新疆酸马奶中酵母菌分离鉴定及安全性研究

自然发酵的酸马奶中含有大量的微生物,这些微生物主要是由酵母菌和乳酸菌组成,其中酵母菌在酸马奶发酵的过程中对活性物质增强起到了极为关键的作用。对新疆酸马奶中酵母菌进行分离鉴定,并对酸马奶发酵工艺及安全性进行了研究,为提高酸马奶产品质量及标准化规范化生产奠定基础。

两种分子标识在酵母分子鉴定中的比较

rDNA序列同源性分析是一种通用的酵母分子鉴定方法,26S rDNA D1/D2区域和rDNA内部转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,ITS)是rDNA序列同源性分析中最为常用的两种分子标识。同时使用这两种分子标识对20株分离自水果表面的酵母菌株进行分子鉴定,结果显示19株酵母分离物的鉴定结果相一致,两种分子标识序列在认定酵母种内和种间关系时都拥有足够的差异,能将大部分酵母菌株直接鉴定到种一级水平。

Biolog微生物自动分析系统——酵母菌鉴定操作规程的研究

Biolog微生物自动分析系统是美国Biolog公司研制开发的新型自动化快速微生物鉴定系统,以酵母菌与96孔微平板上多种脱水碳源进行氧化实验和同化实验为基础进行鉴定,将菌体生长所产生的特征性代谢图谱与标准数据库作比对,从而得出鉴定结果。该系统目前已成为国际上酵母菌多相分类鉴定常用的技术手段。文中在总结实践经验的基础上,参阅最新Biolog系统操作手册4·2版和国家微生物资源平台技术规程的统一格式,研究制定了酵母菌鉴定的操作规程,以提高我国Biolog系统对酵母菌的鉴定应用水平。

BD Phoenix^(TM)酵母菌鉴定板对临床分离酵母菌鉴定能力的评估

目的评估BD PhoenixTM酵母菌鉴定板对酵母菌的鉴定能力。方法选取白念珠菌18株,热带念珠菌22株,光滑念珠菌19株,克柔念珠菌8株,近平滑念珠菌20株,新生隐球菌14株,季也蒙念珠菌4株,平常念珠菌1株,葡萄牙念珠菌1株,头状地霉2株,挪威念珠菌1株,链状念珠菌1株,乳酒念珠菌1株,希木龙念珠菌1株,解脂念珠菌3株,皱褶念珠菌1株,菌膜念珠菌3株,共计120株。借助PhoenixTM100全自动微生物鉴定仪,使用BD PhoenixTM酵母菌鉴定板鉴定上述菌株。用真菌通用引物ITS1与ITS4对所有受试菌株的rDNA进行PCR扩增,对PCR产物进行序列测定、分析并作为金标准与BD PhoenixTM酵母菌鉴定板的结果比较,同时使用MALDI-TOF MS质谱分析对试验菌株进行菌种鉴定。结果 BD PhoenixTM酵母菌鉴定板除了对1株挪威念珠菌、1株平常念珠菌、1株解脂念珠菌、1株皱褶念珠菌未能鉴定以及1株链状念珠菌、1株克柔念珠菌、2株菌膜念珠菌、1株解脂念珠菌鉴定错误外其余试验菌株鉴定均正确,鉴定准确率为92.5%。所有鉴定结果均在17 h内获得,而白念珠菌、热带念珠菌、近平滑念珠菌的鉴定时间均小于6 h,并且不受推荐培养基的限制。所有菌株MALDI-TOF MS的鉴定结果与其rDNA ITS序列分析的结果完全一致。结论 BD PhoenixTM酵母菌鉴定板对多数酵母菌能够快速准确地鉴定到种,但对某些少见酵母菌的鉴定能力有待进一步考证。

一株解脂耶氏酵母菌的鉴定及其系统发育树分析

从未发酵猪粪中分离出一株酵母样菌株7B3,用BioMerieux Vitek公司的酵母样生化鉴定卡(yeast biochemical card)鉴定该菌为解脂耶罗维亚酵母。为了进一步确定该菌的分类学地位,测定了其18S rDNA序列,分析了相关菌株的同源性,构建其系统发育树。结果表明,该菌株与Yarrowia Lipolytica M相似度最高。

呼吸科酵母样真菌的分离鉴定及耐药性分析

目的分析我院呼吸科酵母样真菌的耐药情况,为临床治疗真菌提供依据。方法酵母样真菌用科玛嘉显色培养基,按说明书根据不同颜色判断菌种,不能用显色培养基鉴定的菌种用VITEK-AMS全自动微生物鉴定仪、酵母样真菌鉴定卡YBC鉴定,用ROSCO纸片法进行药敏试验,对6种抗真菌药的耐药情况进行回顾性分析和统计。结果酵母样真菌对所试验的6种抗真菌药物中的制霉菌素、5-氟胞嘧啶和两性霉素B,抗菌效果最好,其耐药率分别是0.8%,1.8%和2.0%,其次为氟康唑,其耐药率为7.9%,酮康唑为22.8%,益康唑为26.5%。结论目前真菌感染对抗真菌药物耐药率有不同程度增加。体外抗真菌活性以制霉菌素、5-氟胞嘧啶及两性霉素B最强,是目前治疗真菌感染的首选药物。氟康唑对白色念珠菌有很强的抗菌活性,可治疗白色念珠菌所引起的感染。

外阴阴道假丝酵母菌病菌群鉴定及药敏分析

目的观察外阴阴道假丝酵母菌病（vulvovaginal candidiasis，VVC）致病菌群近年的分布变化和药敏情况。方法对768株假丝酵母菌应用改良沙氏琼脂平培养分离出假丝酵母菌株，采用珠海黑马工程有限公司生产的生物BACT—IST微生物分析系统进行细菌鉴定，该公司生产的IDS-96MIC试剂行药敏试验。结果768株假丝酵母菌中，以白色假丝酵母菌为主，占45．18％；其次为葡萄牙假丝酵母菌，占11．98％。药敏试验中显示，氟胞嘧啶、两性霉素B及制霉菌素敏感性分别是81．25％，76．4％和50．01％，大部分唑类药物的耐药性达55％以上。结论VVC的主要致病菌为白色假丝酵母菌，但已向非白色假丝酵母菌株变迁。氟胞嘧啶、两性霉素B及制霉菌素对假丝酵母菌的敏感性较高，而唑类药物普遍耐药，且耐药性逐年增高，有交叉耐药现象.

浅谈葡萄酒发酵过程中酵母种类的鉴定

在葡萄酒酿造过程中，酵母菌是最重要的一类微生物，它的种群结构及变化决定了葡萄汁发酵的成败，而且对葡萄酒的风味和品质有重要影响。因此，研究葡萄酒发酵过程中酵母菌种类和菌群的动态变化，对在发酵过程中合理调控微生物，发挥各类酵母菌的优点，有很大的积极作用。近年来，随着生物技术的不断进步，分子生物学技术鉴定酵母菌种的方法已逐步取代传统的依靠酵母生理生化特征和形态的鉴定方法。本文主要介绍了WL营养培养基鉴定法和分子生物学鉴定法。

化妆品中酵母菌的鉴定

通过在化妆品中筛选到的一株菌,经过抗性培养基、专属性培养基、3M霉菌和酵母菌测试片和镜检4种方法来鉴定酵母菌,为化妆品以及食品和保健品中酵母菌的鉴定提供简便快速的方法。

新疆葡萄酒自然发酵过程酵母菌的种类和动态变化

利用WL营养琼脂培养基,对葡萄酒自然发酵过程中,不同阶段分离的408株酵母菌进行了初步鉴定。结果表明,供试酵母菌被归入8个属的9个种:酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae、葡萄汁有孢汉逊酵母Hanseniaspora uvarum、季也蒙有孢汉逊酵母Hanseniaspora guilliermondii、东方伊萨酵母Issatchenkia orientalis、毕赤克鲁维酵母Pichia kluyver、膜璞毕赤酵母Pichia membranefaciens、美极梅奇酵母Metschnikowia pulcherrima、红冬孢酵母Rhodosporidium mucilaginos和假丝酵母Candida zemplinina,分别占到了分离总菌株的44.12%、19.36%、8.09%、13.73%、4.66%、3.43%、4.17%、2.21%和0.25%。

解脂亚罗酵母赤藓糖醇发酵过程的研究

从自然界分离得到1株可发酵葡萄糖为赤藓糖醇的酵母菌Y-22。经鉴定,属于解脂亚罗酵母。该酵母菌在高糖条件下转化赤藓糖醇的能力比众多从国内保藏机构获得和自然界分离得到的同种、异种酵母及未鉴定耐渗酵母高很多。在5 m3和50 m3容量的发酵罐上进行发酵试验,对葡萄糖的转化率可以达到47%,赤藓糖醇在96 h内可达150 g/L以上。文中还对赤藓糖醇的分批发酵和流加发酵过程进行了讨论。

蛇龙珠自然发酵过程酵母菌的种类和动态变化

利用WL营养琼脂培养基,对蛇龙珠Carbernet Gernischet葡萄酒自然发酵不同阶段分离的94株酵母菌进行鉴定。结果表明,供试酵母菌属于4个属5个种:酿酒酵母Saccharomyces cerevisiae、葡萄汁有孢汉逊酵母Hanseniaspora uvarum、季也蒙有孢汉逊酵母Hanseniaspora guilliermondii、克鲁维毕赤酵母Pichia kluyver和假丝酵母Candida zemplinin,分别占分离总菌株的68%、1.06%、6.38%、19.15%、5.41%。

SO2和酒精处理对葡萄酒自然发酵酵母菌群的影响

【目的】研究SO2和酒精处理对葡萄酒自然发酵醪液中酵母菌群数量和种类的影响。【方法】分别对葡萄酒自然发酵醪液进行60,80,100 mg/L SO2处理和体积分数5%,10%,15%酒精处理,并分离不同发酵时期葡萄醪液中的酵母菌。应用5.8S-ITS扩增片段的RFLP分析检测技术,结合WL营养琼脂培养基上的菌落形态及颜色,对分离的酵母菌进行鉴定。【结果】无论是SO2处理还是酒精处理,发酵后期优势菌群主要为酿酒酵母;SO2处理主要对SO2敏感的酵母菌群影响较大,同时酵母菌群还受发酵产物酒精的影响,发酵中后期除酿酒酵母外只能分离到少量耐SO2的拜耳接合酵母和贝酵母;酒精处理中,发酵初期主要分离到的是克勒克酵母和假丝酵母菌株,发酵中期分离到的主要是酿酒酵母、隐球酵母和毕赤氏酵母,发酵后期以酿酒酵母为优势菌群。【结论】无论是SO2处理还是酒精处理,启动发酵的主要是非酿酒酵母,维持发酵并最终将发酵进行到最后的主要是较耐SO2和酒精的酿酒酵母。

食用酵母菌生物特性的研究

研究用的酵母菌是在发酵粉中分离纯化而获得。经形态学观察和糖发酵试验初步鉴定将它归属于汉逊酵母属。试验主要从汉逊酵母菌的生长曲线、蛋白质含量、最适生长温度、生物量等几个方面来研究其生物学特性。结果表明：汉逊酵母菌在室温振荡培养36h时达到生长最高峰。温度28℃，转速120r／min恒温振荡培养，在144h内生物量随着时间的增加而增大，在这个时间段后，生物量趋于稳定；培养12h后，胞外蛋白质含量达到最大，为51.32mg/L。温度在25℃～30℃生长良好。

云南可培养酵母菌的生境特异性和多样性

云南植物丰富,一直素有植物王国之称,为了了解云南滇东北地区、北部地区两个不同生态环境下酵母菌的物种多样性和生境特异性。对云南昭通和楚雄的可培养酵母进行了调查。在180份样品中,总共分离得到600株酵母菌,选取菌落有差异的288株菌株进行形态鉴定和分子鉴定,并构建系统发育分析。结果显示,这些菌株归属于58个属,141个种,其中最常见的种类是Candida sp.,占8.88%,其次是Meira sp.(5.92%),Moesziomyces aphidis(4.28%),Hannaella oryzae(3.95%),Curvibasidium cygneicollum(2.96%),Saccharomyces cerevisiae(2.96%),Hanseniaspora uvarum(2.63%),Rhodotorula sp.(2.63%),Vishniacozyma foliicola(1.97%),然而,Meira sp.,Curvibasidium cygneicollum,Farysia acheniorum,Moesziomyces aphidis只在昭通样品中分离得到,而在两地不同生境中酵母类群的组成和丰度主要表现在4个优势酵母属Hannaella属、Saccharomyces属、Hanseniaspora属、Candida属。通过对云南分离到的可培养酵母菌的物种总数及分布,Shannon指数、Chao1指数和Simpson指数,以及两地物种聚类分析和组间差异分析和网络分析表明,两地酵母种类和多样性有差异显著(P<0.02),昭通样品酵母种类明显高于楚雄样品,288株酵母种群中的大多数表现出生境特异性,这意味着低丰度酵母种群更容易受到当地生境条件(物种分类)的影响。

微波杀菌处理杏汁中残留微生物鉴定

杏汁经微波杀菌(控制微波温度67℃,杀菌3次),从杀菌后杏汁中分离鉴定出3株细菌和1株酵母菌。经形态学、生理生化试验初步鉴定,并分别采用16S r DNA和ITS序列鉴定分离的细菌和酵母菌株,结果表明:残存的细菌分别为短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、蜡样芽孢杆菌(Bacillus cereus)和解淀粉芽孢杆菌(Bacillus amyloliquefaciens),残存的酵母菌为毕氏酵母(Pichia),且残留微生物均有耐热、耐微波特性。研究确定了微波处理的残留微生物,为完善杏汁微波杀菌工艺提供理论指导。