右旋糖苷修饰酵母蔗糖酶条件的筛选及修饰酶性质的研究

以低分子右旋糖苷（Dextran）为修饰剂,选用L16（45）正交试验方案,研究了不同修饰条件对酵母蔗糖酶（Yeast invertase）化学修饰效果的影响以及修饰前后酶的性质变化.结果表明,pH 5.0、20℃、反应8 h为最佳的修饰条件.与天然酶相比,修饰酶的酶比活力、糖含量、酶活力回收率分别提高56.7%、35.05%和14.61%,蛋白含量下降22.66%,氨基修饰率为39.55%.酶学性质研究表明,修饰后酶的最适pH在4.0-5.0范围内,最适温度55-60℃,在pH 3.5缓冲液中稳定性上升,在pH 6.5缓冲液中稳定性下降,在60℃缓冲液中稳定性下降.动力学研究表明,修饰后酶的Km和vm ax均上升,光谱分析表明,修饰后酶的构型构象均发生变化.

壳聚糖固定化酵母蔗糖酶的研究

用壳聚糖作吸附剂、戊二醛作交联剂,对酵母蔗糖酶进行固定化研究,同时用琼脂糖固定化的蔗糖酶和游离酶与其进行比较。结果表明,壳聚糖固定化蔗糖酶贮藏稳定性、对变性剂以及对温度的耐受性均明显优越,而Km值与琼脂糖固定化酶相当,但比游离酶明显增高,酶的最适pH三者相近。研究表明,壳聚糖固定化酶所需的戊二醛浓度为0.6%,交联时间不低于6 h。固定化蔗糖酶对变性剂(乙醇、脲)的耐受力明显高于游离酶。

酵母蔗糖酶K_m值的测定

Ｋｍ值是酶的特征性常数，测定Ｋｍ值是研究酶动力学的一种重要方法。故“Ｋｍ值的测定”是医学院校本科生、研究生生物化学实验课的重要内容。多年来，在给学生开设碱性磷酸酶Ｋｍ值的测定或酵母蔗糖酶Ｋｍ值的测定中，我们发现原实验［１］存在一些问题。对此，我们作了...

酵母蔗糖酶的纯化及其化学修饰

采用细胞破碎,热变性除杂蛋白,有机溶剂沉淀,DEAE-Sepharose Fast Flow柱层析等方法从酵母中纯化酵母蔗糖酶,用5种化学修饰剂PMSF、SUAN、NBS、DTT、EDTA及几种金属离子对其进行化学修饰。结果表明:酶分子中的丝氨酸残基和金属离子与酶活力无关,赖氨酸残基和半胱氨酸残基对酶活力有一定贡献,但不位于酶的活性中心;而色氨酸残基是酶活性中心的必需基团。

蛋白变性剂对酵母蔗糖酶及其修饰酶的催化活性影响及其作用分子机制

为了解蛋白质变性剂对酵母蔗糖酶(YInv)及其修饰酶(COS-Inv)的作用效果及分子机理,用尿素和盐酸胍处理天然蔗糖酶及其修饰酶,对处理前后酶活性的变化、酶的催化动力学、吸收光谱、紫外差示光谱和荧光光谱进行了探索。研究结果发现,低浓度(<0.3 mol·L^(-1))尿素对COS-Inv有激活作用,0.2 mol·L^(-1)的尿素溶液使其活性提高了10.54%;但尿素对YInv只表现出抑制作用。盐酸胍对YInv和COS-Inv的活性都产生明显的抑制作用。动力学分析结果显示,0.2 mol·L^(-1)的尿素可提高COS-Inv与底物的亲和力,而降低YInv与底物的亲和力。盐酸胍对YInv的抑制主要是通过降低最大反应速度来实现的,其反应机理类似于反竞争性抑制。盐酸胍对COS-Inv的抑制是通过降低酶与底物的亲和力来实现的,类似于竞争性抑制。紫外吸收光谱、紫外差示光谱和荧光光谱分析显示,在盐酸胍和尿素溶液中,YInv和COS-Inv的分子构型基本不变,但其构象却发生明显变化。

酵母蔗糖酶提取条件的改进

本文利用正交试验法对酵母细胞中蔗糖酶的提取条件进行了研究。确定了不需冰冻离心机就可进行的酵母蔗糖酶粗酶液的提取条件:16℃下,活化酵母∶蒸馏水=1∶8,放置8h,取上清液。并在此基础上,确定了酵母蔗糖酶粗酶液的制备过程。

EDTA和金属离子对酵母蔗糖酶天然酶和修饰酶酶活力的影响及其作用机理研究

以不同浓度EDTA、Mn2+、Zn2+和Fe2+为效应物,以蔗糖为底物,研究EDTA和金属离子对酵母蔗糖酶(Yeast invertase)天然酶和修饰酶催化活性的影响。结果表明:EDTA对天然酶和修饰酶均有抑制作用。Mn2+对天然酶和修饰酶有激活作用;Zn2+和Fe2+对天然酶有抑制作用,对修饰酶有激活作用。动力学分析显示,经5 mmol/L EDTA、Mn2+、Zn2+和Fe2+处理后,天然酶和修饰酶的Km和Vmax值均发生变化。光谱分析显示,经不同浓度EDTA和Fe2+处理后,天然酶和修饰酶的构型构象发生变化;经不同浓度Mn2+和Zn2+处理后,天然酶和修饰酶的构型构象基本上没有发生变化。

自制酵母蔗糖酶进行“酶的专一性”实验探究

通过从酵母菌中提取蔗糖酶，使“探究酶的专一性”的实验结果更加明显。学生通过做实验、分析实验，进一步理解对照实验，体会等量原则和单一变量原则。

用高速液相色谱定量测定环状糊精

环状糊精是由6～8个葡萄糖通过α—1,4键结合成的环状的糊精。根据葡萄糖组成的数目,分别称为环六淀粉糖)α—cD),环七淀粉糖(β—C D)和环八淀粉特(γ—C D)。环状糊精是由 Bacillus megateriu-ml),Bacillus macerans2),Bacillus c-irculan3),Stearothermophilus4),Baci-llus5)