酰基激酶和酰基CoA合成酶对螺旋霉素合成的影响

螺旋霉素链霉菌生物合成螺旋霉素的过程受许多酶的调控作用。酰基激酶和酰基 Co A合成酶是螺旋霉素内酯环合成的重要酶。实验测定了它们的酶活趋势和酶的影响因子。结果表明 ,酰基激酶和酰基 Co A合成酶都有两个活力峰 ,前者活性集中在发酵中前期 ,后者活性集中在发酵中后期。实验发现 Co2 + 、Mn2 + 对酰基激酶和酰基 Co A合成酶有较强的激活作用 ,Cu2 + 对酰基激酶有抑制作用 ,但对酰基 Co A合成酶有很强的激活作用。在发酵中期向摇瓶中补加二价阳离子比在发酵初期加入有更明显的激活作用 ,平均效价最高提高了 31 %

酰基甘油激酶通过影响PTEN/PI3K/Akt/Gsk3β信号通路调控血小板活化

目的:探究酰基甘油激酶(AGK)在血小板活化中的作用及可能的调控机制。方法:分别提取野生型小鼠(WT)和AgkG126E点突变(AGK激酶活性丧失)小鼠(PM)的血小板。将等体积、等浓度的WT或PM小鼠的血小板放入聚集仪,分别利用3种刺激剂(α-Thrombin、ADP、U46619)刺激,检测每种刺激剂作用下相应的血小板聚集水平;每管聚集曲线达到最大稳定值后,加入等体积的ATP荧光检测剂,检测相应血小板活化过程中释放的ATP水平。分别在静息态WT或PM小鼠血小板(不加α-Thrombin刺激)、活化态WT或PM小鼠血小板(加入α-Thrombin刺激)中加入等量荧光偶联的纤维蛋白原(Fg),利用流式细胞仪检测血小板的Fg结合水平。Western blot法分别检测静息态(不加刺激剂)和活化态(加入α-Thrombin、ADP、U46619刺激)WT或PM小鼠血小板中关键信号通路蛋白的磷酸化水平。结果:在刺激剂作用于血小板后,PM小鼠血小板的聚集程度、ATP释放水平及Fg结合能力均明显低于WT小鼠的血小板(P均<0.01)。与WT小鼠相比,PM小鼠的血小板在活化过程中张力蛋白同源性磷酸酶(PTEN)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)、蛋白激酶B(Akt-Thr308)和糖原合成激酶3β(Gsk3β-Ser9)的磷酸化水平均明显降低(P均<0.01)。结论:酰基甘油激酶可能通过影响PTEN/PI3K/Akt/Gsk3β信号通路,参与调控血小板的活化。

中医药通过磷脂酰基醇3-激酶/蛋白激酶信号通路防治血管性痴呆的研究进展

血管性痴呆是指由脑血管病变引起的脑损害所致的痴呆,是全球范围内继阿尔茨海默病之后第二类常见的痴呆类型。脑血管病变和认知功能障碍是其主要临床表现,由于其发病机制仍未完全明确,关于血管性痴呆的分子机制仍然是研究热点。最新研究表明,磷脂酰基醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶(Akt)信号通路与血管性痴呆的发病密切相关,部分中药复方及中药单体可通过激活PI3K/Akt信号通路而发挥保护神经作用。因此,本文就中医药通过激活PI3K/Akt信号通路防治血管性痴呆的研究进展进行综述,以期为今后中医药防治血管性痴呆提供参考和理论基础。

酰基甘油激酶敲低对结直肠肿瘤细胞HCT116增殖迁移的影响

目的探讨AGK敲低对人结肠肿瘤细胞HCT‑116增殖、迁移的影响。方法本实验通过构建AGK基因的shRNA沉默慢病毒质粒,利用第二代慢病毒包装系统制备、浓缩慢病毒液,并感染人结肠肿瘤细胞HCT‑116细胞株。经过嘌呤霉素抗性筛选获得敲低AGK基因的HCT‑116细胞系。利用qRT‑PCR和Western blotting检测AGK敲低后在mRNA水平和蛋白水平表达情况;利用CCK‑8试剂盒检测AGK敲低稳定细胞株细胞增殖情况;利用划痕实验检测AGK敲低后对细胞迁移的影响。结果本实验构建的AGK基因的shRNA沉默慢病毒质粒可以有效敲低HCT116中内源性AGK。同野生型细胞株相比,AGK敲低稳转株HCT116‑ASR‑876和HCT116‑ASR‑878细胞中AGK的mRNA水平和蛋白水平表达显著地降低(P<0.001)。通过CCK‑8检测发现,AGK敲低后显著降低细胞增殖能力(P<0.05)。划痕实验表明,AGK敲低能显著抑制细胞迁移作用。结论shRNA慢病毒感染后,HCT‑116细胞中AGK基因的表达量显著低于野生型细胞株,并且初步验证了AGK可以促进HCT116细胞的增殖和迁移。

DGKZ rs7951870多态性与中国汉族人群精神分裂症的关联性

目的 分析二酰基甘油激酶Zeta(Diacylglycerol kinase Zeta,DGKZ)基因多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)与精神分裂症(SCZ)遗传易感性的相关性。方法 选取2018年2月至2019年5月于日照市第三人民医院住院治疗的211例SCZ患者(SCZ组),同期选择于本院239例健康体检者(对照组),采集外周静脉血,提取全基因组DNA,使用Taqman-MGB探针技术检测DGKZ基因rs7951870位点多态性,对比分析两组人群等位基因分布和基因频率的差异。结果 两组DGKZ rs7951870的等位基因分布和基因型频率没有显著性差异(DGKZ rs7951870:基因型χ^(2)=2.67,P=0.26;等位基因χ^(2)=1.07,P=0.30)。在加性模型(χ^(2)=0.84,P=0.36)、显性模型(χ^(2)=1.47,P=0.23)和隐性模型(χ^(2)=0.89,P=0.35)分析基础上rs7951870均不是SCZ的危险因素。结论 DGKZ rs7951870对中国汉族人群精神分裂症风险的影响非常小,后续仍然需要用更大样本数量的实验来验证这一发现。

子宫内膜异位症相关通路及中医药干预研究进展

子宫内膜异位症(EMs)是一种良性疾病,也是妇科疾病中的常见病、疑难病,但却有恶性生物学行为(如浸润、种植、复发、恶变等)。其发病原因多样,西医药物及手术干预的治疗效果不甚满意,因而寻求有效的治疗方法仍是目前妇科领域研究的重点。近年来研究发现,多条信号通路均与EMs的发生、发展密切相关,如转化生长因子β(TGF-β)/Smad、丝裂原活化蛋白激酶、Notch、Wnt蛋白1β-蛋白、磷脂酰基酶-3激酶/蛋白激酶B,并有学者从上述通路中探讨关于中医药治疗本病的疗效机制。现从这5条信号通路阐述EMs的发病机制与中医药干预的疗效结果,以期为中医药干预治疗EMs相关信号通路的相关节点提供思路参考。

磷脂酰肌醇-3激酶在犬体外循环缺血再灌注心肌胰岛素抵抗发生机制中的作用

目的 检测在犬体外循环（CPB）缺血再灌注心肌胰岛素抵抗过程中磷脂酰基醇3-激酶（PI3K）的表达,观察心肌细胞是否通过PI3K来诱导葡萄糖转运蛋白-4（Glut-4）的转运,探讨体外循环心肌胰岛素抵抗的受体后发生机制.方法 健康杂种犬24条,随机均分为4组（n=6）,组Ⅰ主动脉阻断30 min;组Ⅱ主动脉阻断120 min;组Ⅲ主动脉阻断30 min＋胰岛素（PI3K激活剂）;组Ⅳ主动脉阻断30 min＋渥曼青霉素（PI3K抑制剂）.分别于CPB转流前、开放主动脉后15、45、75 min时采集心肌组织标本.测定PI3K及Glut-4的变化.结果 心肌细胞Glut-4外膜百分比：于再灌注15 min,4组外膜百分比值分别由转流前（18.68±6.76）％、（19.76±3.41）％、（17.43±5.36）％、（18.43±4.98）％下降至（3.88±1.43）％、（1.89±1.27）％、（4.2l±1.59）％、（0.65±1.32）％,组Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ于再灌注45 min有不同程度缓慢上升,组Ⅳ持续下降,至再灌注75 min达最低;但与转流前比较,4组差异有统计学意义（P＜0.01）;与组Ⅰ比较,再灌注后组Ⅱ、组Ⅳ外膜百分比值下降明显,持续时间长（P＜0.05）,组Ⅲ外膜百分比值上升（P＜0.05）.PI3K表达变化：缺血再灌注后心肌细胞PI3K表达不同程度下降;于再灌注75 min,4组分别由转流前21.23 ±2.58、22.73土2.45、20.19±37.30、21.76±2.74下降至18.53±1.86、15.44±9.27、24.00±1.90、1.06±0.43;与组Ⅰ比较,组ⅣPI3K表达下降明显（P＜0.01）,而组ⅢPI3K表达增强（P＜0.05）.结论 CPB缺血再灌注后,PI3K作为主要的信号传导因子,刺激心肌细胞Glut-4从胞质内转运至包膜上,完成对葡萄糖的摄取,即缺血再灌注心肌胰岛素抵抗过程中心肌细胞Glut-4的转运主要通过PI3K途径实现.

二酰基甘油激酶ζ在肿瘤发生发展中的研究进展

二酰基甘油激酶(DGK)在调节多种生物过程中扮演着重要角色,通过多种机制调节细胞内的二酰基甘油水平,影响细胞信号转导、细胞生长、膜运输、分化和迁移等多种细胞功能。DGKζ属于DGK家族的一员,通过将二酰基甘油(DAG)磷酸化转化为磷脂酸(PA),在脂质代谢、调节免疫和肿瘤发生发展中起关键调节作用。本文主要就DGKζ的结构及生理功能、在肿瘤发展中的作用,以及相关靶点药物和联合治疗的研究进展作一综述。

磷脂酰肌醇3激酶δ过度活化综合征1型与2型临床特征差异的研究进展

磷脂酰肌醇3激酶δ过度活化综合征(activated phosphoinositide 3-kinase-delta syndrome,APDS)是一种罕见的常染色体显性遗传的原发性免疫缺陷病。根据基因突变类型的不同分为APDS1型和APDS2型。APDS1患者较易发生支气管扩张、鼻窦炎、肝脾肿大、哮喘、自身免疫性或自身炎症性疾病,更频繁感染肺炎链球菌、流感嗜血杆菌。APDS2患者较易发生肺炎、眼部感染、淋巴结病、恶性肿瘤和神经/生长迟缓。免疫学特征中APDS1的T细胞计数显著降低,APDS2更易出现IgM水平升高。雷帕霉素治疗对APDS的两种类型都有益处,而Leniolisib在APDS1患者中的耐受性更好。该文通过对APDS1型和APDS2型临床表现、免疫学特征与治疗方面进行综述,以提高临床医生对APDS的认识。

PDGF、FN诱导FHL1细胞增殖的PI3K信号转导通路研究

目的探讨血小板源性生长因子(PDGF)和纤维连接蛋白(FN)诱导人胚胎肺成纤维细胞(HFL1)增殖的磷酸酰基醇-3-激酶(PI3K)信号转导通路。方法采用不同浓度的PDGF和FN分别刺激HFL1并观察PI3K抑制剂wortmannin(WMN)对PDGF、FN诱导HFL1增殖作用的影响。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖情况。结果PDGF和FN对HFL1的诱导增殖作用明显,并呈剂量依赖性升高趋势,二者均在50ng/mL时作用显著;PI3K抑制剂wortmannin可抑制PDGF和FN诱导的HFL1细胞增殖。结论PDGF和FN诱导HFL1的细胞增殖可以通过PI3K信号转导途径实现。