HPLC法测定白芍总苷胶囊中芍药内酯苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷

目的建立HPLC对白芍总苷胶囊中芍药内酯苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷同时定量的分析方法。方法采用HPLC法。色谱柱Zorbax SB-C18色谱柱(250mm×4.6mm,5μm);流动相A为乙腈,B为0.015%磷酸溶液,梯度洗脱程序为0min(8%A),5min(12%A),20min(20%A),25min(20%A);35min(45%A),40min(45%A);检测波长230nm;柱温30℃。结果芍药内酯苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷质量浓度与峰面积均呈良好的线性关系。平均回收率芍药内酯苷为96.99%,RSD为0.56%;芍药苷为103.6%,RSD为0.77%;苯甲酰芍药苷为104.2%,RSD为1.35%(n=5)。结论该方法分离度好,简便易行,具有良好的重现性,可用于白芍总苷胶囊中芍药内酯苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷的同时测定。

RP-HPLC法测定杭白芍及其饮片中芍药内酯苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷

目的采用HPLC法测定杭白芍药材与饮片中芍药内酯苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷3种成分的量。方法色谱柱为ZorbaxSB-C18柱;流动相为0.05%磷酸水溶液-0.05%磷酸乙腈溶液;梯度洗脱;体积流量1mL/min;柱温30℃;检测波长230nm。结果芍药内酯苷在0.131～1.31μg,芍药苷在0.425～4.25μg,苯甲酰芍药苷在0.086～0.576μg与峰面积呈良好的线性关系。加样回收率分别为芍药内酯苷96.6%(RSD为1.2%),芍药苷98.7%(RSD为2.3%),苯甲酰芍药苷97.4%(RSD为1.7%)。结论所建立的方法适合杭白芍中有效成分的测定,并且杭白芍药材中芍药内酯苷、芍药苷和苯甲酰芍药苷的量高于饮片。

苯甲酰芍药苷通过Nrf2/HO-1通路对心肌梗死大鼠心功能的影响作用机制研究

目的探究苯甲酰芍药苷(benzoylpaeoniflorin,BA)通过核因子E2相关因子2/血红素加氧酶1(Nrf2/HO-1)通路对急性心肌梗死(AMI)大鼠心功能的影响作用机制。方法36只SD大鼠随机分为3组(n=12):Sham组、AMI组和AMI+BA组。AMI组和AMI+BA组大鼠建立AMI模型,建模后AMI+BA组大鼠使用BA灌胃,剂量为170 mg/kg。检测各组大鼠心电图和心肌酶肌酸激酶MB(CK-MB)和乳酸脱氢酶(LDH)。超声心动图检测心功能。HE染色和TUNEL染色检测组织损伤和心肌细胞凋亡。Western blot检测Nrf2/HO-1通路中蛋白水平。结果AMI组大鼠左室射血分数(LVEF)及左室内压力最大变化率(±dp/dtmax)显著低于Sham组(P<0.05),AMI+BA组LVEF和±dp/dtmax显著高于AMI组(P<0.05)。Sham组CK-MB和LDH显著高于对照组(P<0.05),AMI+BA组CK-MB和LDH显著低于AMI组(P<0.05)。AMI组的凋亡率(13.08±1.23)%显著高于Sham组(1.14±0.10)%,P<0.05,AMI+BA组心肌细胞凋亡率(6.43±0.78)%,显著低于AMI组(P<0.05)。与Sham组比较,AMI组Nrf2/HO-1水平显著降低(P<0.05),AMI+BA组Nrf2/HO-1水平显著高于AMI组(P<0.05)。结论BA通过促进Nrf2/HO-1通路抑制AMI模型大鼠的心肌细胞凋亡,并发挥保护心功能的作用。

苯甲酰芍药苷在大鼠体内的药动学研究

目的:以健康大鼠为药动学研究模型探究苯甲酰芍药苷静注或灌胃给药的代谢差异。方法:大鼠灌胃或静脉注射苯甲酰芍药苷后,采用高效液相色谱分析方法分别测定血浆中苯甲酰芍药苷的浓度并计算出药动学参数,研究并比较苯甲酰芍药苷两种给药途径下的药动学。结果:苯甲酰芍药苷峰面积和浓度之间线性关系良好(r2>0.99),提取回收率在92.3%～103.4%之间,精密度、准确度和基质效应均符合相关指导原则。苯甲酰芍药苷口服的生物利用度只有1.67%。结论:苯甲酰芍药苷口服吸收不佳,宜开发为静脉注射给药的新药。

没食子酰芍药苷通过激活Nrf2信号通路减轻PM2.5诱导的血管内皮细胞损伤

目的探讨没食子酰芍药苷(GPF)减轻PM2.5对人微血管内皮细胞损伤的作用及机制。方法培养人微血管内皮细胞,分为空白对照组、PM2.5(25μg/cm^2处理24 h)、GPF组(100μmol/L处理24 h)和PM2.5+GPF组(PM2.525μg/cm^2和GPF100μmol/L共同处理24 h)。4-甲基偶氮唑蓝(MTT)检测人血管内皮细胞(HMEC)-1活性,比色法检测HMEC-1细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性;Western印迹检测核因子E2相关因子(Nrf)2的蛋白表达。结果与空白对照组相比,PM2.5组HMEC活力明显下降,细胞内MDA含量增加(P<0.05),SOD活性下降(P<0.05)。GPF组HMEC活力明显高于PM2.5组,MDA含量显著低于PM2.5组,GPF可通过激活Nrf2减轻PM2.5引起的血管内皮细胞损伤。结论GPF通过激活Nrf2信号通路,抑制PM2.5诱导的氧化应激从而减轻血管内皮细胞损伤。

苯甲酰芍药苷灌胃给药的代谢产物芍药苷的药动学研究

目的研究苯甲酰芍药苷灌胃给药后的代谢产物芍药苷的药动学特征。方法苯甲酰芍药苷分别在人工胃肠液及大鼠全血中孵育,采用UPLC-Q-TOF-MS/MS法检测苯甲酰芍药苷的代谢产物;采用UPLC法检测正常大鼠灌胃150 mg·kg^-1的苯甲酰芍药苷后不同时间点血浆样品内的芍药苷及苯甲酰芍药苷水平,使用DAS 2.0软件计算药动学参数。结果在人工胃肠液孵育样品中只检测到苯甲酰芍药苷原型,在全血孵育6个时间点的样品中均检测到苯甲酰芍药苷原型及其代谢产物芍药苷;给大鼠灌胃苯甲酰芍药苷后,得到的代谢产物芍药苷的达峰浓度(Cmax)为(13.08±1.24)μg·mL^-1,达峰时间(Tmax)为5 min。结论全血孵育实验可检测到苯甲酰芍药苷的代谢产物芍药苷;苯甲酰芍药苷灌胃给药后,得到代谢产物芍药苷的药-时曲线及药动学参数,揭示了苯甲酰芍药苷灌胃给药后的体内药动学特点,为苯甲酰芍药苷的研究提供了基础。

苯甲酰芍药苷对脂多糖诱导小鼠急性肺损伤保护作用及分子机制研究

目的探讨苯甲酰芍药苷对脂多糖(LPS)诱导小鼠急性肺损伤(ALI)的保护作用及可能分子机制。方法将75只SPF级C57BL/6J小鼠按照随机数字表法分成五组,每组15只:空白对照组(生理盐水200μL)、ALI组(2mg/kg LPS 100μL+生理盐水100μL)、阳性对照组(2mg/kg LPS100μL+血必净注射液100μL)、苯甲酰芍药苷低剂量组(2mg/kg LPS 100μL+2.5mg/kg苯甲酰芍药苷100μL)、苯甲酰芍药苷高剂量组(2mg/kg LPS 100μL+5.0mg/kg苯甲酰芍药苷100μL),通过腹腔注射LPS构建ALI模型并给予药物干预。称重检测各组肺组织湿/干重比;苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理形态变化;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测ALI小鼠肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平;蛋白免疫印迹(WB)法检测肺组织IκB激酶(IKKβ)/核因子κB(NF-κB)表达及其磷酸化激活水平;荧光定量PRC(RT-PCR)检测ALI小鼠肺组织mi R-520c-3p表达;Targetscan 7.0预测mi R-520c-3p靶基因;A549转染mi R-520c-3p inhibitor验证苯甲酰芍药苷对炎症的调控作用。结果与ALI组比较,低、高剂量苯甲酰芍药苷均明显降低ALI小鼠肺组织湿/干重比[(5.64±0.14)、(4.75±0.11)比(6.21±0.64),P均<0.05];ALI损伤的肺组织结构得到缓解;ELISA结果显示,与ALI组比较,低、高剂量苯甲酰芍药苷能明显降低ALI小鼠肺组织TNF-α、IL-6水平[TNF-α:(20.68±1.06)pg/m L、(7.34±0.37)pg/m L比(32.27±1.89)pg/m L,P均<0.05;IL-6:(29.16±2.36)pg/m L、(14.26±1.06)pg/m L比(48.26±3.19)pg/m L,P均<0.05];WB结果显示,与ALI组比较,苯甲酰芍药苷低、高剂量组IKKβ、NF-κB p65磷酸化水平以及总NF-κB p65水平下降;RTPCR结果显示,与ALI组比较,低、高剂量苯甲酰芍药苷有效促进mi R-520c-3p在ALI中的表达[(0.51±0.13)、(0.74±0.09)比(0.34±0.11),P均<0.05];Targetscan预测结果显示,mi R-506-3p直接靶向NF-k B p65亚基RELA基因3'UTR序列;补救实验显示,与苯甲酰芍药苷组比较,苯甲酰芍药苷+mi R-520c-3p inhibitor组TNF-α、IL-6 m RNA水平明显升高[TNF-α:(3.94±0.49)比(1.55±0.36),P<0.05;IL-6:(6.95±1.21)比(2.11±0.42),P<0.05]。结论苯甲酰芍药苷能有效缓解LPS引起的小鼠ALI病理进程中炎症的发生,其作用机制可能是通过上调mi R-520c-3p表达,从而抑制其靶基因NF-κB p65生成,抑制IKKβ/NF-κB信号通路的活化,导致炎症因子TNF-α、IL-6的合成受到抑制。

苯甲酰芍药苷增强ABCA1表达促进胆固醇流出

目的探讨白芍醇提物苯甲酰芍药苷(BP)对THP-1细胞胆固醇流出的影响。方法实验分ac-LDL组、apoA-1组和apoA-1+BP组。THP-1细胞加入160 nmol/L佛波酯(PMA)24 h,再加入50μg/mL乙酰化低密度脂蛋白(ac-LDL)建立泡沫细胞模型。液体闪烁计数法测定泡沫细胞胆固醇流出率;酶化学反应检测细胞总胆固醇浓度;定量PCR(qPCR)检测三磷酸腺苷结合盒转运体A1(ABCA1)表达;Western blot分析ABCA1、固醇调节元件结合蛋白(SREBPs)、肝X受体α(LXRα)蛋白表达变化。结果成功建立THP-1泡沫细胞模型。apoA-1+BP组泡沫细胞胆固醇流出率高于apoA-1组,差异有高度统计学意义(P <0.01)。apoA-1+BP组泡沫细胞内总胆固醇含量低于apoA-1组,差异有高度统计学意义(P <0.01)。apoA-1+BP组泡沫细胞ABCA1 mRNA和蛋白表达量均高于apoA-1组,差异有统计学意义(P <0.05或P <0.01)。apoA-1+BP组泡沫细胞LXRα蛋白表达水平高于apoA-1组,差异有高度统计学意义(P <0.01)。apoA-1+BP组SREBP1、SREBP2蛋白表达量低于apoA-1组,差异有高度统计学意义(P <0.01)。结论 BP可通过LXRα-ABCA1通路促进胆固醇流出。

没食子酰芍药苷对白细胞介素8诱导的人脐静脉血管内皮细胞增殖和迁移的影响

目的研究没食子酰芍药苷(GPF)对白细胞介素8(IL-8)诱导的人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)增殖和迁移的影响及潜在分子机制。方法用100、200和400μmol/L GPF分别处理100μg/L IL-8诱导的HUVECs,实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(qRT-PCR)和蛋白质印迹法(Western blotting)分别检测HUVECs细胞中miR-212-3p、激活转录因子2(ATF2)、增殖细胞核抗原(PCNA)和基质金属蛋白酶-2(MMP-2)的表达,四氮唑蓝(MTT)和Transwell实验分别测定HUVECs细胞存活率和细胞迁移,双荧光素酶报告系统验证miR-212-3p与ATF2的调控关系。结果与对照0μmol/L组相比,100μmol/L、200μmol/L和400μmol/L的GPF可抑制IL-8诱导的HUVECs增殖和迁移,促进miR-212-3p表达,抑制ATF2表达,呈剂量依赖趋势;低表达miR-212-3p可逆转400μmol/L GPF对IL-8诱导的HUVECs细胞增殖和迁移的抑制作用;miR-212-3p靶向ATF2,调控ATF2的表达;低表达ATF2可部分逆转低表达miR-212-3p对GPF处理的IL-8诱导的HUVECs细胞增殖和迁移的作用。结论GPF通过miR-212-3p/ATF2途径抑制IL-8诱导的HUVECs细胞增殖和迁移。

四乙酰芍药苷聚合物胶束的制备及其对大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

以Pluronic P123为载体材料,采用固体分散-水化法制备包载四乙酰芍药苷(1)的聚合物胶束,以星点设计-效应面法优化处方。优化所得胶束包封率为97.4%、载药量为10.5%、平均粒径为20.5 nm;胶束中1溶解度是原药的585倍。采用线栓法建立大鼠局灶性脑缺血-再灌注(ischemia-reperfusion,I/R)损伤模型。聚合物胶束显著增加了1在I/R损伤大鼠脑内,特别是脑缺血侧的蓄积量,降低了40%的脑部梗死总面积,显著改善了脑损伤神经行为学评分。结果表明1聚合物胶束有效克服了芍药苷的生物药剂学缺陷和1注射液采用增溶剂的刺激性问题,取得预期对脑缺血再灌注损伤的神经保护作用。

没食子酰芍药苷在脑缺血再灌注后神经保护作用和机制

Wistar大鼠通过线栓法建立脑缺血再灌注模型,给予不同剂量没食子酸芍药苷治疗。结果显示,没食子酰芍药苷治疗使大鼠脑梗死体积明显减小,神经功能评分降低,并诱导大鼠脑组织中氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶活性、谷胱甘肽含量以及Nrf2/HO-1表达明显升高,而半胱天冬酶3活性、丙二醛含量、肿瘤坏死因子α和白介素1β的表达以及Tunel染色阳性细胞数明显降低。结果表明:没食子酰芍药苷可激活Nrf2/HO-1通路,减轻脑缺血再灌注后氧化应激和炎症反应,从而起到神经保护作用。

高效液相色谱法同时测定炒白芍中3种苷类成分

建立HPLC对炒白芍中3中苷类成分同时测定的分析方法。采用HPLC法;C18色谱柱;流动相:A为乙腈,B为0.1%磷酸溶液,梯度洗脱程序为:0 min(8%A),5 min(12%A),20 min(20%A),30 min(20%A),35 min(35%A),50 min(35%A);检测波长:230 nm;柱温:25℃。3种苷类成分的质量浓度与峰面积均呈良好的线性关系。平均回收率芍药苷为98.7%,RSD为2.1%;芍药内酯苷为98.7%,RSD为2.7%;苯甲酰芍药苷为99.1%,RSD为2.4%(n=6)。该方法分离度好,简便易行,具有良好的重现性,可用于白芍药材中3种苷类成分的同时测定。

7种不同灭菌方法对白芍药材中有效成分的影响

目的探讨不同灭菌方法对白芍药材主要成分含量的影响。方法采用Agilent ZORBAX SB-Aq C18(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱,流动相为A为乙腈,B为0.05%磷酸水溶液系统,梯度洗脱,检测波长230 nm,柱温30℃,流速1.0 ml/min。比较干热、湿热蒸汽、流通蒸汽、紫外、臭氧、微波和60Co-γ射线辐照等7种灭菌方法对白芍药材含量及微生物限度的影响。结果白芍药材中没食子酸、儿茶素、芍药苷、芍药内酯苷、苯甲酰芍药苷、1,2,3,4,6-O-五没食子酰葡萄糖分别在1.020~24.480,1.120~26.880,31.000~744.000,1.160~27.840,4.280~102.720,2.520~60.480μg/ml范围内呈良好线性,平均加样回收率分别为97.4%,97.7%,99.9%,98.1%,98.8%和97.7%;60Co-γ射线辐照及微波灭菌后白芍药材中有效成分含量无显著性差异。结论综合灭菌效果和对目标成分的影响,白芍药材灭菌方法可选用60Co-γ辐照灭菌或微波灭菌。

HPLC法同时测定白芍总苷中4种单萜苷的含量

目的:建立同时测定白芍总苷中氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷含量的方法。方法:采用高效液相色谱法,Shim-pack VP-ODS C18柱(250 mm×4.6 mm,5μm);流动相:乙腈(A)-0.02%磷酸水(B),梯度洗脱;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;检测波长:230 nm。结果:4个成分在50 min内均达到基线分离,线性关系良好(r≥0.9993)。氧化芍药苷、芍药内酯苷、芍药苷、苯甲酰芍药苷的平均加样回收率为99.32%、98.83%、98.99%、98.61%;RSD分别为1.77%、2.27%、1.50%、1.96%。结论:该研究建立的方法全面、快速易行,可用于白芍总苷部位的质量控制。

RP-HPLC测定白芍提取物的总苷含量

白芍来源于毛茛科植物芍药Paeonia lactifloria Pall．的干燥根。其主要有效成分为芍药苷、芍药内酯苷、氧芍药苷、苯甲酰芍药苷，通称为白芍总苷（total glucosides of paeony，TGP），具有镇静、镇痛、抗炎、保肝等活性。白芍药材及各种制剂均以芍药苷含量为质量控制指标，而白芍总苷的含量测定方法报道较少。中药有效部位的含量测定多采用紫外分光光度法，如独一味总黄酮的含量测定等，

高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱法鉴定金匮肾气丸总苷化学成分及代谢产物

应用高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱法(HPLC-ESI/MSn)鉴定金匮肾气丸总苷的化学成分及总苷大鼠灌胃给药血浆化学成分或代谢产物。对比体内外样品色谱图各色谱峰,根据负离子模式下的分子离子峰获得化合物分子量信息,金匮肾气丸总苷含19个化学成分:没食子酰-3-O-芹糖基(1→6)葡糖苷、羟基芍药苷、莫诺苷、马钱苷、獐芽菜苷、地黄苷A或B、1,2,3-三-O-没食子酰葡萄糖、芍药苷、山茱萸新苷Ⅱ、6'-(3,4,5-三羟基苯甲酰)芍药苷、1,2,3,6-四-O-没食子酰葡萄糖、山茱萸新苷Ⅰ、五没食子酰葡萄糖、苯甲酰羟基芍药苷、丹皮酚原苷、苯甲酰芍药苷、4'-羟基,6'-(3,4,5-三羟基苯甲酰)芍药苷和两个未知化合物成分。金匮肾气丸总苷大鼠灌胃血浆鉴定出17个化学成分,其中有8个化合物以原型存在,9个可知代谢转化成分,分别为没食子酸,2-羟基苯乙酮-4-O-葡萄糖醛酸酯,芍药苷代谢素Ⅰ,2-羟基-4-甲氧基苯乙酮-5-O-硫酸酯,2,4-二羟基苯乙酮-5-O-硫酸酯,2,4-二羟基苯乙酮和3个未知成分。

白芍总苷治疗糖尿病肾病的药理作用研究进展

白芍为我国传统中药毛茛科植物芍药的干燥根。白芍总苷（totalglucosidesofpaeony，TGP）为白芍中提取的有效成分，主要含有芍药苷、芍药内酯苷、羟基芍药苷、苯甲酰芍药苷等单萜苷类化合物。TGP的药理作用主要有止痛、抗炎、保肝以及多途径抑制自身免疫反应等。目前，TGP用于抗炎镇痛，治疗类风湿关节炎、系统性红斑狼疮等自身免疫疾病方面的相关研究较多。

白芍总苷作用机理及其在皮肤科的应用

白芍为毛茛科植物芍药的干燥根，传统医学认为有益气、养血、止痹、通络的作用。其主要成分包括芍药苷（PF）、羟基芍药苷、芍药花苷、芍药内酯苷以及苯甲酰芍药苷等，统称为白芍总苷（TGP）。^1其中芍药苷占总苷量的90％，是白芍的主要有效成分。