酵母双杂交文库筛选及hTRIP15与Y盒结合蛋白-1相互作用的探讨

为探讨甲状腺素受体相互作用蛋白(hTRIP15)是否与其他核蛋白发生相互作用,以hTRIP15作为诱饵,用酵母双杂交技术筛选人肝cDNA文库,在高严格度选择培养基(SD-Trp-Leu-Ade-His)上长出的克隆773个,再经β-gal表达和PCR等技术进一步缩小范围,经Blastn搜寻最终显示2个重复克隆编码一种共调节辅因子——Y盒结合蛋白-1(YB-1).将插入序列与全长YB-1比较发现进入ORF内230bp,插入序列编码82aa,该蛋白称为YB-1-p,经蛋白体外翻译及GST-pulldown试验证实YB-1-p与hTRIP15发生相互作用.提示hTRIP15可通过与YB-1相互作用,参与调控MHCII及TSH受体等甲状腺细胞重要基因表达.

酵母双杂交法筛选组织蛋白酶B相互作用蛋白质

组织蛋白酶B是肿瘤侵袭和转移密切相关的一种蛋白酶,研究其作用网络对于开发基于组织蛋白酶B的抗肿瘤药物非常重要。采用酵母双杂交技术构建相关文库,以人组织蛋白酶B作为诱饵蛋白质,寻找其在肿瘤细胞中的直接相互作用蛋白质。在84个初始阳性克隆中,共有15个能通过3个报告基因的检测。BLAST分析发现,在GenBank数据库中可以匹配7个基因,编码7种已知的蛋白质:BCL2-associated athanogene 6 (BAG6), filaminA,alpha(FLNA),ras homolog family member G (RHOG),metallothionein 2A (MT2A), ZXD family zinc finger C(ZXDC),DEP domain containing 7(DEPDC7),A kinase(PRKA) interacting protein 1(AKIP1)。