基于酿酒酵母表面展示技术构建寨卡口服疫苗及其免疫活性初探

目的:基于酿酒酵母表面展示技术构建具有免疫活性的寨卡病毒(ZIKV)口服疫苗。方法:以Zika/SZ01/2016的包膜(Envelope)基因作为研究对象,以酿酒酵母表面展示质粒p YD1为骨架,构建EBY100/p YD1-Envelope。通过蛋白质印迹法(western blot)、免疫荧光分析和流式细胞仪分析,对Envelope蛋白进行定性分析,通过BCA蛋白测定试剂盒对Envelope蛋白进行定量分析。以SPF级的BALB/c小鼠作为动物模型,考察3种免疫方案(给药方案A:50 OD_(600 nm)·d^(-1)×3 d,给药方案B:75 OD600 nm·d^(-1)×2 d,给药方案C:150 OD_(600 nm)·d^(-1)×1 d)的口服免疫效果。结果:3种免疫方案均能诱发产生较高水平的体液免疫应答和黏膜免疫应答。给药方案C的免疫效果最佳。结论:本研究首次探讨了ZIKV口服疫苗的免疫效果,为有效预防ZIKV感染提供了一种可供参考的解决方案。

酵母表面展示技术应用的研究进展

酵母菌的蛋白表达方式与高等真核生物细胞十分相似,酵母表面展示技术是研究真核生物,尤其是人类蛋白质表达的理想方法之一。酵母菌表面标记可溶性配基,通过流式细胞技术对酵母菌展示文库进行快速、精确的筛选,其已广泛用于研究天然蛋白质-蛋白质的相互作用、抗体Fab片段的亲和力,成熟、抗体的检测与筛选,以及功能蛋白质抗原表位图谱绘制等。

酵母表面展示技术应用的最新进展

酵母表面展示(yeastsurfacedisplay,YSD)技术是一种将外源靶蛋白基因序列与特定的载体基因序列融合后导入酵母细胞,利用酵母细胞内蛋白转运机制将靶蛋白表达并定位于酵母细胞表面的技术,最常用的是α-凝集素表达系统。酵母细胞具有真核细胞翻译后修饰机制,能够帮助目的蛋白正确折叠,可以用来展示各种真核蛋白,包括抗体、受体、酶和抗原肽等。酵母表面展示技术已成为生物技术和生物医学领域的强大蛋白质工程工具,结合流式细胞分选可用于改善蛋白质性质,包括亲和力、特异性、酶功能和稳定性等。本文从文库构建与筛选、抗体工程、蛋白质工程、酶工程和疫苗开发等方面对酵母表面展示技术应用最新进展进行了综述。

解脂耶氏酵母细胞表面展示乳糖水解酶高效水解乳糖

乳糖是婴幼儿获取能量的重要碳源之一,但乳糖需要在乳糖酶的作用下水解成半乳糖与葡萄糖后才能被吸收。缺少乳糖分解酶的婴幼儿在摄入含乳糖的食品后,未被消化的乳糖会直接进入大肠,刺激大肠蠕动加快,造成一系列不适应症状即乳糖不耐症,我国属于乳糖不耐症高发国家。因此,解决乳糖的体外水解问题对减轻该症状有重要的意义。研究通过将β-半乳糖苷酶（也称为乳糖水解酶）表面展示在食品安全微生物解脂耶氏酵母（Yarrowia lipolytica）细胞表面,通过培养获得该酵母,然后直接利用酵母细胞来水解乳糖生成半乳糖与葡萄糖。采用该工程酵母细胞（HCY10）,能在24小时内完全水解50g/L的乳糖,生成半乳糖与葡萄糖。该方法具有高效、简便的优点,能为乳糖的高效水解提供一条新的途径。

利用β-葡萄糖苷酶提高葡萄酒香气的研究进展

葡萄酒中的萜类物质大多以结合态糖苷的形式存在,不易释放,而β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase)是水解葡萄酒中结合态挥发性芳香化合物的关键酶,对葡萄酒香气的提升具有十分重要的作用。然而,由于葡萄醪或葡萄酒中高浓度的葡萄糖、乙醇以及低pH条件对该酶的活性及稳定性产生巨大的抑制或破坏作用,因此其在葡萄酒中的应用受到极大限制。近年来,针对如何提高β-葡萄糖苷酶在葡萄酒复杂生境中的活性及稳定性,研究者们做了大量的工作。本文在阅读大量文献的基础上,对通过β-葡萄糖苷酶产生菌的筛选、酶固定化技术、酿酒酵母细胞表面展示技术以及蛋白质的半理性化设计等不同策略来提高β-葡萄糖苷酶在葡萄酒复杂生境下的活性及稳定性方面的研究进行了综述,在此基础上,对利用β-葡萄糖苷酶来提高葡萄酒香气做了展望。

α-葡萄糖苷酶高效合成低聚异麦芽糖的策略分析

α-葡萄糖苷酶作为工业化生产低聚异麦芽糖(isomaltooligosaccharides,IMOs)的关键酶制剂,因其发挥的提高催化效率和降低生产成本的重要作用,而受到学者的广泛关注。文章综述了α-葡萄糖苷酶的来源、性质、分类和催化机制,分析了α-葡萄糖苷酶高效合成IMOs的策略,并对工业化高效生产IMOs进行了展望,旨在为高效清洁生产IMOs提供参考。

重组酿酒酵母表达幽门螺杆菌VacA蛋白及其免疫原性分析

目的:利用酿酒酵母表面展示技术筛选幽门螺杆菌候选疫苗,并分析其免疫原性。方法:以幽门螺杆菌的空泡型细胞毒素A(vac A)基因作为研究对象,构建重组S.cerevisiae EBY100/pYD1-VacA,通过Western blot、免疫荧光标记和流式细胞仪对S.cerevisiae EBY100/pYD1-VacA进行体外表达分析。以PBS和S.cerevisiae EBY100/pYD1为对照组,S.cerevisiae EBY100/pYD1-VacA为实验组,口服免疫SPF级BALB/c小鼠。通过ELISA分析检测口服免疫后小鼠抗VacA特异性IgG及分泌型IgA效价。结果:VacA抗原蛋白被成功地展示在S.cerevisiae EBY100表面。小鼠经口服免疫S.cerevisiae EBY100/p YD1-VacA后可诱导产生较高的VacA特异性抗体。结论:表面展示型酿酒酵母可以作为幽门螺杆菌候选疫苗的递送载体,与此同时,这也为开发其他细菌或病毒疫苗提供新思路。