酰基激酶和酰基CoA合成酶对螺旋霉素合成的影响

螺旋霉素链霉菌生物合成螺旋霉素的过程受许多酶的调控作用。酰基激酶和酰基 Co A合成酶是螺旋霉素内酯环合成的重要酶。实验测定了它们的酶活趋势和酶的影响因子。结果表明 ,酰基激酶和酰基 Co A合成酶都有两个活力峰 ,前者活性集中在发酵中前期 ,后者活性集中在发酵中后期。实验发现 Co2 + 、Mn2 + 对酰基激酶和酰基 Co A合成酶有较强的激活作用 ,Cu2 + 对酰基激酶有抑制作用 ,但对酰基 Co A合成酶有很强的激活作用。在发酵中期向摇瓶中补加二价阳离子比在发酵初期加入有更明显的激活作用 ,平均效价最高提高了 31 %

油茶长链脂肪酰基CoA合成酶基因1(CoLACS1)分子特征与表达分析

长链脂肪酰基Co A合成酶(LACS)在脂肪酸的合成与分解代谢中起着重要作用。本研究以油茶(Camellia oleifera Abel)国家审定品种华硕(Camellia oleifera Huashuo)种仁转录组数据为基础,根据LACS基因Unigene序列设计引物,分离克隆了油茶LACS1基因全长c DNA序列,命名为CoLACS1(Gene Bank登录号:KJ960228),全长2114 bp,开放阅读框2088 bp,编码695个氨基酸;生物信息学分析显示CoLACS1具有3个B1ock,从分子特征可判断CoLACS1属于LACS家族;氨基酸同源比对显示与其他物种的LACS氨基酸序列具有较高的相似性,其中与拟南芥LACS7相似性为78%,与麻风树、大豆、毛果杨等物种LACS6(peroxisomal)相似性可达80%以上;对CoLACS1进行原核表达分析,构建的p ET30a-CoLACS1载体成功转化至BL21(DE3)中经1 mmol/L IPTG诱导表达,菌液检测获得预测的目的蛋白(分子量约为76 k D);分析转录组数据中CoLACS1的Unigene序列RTKM值并对CoLACS1进行实时荧光定量PCR分析,结果表明CoLACS1在油茶华硕种子发育各时期平稳表达,表达丰度变化不大,荧光定量结果变化规律与转录组数据分析一致;同时分析华硕种仁不同时期含油率和脂肪酸成分变化,双变量统计分析发现CoLACS1表达模式与油茶油脂积累规律呈显著相关性。本研究为进一步研究油茶油脂积累与代谢的基因调控提供理论依据。

樟树长链脂肪酰基CoA合成酶基因9克隆与表达分析

该研究以樟树转录组数据为基础,筛选克隆了拟南芥AtLACS9同源候选基因CcLACS9,二者序列相似性为75%。相关软件预测CcLACS9享有植物LACS亚家族成员3个特征motifs,且N端含有定位质体信手肽。在Δlacs缺陷型酵母互补测试中,以油酸作为唯一外源脂肪酸、转化了CcLACS9的突变型酵母恢复正常生长,证明CcLACS9具有典型的脂肪酰基CoA合成酶的功能。为探究CcLACS9是否参与了樟树籽油生物合成,进一步研究了其组织表达模式和在种子发育过程中其表达量与籽油累积量之间的关系。实时荧光定量PCR分析显示CcLACS9基因在种仁与花中优势表达,种仁中相对表达量是根中的17.74倍。随机测定了30棵成年樟树成熟期种子千粒重、籽油含量和中链脂肪酸比例等指标。根据仁油含量将测试群体划为高、中、低三个不同品级,并在各品级中挑选3棵单株、逐月关联分析其仁油含量与CcLACS9相对表达量。结果表明:在种仁发育前期,仁油含量和CcLACS9表达量都持续上升且二者呈正相关性,8月份为CcLACS9表达量峰值期; 9月下旬后,仁油含量趋向稳定但CcLACS9表达量仍处于较高水平但呈现下降趋势,二者无明显相关性。LACS亚家族在植物进化中较为保守,同源基因在不同植物中具有相同或相似的功能。该研究结果暗示CcLACS9可能拥有AtLACS9相似的生物学功能,即在樟树种仁油酯合成和累积过程中起重要作用。

顶复门原虫酰基CoA结合蛋白中的生物信息学分析及功能预测

酰基CoA结合蛋白(Acyl coenzyme A-binding protein,ACBP)作为胞内酰基CoA的转运蛋白,可以高特异性、高亲和力地结合、储存并转运脂酰CoA,参与真核生物脂类合成代谢。本文从NCBI数据库中搜索到多种尚未见报道的顶复门原虫ACBP,应用生物信息学方法对其理化性质、蛋白同源性、系统进化情况、蛋白结构与功能进行分析与预测,为ACBP在虫体脂肪酸代谢的功能研究提供理论依据。

泡沫细胞形成过程中酰基CoA:胆固醇酰基转移酶1活性改变及其机制研究

目的 研究人单核细胞系在分化为巨噬细胞及转化为泡沫细胞过程中酰基CoA :胆固醇酰基转移酶 1(ACAT1)活性的改变及其机制。方法 体外培养人THP 1单核细胞系 ,由佛波酯作用使其分化为巨噬细胞 ,后者再由氧化低密度脂蛋白 (Ox LDL)进一步作用转变为泡沫细胞。此过程中以放射性同位素标记底物法检测ACAT1活性的变化 ,并用Westernblot法检测ACAT1蛋白的表达及RT PCR法检测ACAT1mRNA的水平。结果 在单核细胞分化为巨噬细胞的过程中ACAT1活性升高了 2倍 ,差异具有显著性 (P <0 0 5 ) ,酶蛋白及mRNA水平呈现类似变化趋势 ,在进一步转化为泡沫细胞过程中 ,ACAT1活性、酶蛋白及mRNA仍处于较高水平 ,但与巨噬细胞相比差异无显著性。结论 单核细胞分化为巨噬细胞的过程中ACAT1转录水平的上调导致酶蛋白量合成增加 ,从而使ACAT1活性也大为增强 ,而Ox LDL对ACAT1活性影响则不明显。

酰基CoA连接酶DptE及其突变体DptE-296的克隆、初步分离纯化与鉴定

通过PCR方法扩增达托霉素生物合成相关的酰基CoA连接酶DptE及其突变体dptE-296的基因片段,经限制性内切酶bamH Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切后插入到原核表达载体pet22b,利用质粒自带的氨苄青霉素抗性筛选阳性克隆,并进行菌液PCR和测序鉴定;将测序正确的重组质粒通过热击法转入BL21(DE3)表达菌株,IPTG诱导蛋白表达,渗透压休克法提取周质蛋白,镍柱亲和纯化,通过SDS-PAGE,Western blot鉴定蛋白表达;连接生物素,通过Fortebio检测蛋白和底物癸酸的结合。测序结果显示成功构建重组载体DptE-pet22b和DptE-296-pet22b,SDS-PAGE和Western blot结果显示表达产生的蛋白大小与预期一致,Fortebio实验显示DptE及其突变体DptE-296对底物癸酸有结合,但结合的不强。

油茶乙酰CoA酰基转移酶基因cDNA克隆及序列特征分析

在已知油茶乙酰COA酰基转移酶基因EST序列基础上,设计6条特异引物,以油茶优良无性系‘湘林1号’种仁总RNA为模板,通过反应体系和反应条件优化,最终扩增出一条700 bp左右的目的片段,将该片段回收、克隆、测序,获得718 bp的cDNA序列,将该序列与油茶乙酰COA酰基转移酶基因进行序列拼接,确定了油茶乙酰COA酰基转移酶基因的全长cDNA序列,将该序列提交至GeneBank,登录号为GU594059。油茶乙酰COA酰基转移酶基因全长cDNA序列为1 495 bp,含有一个1 227 bp的ORF,编码408个氨基酸残基。在氨基酸序列水平上,该基因与胡黄连(P.kurrooa)的乙酰COA酰基转移酶基因的相似性最高,为86%,与稻瘟病菌(M.grisea)的最低,为65%。通过在线预测,油茶乙酰COA酰基转移酶基因编码蛋白的等电点pI为6.19,分子量Mw为41 628.6 Da。本研究为揭示油茶油脂合成规律和油茶的分子育种提供了理论依据和科学基础。

油桐丙二酰单酰CoA:ACP转酰基酶的克隆与序列分析

为了深入了解油桐丙二酰单酰辅酶A酰基载体蛋白转酰基酶(Malonyl Co A:ACP transacylase,MCAT)在油脂合成代谢过程中的作用,利用RT-PCR技术克隆获得了油桐MCAT基因序列,且命名为Vf MCAT,并利用相关生物软件对该基因序列及其相应蛋白质进行了生物信息学分析。结果表明:Vf MCAT的CDS长为1 179 bp,编码392个氨基酸;该蛋白与蓖麻和亚麻的MCAT同源性均达85%,存在"GXSXG"和"GQGXQ"两个高度保守的motif,在系统进化关系上,其与蓖麻和亚麻的亲缘关系最为接近;分析其氨基酸序列后发现,Vf MCAT的分子量约为41.67 KDa,理论等电点p I为8.43,是一个含有一个跨膜结构域的可溶性稳定蛋白;对其二级和三级结构的预测结果表明,该蛋白主要以α-螺旋和无规则卷曲为主,且最有可能在线粒体中发挥其主要作用,文中由此推测,Vf MCAT在叶绿体中参与了油桐脂肪酸合成代谢。

花生丙二酰单酰CoA转酰基酶(MCMT)基因家族应对不同胁迫的响应模式

丙二酰单酰CoA:ACP转酰基酶(malonyl-CoA:ACP malonyltransacylase,MCMT)催化由丙二酰单酰CoA形成丙二酰单酰ACP。它既是生物脂肪酸合成的基本构成要素,又是细胞膜、储藏油脂和脂信号分子的重要成分。本文就花生MCMT基因家族成员的各项特征做了系统分析。结果表明,栽培花生基因组中共有5个AhMCMTs基因,分别位于5条不同的染色体上。这5个AhMCMTs均含有较多的内含子,数目为9~12个。蛋白长度从277到472个氨基酸不等,且均无跨膜结构,都定位于叶绿体中。有3个AhMCMTs具有可变剪接现象,其中arahy.FJ253B和arahy.R7F6LC各有6个剪接体,arahy.T9C115有2个剪接体。可变剪接类型以内含子滞留、外显子跳跃和发生在5’-UTR的可变剪接为主。通过进化树分析发现,栽培花生与油菜、山茶和羽扇豆基因组中含有较多的MCMT基因,可能是发生了基因家族扩张现象。根据花生转录组数据发现它们的组织特异性表达模式显著不同,arahy.FJ253B表达量最高,几乎在所有组织器官中均有表达,推测是花生生长发育的主要作用基因。它们应对不同胁迫处理的反应模式也各不相同,并且同一个基因在相同胁迫处理下,在根中和叶中的反应模式也不同,显示出这5个AhMCMT基因应对不同胁迫处理时的不同分工。

苯丙氨酸CoA酰基转移酶原核表达系统的构建和表达

目的 :获得大量的重组红豆杉苯丙基转移酶 (BAPT) ,为紫杉醇半合成代谢提供廉价的催化剂。方法 :根据DNA重组技术 ,构建原核表达载体pET -BAPT ,使目的基因位于原核T7启动子下游 ,IPTG诱导基因表达。结果 :BAPT高效表达 ,重组蛋白主要以包涵体的形式存在。结论 :为获得可溶性重组蛋白BAPT奠定了理论基础。

丹参酮ⅡA磺酸钠联合他汀类药物治疗冠心病对患者炎症因子及凝血功能的影响

【目的】探讨丹参酮ⅡA磺酸钠联合他汀类药物治疗冠心病对患者炎症因子及凝血功能的影响。【方法】选取2019年9月至2022年9月本院收治的100例冠心病患者,按随机数字表法将其分为观察组(丹参酮ⅡA磺酸钠与他汀类药物联合治疗,n=50)与对照组(他汀类药物治疗,n=50)。比较两组的治疗效果、不良反应发生率,比较两组治疗前后的超敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、D-二聚体(D-D)、纤维蛋白原(Fbg)、纤维蛋白(原)降解产物(FDP)、全血黏度、血浆黏度。【结果】观察组总有效率显著高于对照组(P<0.05)。治疗后,两组hs-CRP、TNF-α、IL-6低于治疗前,且观察组低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);两组治疗后D-D、Fbg、FDP显著低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05);两组全血黏度、血浆黏度显著低于治疗前,且观察组低于对照组(P<0.05)。两组不良反应总发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。【结论】丹参酮ⅡA磺酸钠联合他汀类药物治疗冠心病临床效果较好,可改善患者的炎症因子水平及凝血功能。

代谢工程改造酿酒酵母高效合成游离脂肪酸

该文以酿酒酵母BY4741作为底盘细胞,通过系统代谢工程改造提高游离脂肪酸(free fatty acid,FFAs)的合成。首先,通过删除酰基CoA合成酶FAA1、FAA4以及FAT1的编码基因,提高FFAs的合成,酵母工程菌株FFAs达到384.4 mg/L。进一步,通过敲除POX 1、FAA 2和PXA 2基因,破坏了酵母细胞的β-氧化途径,使细胞外FFAs进一步提高,达到了394.9 mg/L。随后,通过敲除磷脂酸磷酸酶编码基因DPP 1,LPP 1,PAH 1,降低了磷脂酸(phosphatidic acid,PA)的去磷酸化水平,上调了获得的多基因缺失的酵母工程菌(Δfaa 1Δfaa4Δfat1Δpox1Δfaa2Δpxa2Δdpp1Δlpp1Δpah1)能够产生497.3 mg/L的细胞外游离脂肪酸,以及1332.2 mg/L的总脂肪酸。通过组合代谢工程产生的平台菌株,为未来发展脂质相关的细胞工厂提供了基础。

预防对比剂相关性急性肾损伤的研究进展

对比剂相关性急性肾损伤(CA-AKI)是在诊断或介入手术中使用对比剂所引起的一种严重并发症,目前已成为住院患者新发急性肾功能不全的主要原因之一。选择相对低毒的对比剂,减少对比剂暴露的时间和剂量对CA-AKI有一定的预防作用,他汀等药物以及术前术后的水化能够降低CA-AKI的风险,目前纳米药物已被证明在动物模型中获益。该文就当前CA-AKI的防治进行综述,为进一步深入研究新的干预措施奠定基础,并为临床治疗提供理论依据。

过氧化物酶体酰基辅酶A氧化酶缺乏症一例并文献复习

目的首次报道1例国内ACOX1基因突变致过氧化物酶体酰基辅酶A氧化酶缺乏症患儿,结合文献综述其临床特征。方法与结果男性患儿,出生时肌张力偏低、生长发育迟缓并出现抽搐发作1次,3岁时出现神经功能退化并快速进展至无法独坐、独自站立和行走,语言表达能力倒退;体格检查可见特殊面容、锥体束征及小脑损害。头部MRI显示双侧脑干和小脑对称性脱髓鞘改变;血清极长链脂肪酸(VLCFAs)水平升高。全外显子组测序,患儿存在ACOX1基因c.1589A> G(p.His530Arg)纯合突变,其父母均携带ACOX1基因c.1589A> G(p.His530Arg)杂合突变,但无临床症状,符合家系共分离现象;根据美国医学遗传学和基因组学会(ACMG)指南,该变异为可能致病突变。患儿最终诊断为过氧化物酶体酰基辅酶A氧化酶缺乏症。结论对于新生儿期发病的肌张力低下、癫发作和生长发育迟缓,若头部MRI显示小脑、脑干等对称性异常信号,应高度警惕过氧化物酶体病,阳性家族史、VLCFAs水平升高和基因检测可明确诊断。

滇龙胆乙酰CoA转移酶基因的克隆与表达分析

根据滇龙胆转录组乙酰CoA酰基转移酶基因GrAACT序列设计引物,使用逆转录PCR(RT-PCR)技术从滇龙胆幼叶扩增该基因,并进行序列分析、原核表达和组织特异性分析。结果表明:GrAACT基因(登录号KJ917163)开放阅读框长1 215 bp,编码404个氨基酸;GrAACT蛋白相对分子质量41.41 ku,p I值为6.25,属于AACT蛋白家族成员,无信号肽,为疏水稳定蛋白,主要由α-螺旋、无规则卷曲构成;GrAACT蛋白具有AACT蛋白保守结构域:硫解酶N端结构域(第12~272位氨基酸)、硫解酶C端结构域(第282~402位氨基酸)、类硫解酶结构域(第13~403位氨基酸);在硫解酶C端结构域中,包含硫解酶保守位点(第350~366位氨基酸)、硫解酶活性位点(第385~398位氨基酸);滇龙胆GrAACT蛋白与长春花CrAACT蛋白亲缘关系最近;GrAACT基因在大肠杆菌中表达的重组蛋白相对分子质量约为67.41 ku;组织特异性表达分析结果表明,GrAACT基因主要在茎、根中表达。

他汀类药物在卵巢癌中的研究进展

他汀类药物是3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A还原酶(3-hydroxy-3-methylglutaryl-coenzyme A reductase,HMGCR)抑制剂,可通过减少胆固醇生物合成和诱导低密度脂蛋白受体表达而降低血浆胆固醇水平,广泛应用于高脂血症的治疗和心脑血管疾病的预防;此外,他汀类药物可能通过阻断细胞周期进展、诱导细胞凋亡、抑制血管生成、抑制肿瘤生长和转移而具有潜在的抗癌作用。卵巢癌预后较差,给患者造成了严重的经济和心理负担。他汀类药物通过抑制甲羟戊酸(mevalonic acid,MVA)途径、促进铁死亡、调节细胞自噬和调节肿瘤微环境(tumor microenvironment,TME)等多种途径发挥抗肿瘤作用和改善卵巢癌化疗耐药现象,同时在某种程度上可抑制卵巢癌细胞增殖,降低卵巢癌患病风险,改善预后,协同并增强化疗药物抗肿瘤作用,降低复发率。综述他汀类药物在卵巢癌的预防和治疗中的研究新进展,以期对未来临床实践提供帮助。

茅苍术乙酰辅酶A酰基转移酶基因(AlAACT)的克隆与序列分析

目的:对茅苍术乙酰辅酶A酰基转移酶基因(AlAACT)全长进行克隆,并分析其序列特征,为后期解析茅苍术萜类次生代谢产物的生物合成机制提供实验依据。方法:根据转录组测序所得的AACT基因片段设计引物,利用逆转录PCR技术获得全长cDNA序列,并采用生物信息学手段分析其序列特征。结果:克隆获得AlAACT基因的全长cDNA序列为1227 bp,编码408个氨基酸,理论相对分子质量为41.98 kDa,等电点为5.82,不存在跨膜区以及信号肽,为亲水性蛋白,具有多个磷酸化位点。进化树分析发现AlAACT基因与其他植物AACT基因具有较高相似性,尤其是菊科蓟属植物洋蓟,表明该基因保守性高。结论:成功获得茅苍术AlAACT基因序列,并掌握其序列特征,为后续深入研究该序列在茅苍术萜类化合物合成途径中的功能提供了必要的实验基础和理论依据。