蛋氨酸高产酵母突变株的推理筛选

以啤酒酵母（Saccharomycescerevisiae）菌株Ⅰ为出发株，经紫外线处理后，在含可完全抑制出发株生长的乙硫氨酸（浓度为2g/L）的基本培养从上筛出14株生长良好的突变株，其中I－2，I－9株还能在无硫基本培养基上良好生长。经氨基酸自动分析仪检测，I－2株菌体蛋白中的蛋氨酸含量（质量由分比）由I株的1．93增年9．28。

高产GSH酵母突变株Y518谷胱甘肽合成酶结构分析

酿酒酵母突变株Saccharomyces cerevisiaeY518比原始菌株谷胱甘肽产量有明显提高,有较好的耐酸性,本研究通过克隆突变前后谷胱甘肽合成酶基因并进行结构比较,分析其突变后耐酸性提高的原因。结果表明:Pro54Leu使突变残基扭转角度由-40.2°变为-50.4°,柔性增强,可能有利于酶催化过程中"帽子"结构域的位移形成闭合构象而提高了与底物结合的稳定性;Leu54侧链基团向外伸展,包裹暴露表面的—SH,避免因氧化而影响酶分子活性;同时疏水性的增强可能使C端羧基pKa值下降从而使活性位点pKa值降低,导致最适pH值的改变。

由酵母突变株生产风味物质

野生酵母菌种CCU—16经过三次亚硝基胍诱变处理,获得一支突变株CCU—N_(16)—18143,它可以利用葡萄糖为培养基产生风味物质,使营养饮料的风味得到强化。该突变株经计算机系统鉴定属于啤酒酵母类。生产风味物质的较佳培养基组成为(g/l):葡萄糖100,NH_4NO_3 12、酵母浸出汁 3,MgSO_4l、(NH_4)_2SO_4l、KH_2PO_4 2、pH3.5。最佳培养条件为:温度30℃、搅拌转速150rpm。500ml三角瓶装液量为50ml、培养时间96小时。培养基质中产生的风味化合物经气相色谱和气质联谱测定,结果表明;突变株比出发菌种产生的风味物质量大大提高,异戊醇的含量由7.76%增加到61.64,而乙醇含量则由85.25%减少到5.77%。

人Elongator复合物Elp4亚基基因可部分补偿酵母ELP4缺失菌株的生长缺陷

为研究人Elongator复合物Elp4亚基的功能 ,将人ELP4基因转入酵母ELP4基因缺失的突变菌株 (elp4△菌株 )中 ,并对转化菌株进行功能互补实验和SSA3和PHO5基因表达分析 ,结果表明人的ELP4基因不能恢复突变菌株对高盐的敏感性 ,但可以在一定程度上缓解突变菌株对高温、咖啡因 (Caffeine)和 6 氮尿嘧啶 (6 AU)的敏感性 ,部分恢复低磷条件下PHO5基因表达延迟的缺陷 ,并可在热激条件下提高SSA3基因的表达 ,因此人的ELP4基因可以部分补偿酵母ELP4基因缺失所引起的生长缺陷 ,提示人的Elp4亚基可能与酵母的该亚基功能相似。

双元载体提供组蛋白H3/H4拷贝1的elp3Δ菌株的构建

人Elongator是在转录中有功能的组蛋白乙酰转移酶(HAT)复合物,为研究其催化亚基Elp3功能,构建了酵母组蛋白H3/H4拷贝1的双元表达载体pRS316CFT,通过PCR介导的基因敲除,获酵母基因组H3/H4缺失由双元载体提供单拷贝H3/H4的elp3Δ菌株.敏感性实验表明该载体提供H3/H4可维持酵母正常生长.本工作为构建H3/H4乙酰化位点突变菌株,用功能互补在体内研究人Elp3 HAT活性功能奠定了基础.

花生3-磷酸甘油酰基转移酶基因的功能鉴定

花生(Arachis hypogaea)是我国的主要油料作物,花生油脂的合成受3-磷酸甘油酰基转移酶(GPAT)调控,但其调控机制尚不清楚。从花生中克隆了13个GPAT基因,编码含有4个酰基转移酶保守结构域的蛋白;同时,运用酵母遗传互补体系对基因功能进行了鉴定。在该体系中,酵母双突变体菌株ZAFU1(Δgat1/Δgat2)因缺少GPAT而不能在特定的葡萄糖培养基上生长。结果表明,AhGPAT1/2/3/6/9与空白载体一样,其导入并不能恢复酵母双突变体ZAFU1在葡萄糖中的生长缺陷,而AhGPAT5B、AhGPAT7A/B的导入能恢复酵母双突变体ZAFU1在葡萄糖中的生长缺陷,说明上述3个基因具有酰基转移酶活性,从而为进一步研究花生油脂的合成代谢调控提供了参考。