基因工程乙肝疫苗研究进展

乙肝病毒 (hepatitisBvirus,HBV)为嗜肝病毒 ,全世界有超过 3亿人受到乙肝病毒的感染。综述近年来乙肝疫苗的最新研究进展 ,并对乙肝疫苗的发展历程 ,应用中出现的问题 ,克服不应答及低应答的策略 。

青少年对重组酵母基因乙肝疫苗的免疫应答

为推动中小学学生或成人的乙肝疫苗接种工作,针对17～18岁的职业高中专业学生进行了重组酵母乙肝疫苗的免疫效果观察,筛选了49人,其中38人为易感者,对其观察乙肝疫苗的免疫效果,结果:(1)用北京四环生物工程制品厂生产的试剂(以下简称北京四环试剂)检测,抗-HBs阳转率为52.63％(20/38);(2)用台湾普生诊断试剂有限公司出售的试剂(以下简称普生试剂)检测,抗-HBs阳转率为100％(37/37丢失 1人);(3)抗-HBs滴度:中滴度17人,占45.95％,高滴度20人,占54.05％,GMT为91.99mIU/ml。国产酵母基因乙肝疫苗(5微克/0.5ml)对青少年免疫效果较好,可以全面推行使用。

CpG-ODN增强乙型肝炎病毒转基因小鼠对重组乙肝疫苗的细胞免疫应答

[目的 ]探讨CpG -ODN作为佐剂对重组乙肝疫苗诱导乙肝病毒转基因小鼠产生细胞免疫应答的影响。[方法 ]用重组干扰素 (rIFNα - 2b)、重组乙肝疫苗 (rHBsvaccine)和重组乙肝疫苗 +CpG -ODN分别免疫HBV转基因小鼠后 ,流式细胞仪检测免疫小鼠的外周血T淋巴细胞亚群 ,ELISA法检测免疫小鼠的外周血IL - 2、IL - 12 (p70 )和IFN -γ的含量 ,MTT法和乳酸脱氢酶法分别检测免疫小鼠的淋巴细胞增殖和杀伤功能。[结果 ]重组乙肝疫苗组CD3+、CD4 +、CD8+细胞在T细胞中所占百分比分别为 (2 5 .0 0 8± 2 .85 2 ) %、(13.6 40± 1.6 16 ) %、(9.989± 1.12 3) %均明显高于对照组 ,(P <0 .0 5 ) ;IL - 2、IL - 12 (p70 )和IFN -γ的含量分别为 (130 4 .2 88± 5 72 .2 12 ) pg/mL、(2 0 3.810± 91.80 7) pg/mL、(86 0 .736± 336 .888)pg/mL均明显高于对照组 ,(P <0 .0 5 ) ;淋巴细胞特异性增殖和杀伤效应与对照组相比均有明显差异 ,(P <0 .0 5 )。疫苗 +CpG -ODN组与疫苗组比较 ,免疫小鼠产生更强的HBV特异性细胞应答 (P <0 .0 5 ) ,且以Th1型细胞免疫应答为主。而干扰素组由于给药次数和剂量等原因 ,与对照组无显著差异。 [结论 ]CpG -ODN作为佐剂可以较好的增强重组乙肝疫苗诱导HBV转基因小鼠产生细胞免疫应答。

用基因重组技术构建可降解淀粉和产生酒精的酵母工程菌

将酵母Ty转座子的δ序列 ,黑曲霉糖化酶cDNA及G418抗性基因neo重组进酵母整合型质粒YIplac12 8获得含LEU2 ,neo双标记基因 ,糖化酶cDNA的高整合型表达载体YIp12 8D 17N ,转化GRF18后获得整合型酵母转化子GRF18(YIp12 8D 17N)糖化酶基因在该菌株获得高效表达 ,产物分泌到胞外。Southern印迹分析证明 ,糖化酶基因已整合进工程菌染色体。GRF18(YIp12 8D 17N)在含 2 0 %可溶性淀粉的培养基中培养 2 4h ,淀粉水解率在98%以上 ,酒精浓度达到 9 5 % (v/v)在 2 5 %淀粉中酒精浓度达到 10 2 %。

酵母中表达基因工程重组蛋白药物的研究进展

本文主要从酵母载体系统的选择、酵母表达宿主的选择、多拷贝菌株的构建、高密度发酵培养酵母细胞、应用酵母系统表达外源基因的研究现状、酵母表达系统的缺陷及对策等几个方面综述了近年来酵母表达体系在基因工程重组蛋白药物开发方面的研究进展。

基因型乙肝疫苗的免疫效果的性别差异研究

探讨基因型乙型肝炎疫苗 (YDV)接种成年男女后的抗 HBs滴度及抗 HBs阳转率变化的性别差异 。

崭露头角的基因工程乙肝疫苗

我国属于乙型肝炎高发地区,乙型肝炎病毒携带者占总人口的10％左右。1985年我国成功研制了血源性乙肝疫苗,多年来对预防乙型肝炎取得了良好的社会效益。但是,血源性乙肝疫苗采用的是血浆为原料,使用血清分离技术制造,而血浆的供给受到限制,且有时亦难以保证血源的质量。 近几年研制成功的基因工程乙肝疫苗,采用基因重组技术,将乙肝病毒的DNA基因与酵母菌整合,经纯化。

基因工程重组酵母植酸酶性质研究

对基因工程重组酵母所产的植酸酶进行分离和纯化 ,并考察纯化酶的酶学性质。该植酸酶酶蛋白分子量为 85 .2kD ;有 2个pH活力峰 :pH 2 .0和 pH 5 .0 ;最适温度为 5 0℃ ;在 3 7℃下以植酸钠为底物的反应初速度为 3 3 .5 μmol/(min·mL) ,米氏常数Km 为 0 .71mmol/L ;Ca2 +对此酶有较强的激活作用 ,Zn2 +、Fe2 +、Cu2 +、Al3+和Fe2 +对其有较强的抑制作用 ,而K+、Na+和Mg2 +对酶活性影响不大。

人重组白蛋白基因在巴斯德毕赤酵母中的高效表达

The yeast Pichia pastoris was transformed by the multi\|copy Pichia expression vector that can express secreted human albumin.The high level expression of cell line was selected after screening.The expression of human recombinant albumin in Pichia pastoris induced by different methods were compared.The retio of secreted human albumin is 80% in total secreted proteins and the expression level reaches as high as is 10g/L.

一株新的重组人源过氧化氢酶基因工程菌的构建和遗传稳定性研究

利用pPICZαA作为新的表达载体和表达宿主酵母Gs115,成功地构建了新的人源过氧化氢酶表达工程菌G13,并考察了新的工程菌G13的遗传稳定性。通过对新的重组菌整合质粒的酶切,PCR鉴定,及SDS-PAGE电泳、单抗dot-blot证实了该重组菌质粒构建正确,可以有效表达重组的人源过氧化氢酶。新的重组酵母菌G13在连续传代24次后,没有发生质粒的丢失现象,表达的过氧化氢酶活力稳定。

不稳定的基因工程酵母生长动力学研究

应用数学模型方法描述重组质粒由于拷贝数的增加以及基因表达产物——乙型肝炎表面抗原在受体细胞内积累造成对Leu^+表型细胞生长的阻遏作用。模拟丢失重组质粒的细胞生长规律,给出其形成后可能的年龄-时间分布。根据这两类不同表型细胞同时生长的轨迹,得到重组质粒丢失频率与Leu^-表型细胞生长的关系。因此,可把发酵过程中基因工程酵母丧现出重组质粒的不稳定归于两种作用:重要的是Leu^+表型细胞分裂时具有不对称的质粒分配,其次是在丰富培养基中这两类不同表型细胞具有不同的生长速率。

产朊假丝酵母(Candida utilis)基因工程研究进展

产朊假丝酵母是生物安全(Generally Recognized as Safe,GRAS)的微生物,也是一种重要的工业微生物。近20年来,随着分子生物学技术的发展,产朊假丝酵母的基因表达系统和基因工程研究及开发应用取得了显著的进展,使得利用该菌表达多种物质成为可能。本文概述了产朊假丝酵母的生物学特点、外源基因表达系统、基因敲除、遗传转化等方面的研究和应用进展。

乙肝疫苗预防接种反应及处理原则

目前我国使用的重组乙型肝炎疫苗（简称乙肝疫苗）是由重组酵母表达的乙型肝炎病毒表面抗原经纯化、加氢氧化铝佐剂制成的基因疫苗。基因疫苗的免疫原性优于血源疫苗,不含人源性物质,无已知或未知致病因子。该疫苗接种后不良反应很少,过敏反应的发生率极低,但个别婴幼儿也会出现一些不良反应,现综述如下。