优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株的选育

通过初筛、单倍体分离、诱变、原生质体融合及杂交等育种技术选育出一株具有高生物量、耐高糖、强絮凝性能的优良酿酒酵母(面包酵母)三倍体菌株ZLFH-121,其生物量分别为原始亲株BL68、BL92、L77的1.22、1.33与1.83倍;絮凝性能明显优于原始亲株BL68、BL92。并对其培养条件进行了优化研究,结果表明三倍体菌株ZLFH-121能够很好地利用糖蜜培养基,并表现出良好的絮凝能力。在优化的培养条件下,生物量提高至93.82g/L(湿重),为初始培养条件下的1.30倍。经遗传稳定性分析,证明三倍体菌株ZLFH–121遗传稳定,是一株具有潜在应用价值的优良酿酒酵母(面包酵母)菌株。

丙型肝炎病毒E2结合蛋白基因在人胰腺细胞cDNA文库中的筛选

目的:筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白E2相互作用的结合蛋白的编码基因.方法:扩增人胰腺细胞cDNA文库进行纯化鉴定,并将文库质粒转化酵母菌株Y187.诱饵质粒pGBKT7-E2转化酵母菌株AH109,在色氨酸缺陷型培养基(SD/-Trp)上筛选阳性菌落.应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合,在4缺培养基(SD/-Trp/-Leu/-His/-Ade)和铺有X-α-gal的4缺培养基上进行筛选,提取蓝色酵母菌落质粒,电转化大肠埃希菌DH5α后再提取质粒测序.测序结果进行序列比对.结果:成功构建人胰腺cDNA文库以及pGB-KT7-HCVE2重组质粒,筛选出8种与HCVE2蛋白相结合的蛋白基因,分别为:胰凝乳蛋白酶原B1前体、胰蛋白酶原、胆盐刺激酯酶、CDK5、羧肽酶B1、人类v-Ki-ras2、鼠Kirsten肉瘤、弹性蛋白酶3A及辅脂肪酶.结论:筛选出的与HCVE2蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中,部分与2型糖尿病、肝脏脂肪变性密切相关.

核基质MINTC端片段(2226-2959)相互作用分子的筛选与鉴定

目的 :为了研究MINT的功能及其转录抑制的机制 ,筛选与MINT相互作用的蛋白 .方法 :以MINT第 2 2 2 6 2 95 9氨基酸 (F5 )为诱饵 ,用酵母双杂交法筛选小鼠胚胎 9d的cDNA文库 .用诱饵质粒和文库先后转化酵母宿主后 ,对 4 .5× 1 0 6个酵母克隆进行了营养筛选和α 半乳糖苷酶筛选 ,获得 5 1个阳性克隆 .从中提取质粒进行酶切鉴定 ,获得 1 0个非重复克隆 ,对此 1 0个克隆进行序列分析 .结果 :筛选到的 3个基因分别为MINT ,α 晶状体蛋白结合蛋白 1 (AlphaA CRYBP1 )和核受体辅抑制因子 1 (N CoR1 ) .在酵母中分析了N CoR1与MINT的作用区段 ,N CoR1与MINT的 2 2 2 6 2 95 9和 2 96 0 35 76两个片段均有相互作用 .结论 :①MINT在细胞内可能形成二聚或多聚体 ;②除了RBP J和MSX2外 ,MINT还可能调节AlphaA CRYBP1的活性 ;③MINT可能通过N CoR1募集组蛋白去乙酰化酶 (HDAC)

人胰腺细胞cDNA文库中丙型肝炎病毒E1结合蛋白基因的筛选

目的应用酵母双杂交技术筛选人胰腺细胞cDNA文库中与HCV包膜糖蛋白E1相互作用的结合蛋白的编码基因。方法扩增人胰腺细胞cDNA文库并经纯化鉴定后，将文库质粒转化酵母菌株Y187。诱饵质粒pGBKT7-E1转化酵母菌株AH109，在色氨酸缺陷型培养基（SD／-Trp）上筛选阳性菌落。应用酵母双杂交系统3将阳性重组AH109菌株与重组酵母菌株Y187进行配合，在四缺培养基（SD／-Trp／-Leu／-His／Ade）和铺有X—a—gal的四缺培养基上进行筛选，提取蓝色酵母菌落质粒，电转化大肠埃希菌DH5a后再提取质粒测序，测序结果进行序列比对。结果筛选出16种与HCVE1蛋白相结合的蛋白基因。结论在筛选出的与HCVE1蛋白结合的人胰腺细胞蛋白基因中，部分可能与糖、脂类代谢密切相关。

HCV核心蛋白结合蛋白基因6的克隆

目的 克隆与丙型肝炎病毒 (HCV)核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因。方法 应用酵母双杂交系统 ,构建丙型肝炎病毒核心蛋白诱饵质粒 ,转化酵母AH10 9后与含文库质粒的酵母Y187进行配合 ,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选。筛选出 30个克隆 ,既能在四缺营养缺陷培养基上生长 (SD Trp Leu Ade His)又能在涂有x α gal的四缺培养平皿上长出蓝色菌落 ,提取此酵母克隆的质粒 ,转化大肠埃希菌后进行测序 ,进行生物信息学分析。结果 分析结果显示 ,其中 6号克隆的测序结果与Genbank中的 2个未知功能序列有 98%的同源性 ,初步证明了此基因与丙型肝炎病毒核心蛋白有结合性。结论 丙型肝炎病毒核心蛋白结合蛋白肝基因克隆成功。