱,流速60 cm/h。放大验证可以得到纯度大于97.5%,回收率70%以上的结果。结论:此方法具有分离效果好,成本低,易于放大的优点。