微量稀释法检测申克孢子丝菌酵母相体外抗真菌药物敏感性

目的用液基微量稀释法观察双相真菌申克孢子丝菌酵母相体外抗真菌药物敏感性。方法将54株申克孢子丝菌临床株于脑心浸液琼脂培养基连续传代获得酵母相,参考美国临床实验室标准化委员会(CLSI)的微量稀释法M27-A2检测菌株酵母相对碘化钾、氟康唑、伊曲康唑和特比萘芬的体外敏感性,并观察碘化钾对伊曲康唑和特比萘芬体外抑菌作用的影响。质控株为克柔念珠菌ATCC6258。结果碘化钾体外无抑菌作用;氟康唑最小抑菌浓度(MIC)几何均数大于64μg/mL;伊曲康唑和特比萘芬MIC几何均数分别为0.98μg/mL和0.17μg/mL。伊曲康唑及特比萘芬的MIC值分别高于伊曲康唑+碘化钾及特比萘芬+碘化钾(P均<0.05)。来源皮肤固定型的菌株与来源皮肤淋巴管型菌株相比MIC值差异无统计学意义(P>0.05)。结论改良的M27-A2方法适用于检测申克孢子丝菌酵母相体外敏感性;酵母相时碘化钾对伊曲康唑、特比萘芬体外抑菌作用有一定的加强效应。

两种方法测定马尔尼菲青霉酵母相体外药敏试验的一致性研究

双相真菌马尔尼菲青霉（Penicillium marneffei，PM）感染所致的马尔尼菲青霉病（Penicilliosis mameffei，PSM）是导致我国南方，尤其是广西、广东地区艾滋病患者死亡的主要感染因素。PM可致全身多器官侵袭感染，如得不到正确治疗病死率高。

白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因PCR-RFLP比较分析

目的通过对白念珠菌菌丝相与酵母相ERGIl基因限制性片段长度多态性分析，比较两相细胞在DNA水平的差异。方法分别抽提来自同一亲本、对氟康唑敏感性不同的白念珠菌（CA-1，CA-2，CA-4，CA-6，CA-7，CA-9，CA-11，CA-13～CA-17）菌丝相与酵母相基因组DNA，根据ERG11基因序列设计一对引物，对其进行PCR扩增（包括部分上游和下游非编码区），扩增产物分别用AccⅠ和MunⅠ消化、琼脂糖凝胶电泳后观察。结果各株白念珠菌菌丝相与酵母相均能扩增出约1734bp大小的目的片段，CA-7，CA-14，CA．16和CA-17株两相细胞ERG11基因RFLP图谱存在差异，其余受试菌株未见差异。结论从DNA全貌来看，白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因存在差异。

温度和培养基在申克孢子丝菌酵母相转化中的作用研究

【目的】探讨不同温度和培养基在申克孢子丝菌酵母相转化中的作用。【方法】将4株临床分离菌株分别接种于SDA、PDA、BHI、50mg/kg羊血BHI及5mg/kg GSBHI5种培养基平皿上,每种培养基接种5个平皿,分别置于25℃、35℃、36℃、37℃及38℃含体积百分数为5%CO2的恒温箱中培养。观察菌落生长情况并计算酵母细胞转化率。【结果】在38℃,平皿转化率为25%(只有1株菌发生了转化);在35℃和37℃时,平皿转化率分别是60%和85%;而在36℃时平皿转化率仅为45%。使用50mg/kg羊血BHI和0.5%GSBHI培养基培养,65%培养皿上的菌株发生了酵母相转化,使用BHI培养基培养,45%培养皿上的菌株发生了酵母相转化,而使用SDA和PDA培养基培养,只有20%培养皿上的菌株发生了酵母相转化。37℃时,有3株菌在BHI、50mg/kg羊血BHI和5mg/kg GSBHI培养基上的酵母细胞转化率均达到90%,1株菌在SDA、PDA和BHI培养基上的转化率均低于10%。【结论】温度是影响申克孢子丝菌酵母相转化的关键因素,培养基的营养成分亦是影响转化效果的重要因素。

SELDI技术对马尔尼菲青霉菌酵母相和霉菌相蛋白质组表达差异的分析

目的比较马尔尼菲青霉菌酵母相和霉菌相蛋白质组表达差异。方法应用表面增强激光解吸离子化飞行时间质谱技术(SELDI)检测马尔尼菲青霉菌酵母相和霉菌相的蛋白质谱。用PBSIIC型蛋白质芯片阅读机读取数据并进行分析。结果在WCX2芯片上共捕获75个蛋白峰,其中10个蛋白质在酵母相高表达,3个蛋白质在霉菌相高表达。相对分子质量为2900和3151蛋白质仅在酵母相表达,13151和13285蛋白质仅在霉菌相表达。结论SELDI技术可以检测出马尔尼菲青霉菌霉菌相和酵母相表达的小分子蛋白质差异。

EFG1和HGC1基因在白念珠菌菌丝相和酵母相的表达差异

目的比较白念珠菌双形态性的两个调控基因,即增强菌丝生长基因(Enhanced Filamentous Growth,EFG1)和菌丝G1细胞周期蛋白基因(hyphal G protein cycle1,HGC1)在菌丝相和酵母相中的表达情况,寻找调控菌丝表达的关键基因。方法分别提取白念珠菌菌丝相和酵母相的RNA,行半定量RT-PCR检测,比较EFG1和HGC1两个基因的RNA表达差异。结果EFG1在菌丝相和酵母相都有表达,差异无显著性意义,而HGC1在菌丝相有表达,在酵母相无表达。结论HGC1为菌丝特异基因。

白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因部分序列的比较研究

目的 通过对白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因部分序列的比较,探讨两相在DNA水平的差异。方法 对5株分离自同一HIV阳性患者的白念珠菌分别进行菌丝相与酵母相培养后,抽提基因组DNA,PCR扩增ERG11基因(包括部分上游和下游非编码区),用下游引物对部分ERG11基因进行测序。结果CA-7菌丝相与酵母相ERG11基因序列存在差异,分别位于第1547,1587和1617位点。结论 白念球菌菌丝相与酵母相在DNA水平存在差异,在进行白念珠菌的病原真菌学研究中菌丝相为适宜的研究对象。

球形孢子丝菌64株由菌丝相向酵母相的转化实验

目的观察球形孢子丝菌由菌丝相向酵母相转换形态学的变化,在三种培养基的酵母转化率。方法将64株球形孢子丝菌于脑心浸液琼脂(BHI)35℃观察菌落及显微镜下酵母转化形态,并与0.5%葡萄糖脑心浸液琼脂(GSBHI)、马龄薯(PDA)培养基上酵母相转化率进行比较。结果多次传代能使酵母转化更完全,BHI转化率48.43%,GSBHI转化率65.63%,PDA转化率为20.31%。结论球形孢子丝菌由菌丝相至酵母相转化需经过连续多次传代;在GSBHI培养基中35℃酵母转化率最高。

白念珠菌酵母相与菌丝相对5种抗真菌药物的敏感性比较

目的比较白念珠菌酵母相与菌丝相对常用抗真菌药物的敏感性的差异,为病原真菌学研究及临床用药提供理论指导。方法应用法国生物-梅里埃ATB FUNGUS 3药敏试剂盒对临床分离的220株白念珠菌进行抗真菌药物的敏感性测定。结果 220株白念珠菌酵母相与菌丝相对两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑、5-氟胞嘧啶5种常用的抗真菌药物的敏感率分别为97.27%与97.73%,81.82%与85.00%,87.27%与90.46%,92.72%与95.00%,96.82%与97.27%。氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑对白念珠菌酵母相MIC值明显高于菌丝相,差异有显著性(P<0.05),两性霉素对白念珠菌酵母相和菌丝相MIC值差异不显著(P>0.05)。受试菌株两相细胞对5种抗真菌药物敏感度总体一致性为85.46%(188/220),有32株菌株酵母相表现为耐药及中介,但菌丝相却为中介与敏感。结论白念珠菌酵母相和菌丝相对5种抗真菌药物的敏感性存在差异,抗真菌药物对菌丝相的抗菌活性强于酵母相。

申克孢子丝菌菌丝相至酵母相转化的实验研究

目的观察申克孢子丝菌菌丝相向酵母相转化的形态学变化并初步研究连续传代后菌株转化为酵母相的百分率。方法将95株申克孢子丝菌临床株于脑心浸液琼脂培养基上连续传代至酵母相,利用显微镜及血细胞计数板计数菌丝和孢子比例并记录显微镜下形态。结果 95株申克孢子丝菌中,经1次传代即成功转化有23株,经2次传代有14株,经3次传代有10株,经4次传代有6株,4次传代后总计55.8%实验菌株转化为酵母相。结论部分申克孢子丝菌由菌丝相向酵母相转化需经过连续多次传代,连续传代增加了菌丝相至酵母相的转化率。

氟康唑对白念珠菌菌丝相与酵母相体外药物敏感性差异比较

目的:以同一亲本来源的7株白念珠菌为对象,研究氟康唑对其菌丝相与酵母相抗菌活性的差异。方法:参照NCCLS M27-A方案,测定氟康唑对7株白念珠菌菌丝相与酵母相的MIC值,并比较其差异。结果:白念珠菌菌丝相与酵母相对氟康唑的敏感性不同,对菌丝相的MIC值低于酵母相。结论:氟康唑对白念珠菌菌丝相的抗菌活性强于酵母相。

白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因部分序列比较研究

目的通过对白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因部分序列的比较,探讨两相细胞在DNA水平的差异。方法分别抽提7株来自同一亲本且对氟康唑敏感性不同的白念珠菌菌丝相与酵母相基因组DNA,根据ERG11基因编码序列设计一对引物,对ERG11基因第948位点至第1 254位点307bp的碱基序列进行PCR扩增,以PCR产物直接测序比较两相在该片段碱基序列上的差异。结果7株白念珠菌菌丝相与酵母相在该片段的碱基序列无差异。结论白念珠菌菌丝相与酵母相ERG11基因的第948位点至第1 254位点序列无差异。

胎牛血清脑心浸液琼脂培养基在马尔尼菲青霉酵母相转相中的应用

目的探讨胎牛血清脑心浸液琼脂培养基在马尔尼菲青霉由菌丝相向酵母相转相中的应用价值,以及两种不同来源马尔尼菲青霉(即临床人感染株及广西野生银星竹鼠寄生株)在该培养基中转相程度的异同。方法取临床人感染株18株及竹鼠寄生株13株分别接种在已配制好的胎牛血清脑心浸液琼脂培养基(实验组)及普通脑心浸液琼脂培养基(对照组)上并置于37°C恒温恒湿箱中培养7d,再连续转种2次后,取菌落均匀涂片并予乳酸酚棉兰染色,在高倍显微镜下观察并计算单个酵母样细胞和关节孢子占该镜下所有细胞的百分比(即转化率),连续取卫星位6个镜下视野百分值的平均值作为该菌最终转化率。结果马尔尼菲青霉临床人感染株酵母相下单个酵母样细胞和关节孢子占每镜下所有细胞百分比为(75.08±3.32)%,对照组为(54.09±4.92)%;竹鼠寄生株实验组为(73.36±2.64)%,对照组为(52.37±2.57)%;两种不同来源马尔尼菲青霉酵母相下实验组与对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05);临床人感染株的实验组和对照组与竹鼠寄生株相应组别比较差异均无统计学意义(P>0.05)。结论胎牛血清脑心浸液琼脂培养基在马尔尼菲青霉酵母相转相中有较高的应用价值,值得推广;两种不同来源马尔尼菲青霉酵母相在胎牛血清脑心浸液琼脂培养基中转相程度无区别。

Cdc42基因在阿萨希毛孢子菌酵母相和菌丝相的表达差异

目的研究细胞分裂周期蛋白42(cell division cycle42,Cdc42)基因在阿萨希毛孢子菌的菌丝相和酵母相中的表达差异,探讨其在菌丝生长过程中的作用。方法分别培养标准株酵母相和菌丝相组、标准株不同时间生长组、4株不同来源菌株生长组,检测三组阿萨希毛孢子菌菌丝生成率,并提取总RNA,采用荧光定量PCR方法测定各组中Cdc42的基因表达,并计算其相对表达量。结果不同条件下菌丝生成率不同,Cdc42在各组中均有表达,且随着菌丝生成率的升高,Cdc42基因表达量基本呈上升趋势。结论 Cdc42参与菌丝的形成。

白假丝酵母相关Toll样受体的研究进展

白假丝酵母引起的疾病越来越多,其表现也多种多样,尤其是细胞免疫缺陷病人会产生威胁生命的系统性真菌病,其病死率为35%,天然免疫在抵御该菌感染方面具有特别重要的意义,宿主细胞通过模式识别受体识别各种微生物的病原体相关分子模式,而Toll样受体和Nod蛋白是两类参与天然免疫的模式识别受体,其中Toll样受体家族在抗真菌感染中起非常重要的作用.本文对人体中该受体的概况,以及与抗白假丝酵母紧密相关的Toll样受体2和Toll样受体4作一综述.

菌丝相和酵母相白念珠菌ERG1 1基因部分序列差异性的研究(英文)

目的 研究白念珠菌菌丝相和酵母细胞氟康唑作用的靶酶编码基因 (ERG11)碱基序列上的差异 ,从而探讨两相细胞之间的差异性。方法 分别抽提 7株来自同一母体、依次对氟康唑逐渐耐药的白念珠菌菌丝和酵母相的基因组DNA ,根据ERG11编码序列设计一对引物 ,对ERG11基因的第 4 0 3位点至第 70 1位点的 2 98的碱基序列进行PCR扩增 ,经PCR产物直接测序比较两相ERG11基因碱基序列上的差异。结果 7株白念珠菌的菌丝相与酵母相细胞间的ERG11基因碱基序列在该片断上无差异。结论 菌丝相和在酵母相白念珠菌ERG11基因的部分碱基序列是无差异的。

申克孢子丝菌酵母相的体外药物敏感性研究

目的：检测申克孢子丝菌酵母相对7种抗真菌药物的体外敏感性.方法：应用美国临床与实验室标准化研究所（CLSI）颁布的M27-A2方案检测15株临床分离的申克孢子丝菌对伊曲康唑、特比萘酚、氟康唑、酮康唑、咪康唑、两性霉素B及5-氟胞嘧啶的体外最小抑菌浓度（MIC）.结果：特比萘酚对申克孢子丝菌酵母相的体外敏感性最高,几何平均值为0.144,其次为酮康唑0.710.氟康唑与5-氟胞嘧啶的敏感性较差,分别为16和15.47.结论：特比萘酚对申克孢子丝菌酵母相有较高的抑菌活性.至于是否具有较好的体内治疗效果,需要进性体内体外抗真菌的相关性研究.

白念珠菌菌丝相和酵母相ERG11基因部分序列差异性的探讨

目的研究白念珠菌菌丝相和酵母相细胞ERG11基因碱基序列上的差异,探讨两相细胞之间的差异性。方法分别抽提从同一HIV阳性患者体内分离到的7株对氟康唑敏感程度不同的白念珠菌菌丝相和酵母相的DNA,此系白念珠菌经染色体水平及DNA水平证实来源于同一亲本。根据ERG11编码序列设计一对引物,对ERG11的近3'端的310bp的碱基序列进行PCR扩增,引物序列为:上游引物5'-GGGAAAGTTTCTAAAGGGG-3';下游引物5'-TATGTTAATCCAACTAAGTAA-3'。经PCR产物直接测序比较两相细胞ERG11基因碱基序列上的差异。结果1株氟康唑剂量依赖性敏感和2株氟康唑耐药白念珠菌的菌丝相与酵母相细胞间均出现ERG11基因1547位点、1587位点和1617位点的不一致。结论白念珠菌的菌丝相和酵母相ERG11基因的部分序列存在差异。