液相色谱-串联质谱法测定人血浆中染料木素及其葡萄糖醛酸代谢物

目的建立液相色谱-串联质谱联用法测定人血浆中染料木素（雌激素类药物）及其葡萄糖醛酸代谢物（GGS）并研究其在健康人体中的药代动力学。方法10例健康受试者空腹口服染料木素50mg，血浆加入内标物地塞米松后，经液-液萃取，色谱柱为Capcell Pak C8（2mm×150mm，5μm），流动相为：甲醇-5mmol·L^-1乙酸铵-乙腈（70：20：10），以ESI源正离子MRM模式测定染料木素的血药浓度，GGS先酶解为原形后间接测定，用DAS2．0程序计算药代动力学参数。结果线性范围为0．3～500．0μg·L^-1（1=0．9983），回收率在92．9％～104．9％，绝对回收率在74．2％～89．2％，13内、13间变异（RSD）均〈15％。染料木素和GGS的主要药代动力学参数：tmax分别为（5．0±I．3），（6．0±2．4）h，Cmax分别为（10．1±6．3），（218．7±68．6）μg·L^-1，AUC0-1分别为（31．2±10．3），（3344．0±1635．0）μg·h·L^-1，AUC0-∞分别为（33．9±11．4），（3703．0±2031．0）μg·h·L^-1。结论测定方法灵敏、准确、快速、特异性强，适用于染料木素药代动力学研究。

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶基因多态性对药物代谢影响的研究进展

由尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶（UDP-glucuronosyltransferase,UGT）催化完成的葡萄糖醛酸结合反应是生物体内重要的Ⅱ相代谢途径,它与毒性或活性物质结合形成葡萄糖醛酸苷,将内源性、外源性化合物通过胆汁或肾脏排出体外。UGT是一个超家族酶,因主要利用UDP-尿苷二磷酸葡糖醛酸为糖基供体而得名。人类UCT广泛分布于体内的各种组织,包括肾、脑、皮肤、肠、脾、胸腺、心脏等,

淫羊藿次苷Ⅱ葡萄糖醛酸代谢产物的制备与表征

目的:鉴定淫羊藿次苷Ⅱ葡萄糖醛酸代谢产物,并进行制备与结构表征。方法:应用人肝微粒体孵育体系对淫羊藿次苷Ⅱ葡糖醛酸结合代谢途径进行鉴定,并应用重组UGT1A1高效制备葡萄糖醛酸代谢产物,最后经NMR对该产物结构进行表征。结果:淫羊藿次苷Ⅱ在人肝微粒体中的主要代谢产物为淫羊藿次苷Ⅱ-7-O-葡萄糖醛酸代谢产物。结论:采用体外孵育方法可以高效特异地制备淫羊藿次苷Ⅱ的葡萄糖醛酸代谢产物。

电喷雾离子阱质谱法直接测定几种药物的葡萄糖苷酸型代谢物

为研究药物代谢产物的质谱规律，用电喷雾离子阱质谱法对溶液中乙氧苯柳胺、ＳＦＺ４７羧基衍生物、５羟基普罗帕酮及普罗帕酮的βＤ葡萄糖苷酸型代谢物的结构进行了测定。结果表明，它们的（－）ＥＳＩＭＳ均生成［Ｍ－Ｈ］－准分子离子，（－）ＥＳＩＭＳ２和（－）ＥＳＩＭＳ３则分别生成ｍ／ｚ１７５和ｍ／ｚ１１３碎片离子。

电喷雾-串联四极杆-飞行时间质谱法测定药物的葡萄糖醛酸结合物

本文采用电喷雾 -串联四极杆 -飞行时间 ( ESI-QQ-TOF)质谱对生物样品中的乙氧苯柳胺、3 H-1 ,2 -二氢 -2 -( 4-甲基苯胺基 )甲基 -1 -吡咯里嗪酮 ( SFZ-4 7)和利胆酚的β-D-葡萄糖醛酸结合物进行了质谱分析。在负离子条件下均有响应 ,而且 MS2均产生碎片 m/ z1 75 .0 2 4 1与葡萄糖醛酸的负离子质量数吻合 ,MS3分析均产生 m/ z 1 1 3 .0 2 3 8即葡萄糖醛酸去掉一分子 H2 O和 CO2 。

白皮杉醇苷在大鼠体内外的葡萄糖醛酸结合代谢研究

白皮杉醇苷(PG)是藏边大黄中一种天然抗氧化剂,前期研究发现其极易发生代谢。本文主要研究PG在大鼠体内外的葡萄糖醛酸结合代谢特征。SD大鼠经尾静脉注射给予PG(20 mg/kg),采集给药后胆汁样品,采用LC-MS对主要代谢产物进行结构推测。在此基础上,研究大鼠肝微粒体体外温孵体系中PG的葡萄糖醛酸结合代谢,并测定酶促反应动力学参数。实验结果显示SD大鼠经尾静脉注射给予PG,可在胆汁中快速检测到多种PG及其衍生物的葡萄糖醛酸结合代谢产物。在大鼠肝微粒体体外温孵体系中,PG代谢生成两个与体内一致的单葡萄糖醛酸结合代谢物,其葡萄糖醛酸结合代谢的最大反应速率(Vmax)、米氏常数(Km)和肝内清除率CLint(Vmax/Km)分别为10.11 nmol/(min·mg)、0.36 mmol/L和0.028 m L/(min·mg)。PG经静脉途径进入大鼠体内可经肝脏被快速地广泛代谢,葡萄糖醛酸结合代谢是其体内消除的主要途径之一。大鼠肝脏的葡萄糖醛酸转移酶对PG有较强的亲和力,可催化PG发生快速的葡萄糖醛酸结合代谢。

葡萄糖醛酸内酯对小鼠对乙酰氨基酚代谢的影响

目的:研究葡萄糖醛酸内酯对小鼠的对乙酰氨基酚代谢的影响.方法:采用HPLC测定给药后不同时间血浆药物及其代谢产物浓度,求得药物动力学参数.结果:与对照组相比,葡萄糖醛酸内酯对小鼠的对乙酰氨基酚的代谢速率和结合代谢均无影响.结论:单用葡萄糖醛酸内酯不能发生结合解毒作用.

异丙酚在人肝微粒体中葡萄糖醛酸化代谢的方法学研究

目的建立UPLC测定异丙酚及其葡萄糖醛酸化代谢产物的方法,并考察异丙酚在体外人肝微粒体中的葡萄糖醛酸化代谢酶促动力参数。方法采用B Eclipse Plus C18色谱柱(1.8μm,2.1×50mm),以乙腈和纯水为流动相进行梯度洗脱;流速为0.35m L·min-1,进样体积15μL,检测波长220 nm;柱温40℃。采用体外微粒体药物代谢酶孵育法考察异丙酚葡萄糖醛酸化代谢酶促动力学参数。结果异丙酚在15~1200μm,异丙酚葡糖糖醛酸化代谢产物在0.15~50μm范围内呈良好的线性关系,精密度与稳定性均良好。异丙酚在人肝微粒体中米氏常数(Km)和最大反应速度(Vm ax)分别为127.30μM、1.39nmol/(min·mg),药物清除率(CLint)10.92μL/(min·mg)。结论本方法简便、快速、准确,可用于考察异丙酚在体外的葡萄糖醛酸化代谢,异丙酚是UGT1A9的特异性底物,可推广用于考察UGT1A9相关的药物间相互作用。

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶介导的黄酮类化合物代谢研究进展

黄酮类化合物广泛存在于膳食中,因具有多种生物活性,其在医药或食品工业中的应用也逐年增加。其在人体中主要经过由尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(UDP-glucuronosyltransferases,UGT)催化的Ⅱ相反应而代谢。除此之外,UGT在体内还介导了大量药物和天然化合物的代谢清除。本文总结了近年来新发现的黄酮类化合物UGT代谢研究的最新进展。

基于尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶的抑制性药物相互作用的体外定量预测

尿苷二磷酸葡萄糖醛酸基转移酶(UDP-glucuronosyl-transferase,UGT)是一个结合酶超家族,催化了多种药物。已有许多与葡萄糖苷酸化相关的抑制性药物相互作用研究。体外实验方法和定量策略已经成功运用于体内葡萄糖醛酸化清除率以及抑制性药物相互作用的预测。该综述从这一领域相关基础知识和预测方法以及实验影响因素进行概述。

香芹酚在人肝和肠道葡萄糖醛酸化代谢中代谢酶的鉴定

葡萄糖醛酸化是香芹酚的一个重要代谢途径。至今还没有人体内有关香芹酚葡萄糖醛酸化的代谢特征和关键酶的研究报道。本论文利用人肝微粒体（HLM），人肠微粒体（HIM），12个人源性重组葡萄糖苷酸转移酶单酶（UGT）和不同实验动物的肝微粒体对香芹酚的葡萄糖醛酸化的代谢特征进行了研究。香芹酚分别与人肝微粒体，人肠微粒体，UGTIA3，UGTIA6，

水飞蓟宾非对映异构体在大鼠肝微粒体中葡萄糖醛酸化代谢的酶动力学比较研究

目的比较水飞蓟宾A(silybin A,sa)和水飞蓟宾B(silybin B,sb)在大鼠肝微粒体中葡萄糖醛酸化代谢的酶动力学特性。方法将系列浓度的水飞蓟宾(sa和sb的质量比为45∶53)加入到大鼠肝微粒体孵育液中进行孵育,采用HPLC法分别测定β-葡萄糖苷酸酶水解前和水解后孵育液中sa和sb的浓度,据此计算sa和sb的葡萄糖醛酸结合物的浓度,绘制酶动力学曲线,并计算酶动力学参数。结果 sa和sb的最大反应速率(vmax)分别为(2.80±0.14)mmol·min^(-1)·kg^(-1)和(4.21±0.31)mmol·min^(-1)·kg^(-1),米氏常数(Km)分别为(36.66±7.52)μmol·L-1和(89.78±23.08)μmol·L-1,内在清除率(Clint)分别为76.38 L·min^(-1)·kg^(-1)和46.89 L·min^(-1)·kg^(-1)。结论水飞蓟宾在大鼠肝微粒体中的葡萄糖醛酸化代谢具有立体选择性,sb的代谢速率快于sa。

补骨脂酚在大鼠和人肝微粒体中细胞色素P450酶和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶代谢稳定性及性别差异

目的探究补骨脂酚在大鼠和人肝微粒体中细胞色素P450酶(CYP酶)和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT酶)的代谢稳定性及性别差异。方法补骨脂酚分别与雄、雌性SD大鼠和男、女性人肝微粒体在37℃与不同辅酶因子孵育,应用高效液相色谱(HPLC)法测定补骨脂酚的剩余浓度,采用底物消除法观察补骨脂酚的代谢稳定性。结果补骨脂酚在雄、雌性SD大鼠肝微粒体中,CYP酶介导的Ⅰ相代谢固有清除率(Clint)分别是326.6±15.4和(77.2±4.8)mL·min-1·kg-1,雄性代谢显著快于雌性(P<0.01);UGT酶介导的Ⅱ相代谢Clint分别是164.5±8.4和(419.1±24.1)mL·min-1·kg-1,雌性代谢显著快于雄性(P<0.01);CYP酶和UGT酶共同代谢的Clint分别是1063.1±27.2和(781.2±16.5)mL·min-1·kg-1,雄性代谢显著快于雌性(P<0.01)。在男、女性人肝微粒体中,CYP酶介导的Ⅰ相代谢Clint分别是24.8±2.1和(17.6±1.0)mL·min-1·kg-1,男性代谢显著快于女性(P<0.01);UGT酶介导的Ⅱ相代谢Clint分别是176.4±26.5和(165.9±8.6)mL·min-1·kg-1,代谢无显著性别差异;CYP酶和UGT酶共同代谢的Clint分别是262.5±20.9和(236.2±10.5)mL·min-1·kg-1,代谢无显著性别差异。结论补骨脂酚在SD大鼠和人肝微粒体中,均发生CYP酶介导的Ⅰ相代谢和UGT酶介导的Ⅱ相代谢反应,且代谢稳定性具有一定的种属和性别差异。

丹酚酸A体外葡萄糖醛酸结合代谢种属差异的研究

目的研究丹酚酸A(salvianolic acid A,SAA)在人和大鼠体外肝微粒体中的葡萄糖醛酸结合代谢反应的种属差异。方法采用人和大鼠肝微粒体体外温孵体系进行SAA的葡萄糖醛酸结合代谢,通过高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS)检测确定产物峰;参考SAA标准曲线计算代谢产物生成量,并通过产物生成量计算酶促动力学参数。结果 SAA在人和大鼠肝微粒体中的葡萄糖醛酸结合代谢均产生4个相同的葡萄糖醛酸结合代谢产物,其最大反应速率(Vmax)分别为0.585,2.08 nmol·min-1·mg-1;米氏常数(Km)分别为0.037,0.065 mmol·L-1。结论 SAA在人和大鼠体外肝微粒体中发生的葡萄糖醛酸结合代谢产物无差异,但酶促反应动力学参数Vmax及Km均有一定的差异,可能与其葡萄糖醛酸转移酶(UGTs)的活性有关。

乙基葡萄糖醛酸苷的检测及其在法医毒理学中的应用

乙基葡萄糖醛酸苷(ethylgl ucuronide,EtG)是乙醇在人体内的特异性代谢物。迄今,已有相当数量的文献针对EtG的检测方法、代谢动力学及实际应用等进行了深入探讨。本文综述了EtG的各种检测方法、EtG含量与乙醇摄入量的相互关系以及如何利用EtG含量区分是否酗酒、判断尸体中乙醇来源等,阐述EtG在法医毒理学领域的重要意义。

重组β-葡萄糖醛酸苷酶转化甘草酸的定向性改造

为提高重组β-葡萄糖醛酸苷酶的底物特异性,通过易错PCR方法对其进行突变并构建突变体文库,利用薄层层析和高效液相色谱对突变文库进行筛选,获得了突变株PGUS(M51)-E,其底物特异性提高了41%。突变酶的酶学特性研究发现,该突变酶的最适pH值和温度较PGUS-E无显著变化,酶活力下降了16.86%,Tm值提高了5℃;序列分析结果表明:PGUS(M51)-E共发生5处突变,其中3处发生在糖基结合域。因此,利用定向进化策略能有效提高β-葡萄糖醛酸苷酶的底物识别特异性。

对硝基苯基-β-D-葡萄糖醛酸苷钠盐的合成

以葡萄糖醛酸内酯和对硝基酚为原料，经过五步反应合成了对硝基苯基－β－Ｄ－葡萄糖醛酸苷钠盐（ＰＮＰ－ＧＵＡ），熔点２２０℃，并用红外和核磁共振予以确认。以ＰＮＰ－ＧＵＡ为底物，在检测环境样品的大肠杆菌中，得到满意的结果。

肝损状态下尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶研究进展

肝脏是人体内最重要的代谢器官,包含绝大部分的Ⅰ相和Ⅱ相代谢酶,在内源性和外源性物质的代谢解毒方面起着重要的作用。参与葡萄糖醛酸代谢的尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)是Ⅱ相代谢中最重要的酶,与常见的CYP450酶相比,研究相对滞后,尤其在肝损伤状态下UGT的相关研究仍处于探索阶段。本文参考最新UGT的研究成果,综述了UGT分子生物学目前研究的概况、肝脏分布及其与肝脏疾病的关系;总结了几种不同诱因的肝损伤病理状态UGT表达和葡萄糖醛酸代谢的变化情况并且深入探讨了相关机制,旨在为药物的肝脏代谢尤其是在肝损状态下葡萄糖醛酸结合消除研究提供一定的参考依据,为肝脏疾病患者的临床合理用药提供指导。

产紫青霉中β-葡萄糖醛酸苷酶的诱导表达

针对产紫青霉(Penicillium purpurogenum)Li-3发酵生产β-葡萄糖醛酸苷酶存在的碳代谢阻遏现象,研究β-葡萄糖醛酸苷酶的高效诱导表达策略。在发酵条件优化的基础上,建立了新的产酶诱导工艺:葡萄糖的初始质量浓度5 g/L,在葡萄糖耗尽时加入20%诱导剂(10 g/L GL+1.2%Tween80)进行诱导,每24 h添加1次诱导剂,诱导72 h后立即转到40℃摇床发酵48 h。采用该工艺进行发酵,菌体出现了"二次生长"现象,比酶活从647.99 U/mL提高至2 356 U/mL,提高了近3倍。

中国肝移植患者服用麦考酚钠肠溶片后霉酚酸及其代谢物的药动学研究

目的：探讨肝移植患者口服麦考酚钠肠溶片（EC-MPS）后不同阶段霉酚酸（MPA）及其代谢物的药动学特征。方法：采集24例肝移植患者服用EC-MPS后第1周和第3周0-12 h血标本,采用LC-MS/MS法测定MPA、7-O-葡萄糖醛酸结合代谢物（MPAG）、酰化葡萄糖醛酸代谢物（Ac MPAG）等血浆中药物浓度,采用非房室法计算药动学参数。结果：服用EC-MPS1周与3周后,MPA的Cmax、AUC0-12、t1/2分别为（18.1±8.75）与（20.7±16.0）μg·ml^-1、（42.7±17.5）与（47.1±23.9）μg·h·ml^-1、（3.33±2.81）与（3.30±1.89）h,其主要药动学参数在第1周与第3周无显著差异;Ac MPAG的Cmax、AUC0-12、t1/2分别为（2.50±1.86）与（1.78±1.72）μg·ml^-1、（14.5±11.7）与（6.97±6.57）μg·h·ml^-1、（4.48±2.53）与（3.76±1.89）h,给药后第1周Ac MPAG的AUC0-12显著高于第3周（P〈0.01）;MPAG的Cmax、AUC0-12、t1/2分别为（171.6±135.4）与（152.2±115.9）μg·ml^-1、（1 299±1 204）与（1 051±561）μg·h·ml^-1、（8.73±4.25）与（7.75±2.87）h,其主要药动学参数在第1周与第3周无显著差异。服用吗替麦考酚酯（MMF）与EC-MPS患者的MPA的Cmax、Tmax、t1/2存在显著差异（P〈0.05）;治疗3周后代谢物MPAG的Cmax、AUC0-12显著高于服用MMF的患者（P〈0.05）。结论：不同阶段MPA蓄积不明显,但代谢物体内暴露差异明显。与服用MMF的患者相比,EC-MPS吸收延缓,而体内暴露无差异。