前列腺抗原酶促化学发光免疫分析方法学的建立

应用鲁米诺-过氧化氢发光体系建立定量测定血清前列腺特异性抗原含量的酶促化学发光免疫分析方法。该方法测量范围为1.5～80μg/L,灵敏度为0.12μg/L,批内变异<5%,批间变异<15%。回收率为83.8%～118.7%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数为0.999。本方法与免疫放射分析方法的相关方程y=1.07x+0.68,相关系数r=0.97。

游离前列腺特异性抗原酶促化学发光免疫分析方法学的建立

采用双抗体夹心法建立了定量测定血清游离前列腺特异性抗原含量的酶促化学发光免疫分析方法,其中,1株抗总前列腺特异性抗原的单克隆抗体作为包被抗体,另1株抗游离前列腺特异性抗原的单克隆抗体作为标记抗体。总测量范围为0.2^10 ng/mL,灵敏度为0.01 ng/mL,批内变异〈10%,批间变异〈20%。本方法与Monobind游离前列腺特异性抗原化学发光测定试剂盒比对的相关方程为y=0.72x-0.22,相关系数r=0.90。

促黄体生成激素酶促化学发光免疫分析方法的建立

采用双抗体夹心一步检测法和鲁米诺-过氧化氢发光体系建立了血清促黄体生成激素（LH）的酶促化学发光免疫分析方法。结果显示，本方法测量范围为1．5-200IU／L，灵敏度为0．08IU／L，批内变异系数〈9％，批间变异系数〈11％，回收率为96．3％～112．1％，稀释实验测定值与稀释度呈线性相关，相关系数r=0．995。与进口酶促化学发光免疫分析试剂盒测定的临床值进行比较，线性相关方程为y=0．967x＋0．0689，相关系数r=0．975，相关性良好。方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。

一种新型酶促化学发光增强液的发光性能及其在免疫分析中的应用

在辣根过氧化物酶 /鲁米诺 /增强剂 /过氧化氢 (HRP/luminol/enhancer/H2 O2 )增强化学发光体系中 ,加入一系列辅助试剂 ,获得了一种灵敏度高、发光持续稳定、可长期贮存的新型酶促化学发光增强液。该增强液灵敏度为 2 4amol/孔 ,发光半衰期为 4 0min ,工作液在室温可稳定存放 1个月 ,在 37℃下可稳定存放 14d。在此基础上 ,在TSH BASECLEIA和AFPECLEIA上进行了应用。TSH BASE CLEIA测量范围为 0 17～ 35mIU/L ,信噪比大于 5;分析灵敏度为 0 0 4mIU/L ,功能灵敏度为0 0 6mIU/L ;批内变异系数为 2 96 %～ 5 0 5% ,批间变异系数为 4 0 1%～ 7 56 % ;回收率为 10 1%～119% ;稀释实验相关方程为y =4 4.6 50x + 0 .352 ,r =0 .996 ;与BayerACS :180系统进行方法学比较 ,相关方程为 y=0 .889x - 0 .351,r =0 .984。AFPECLEIA测量范围为 5～ 2 0 0 0ng/mL ,信噪比大于 4。动力学实验表明 ,加入发光液之后 15min测量 ,结果准确可靠。

促卵泡激素酶促化学发光免疫分析试剂盒的研制

采用双抗体夹心法建立了测定人血清FSH酶促化学发光免疫分析方法。本方法的测量范围为1.5～100 IU/L,灵敏度为0.36 IU/L,批内变异系数为1.0%～1.6%,批间变异系数为4.0%～4.6%,回收率为90.6%～117.8%,稀释实验测定值与稀释度呈线性相关,相关系数r=0.990。与TSH的交叉率<0.23%,与LH和HCG的交叉率分别<0.16%和<0.27%。与贝克曼化学发光免疫分析方法测定的临床值进行比较,相关性方程为y=0.85x-0.03,相关系数r=0.954。与免疫放射分析试剂盒进行比较,相关性方程为y=0.97x+5.29,相关系数r=0.965,与放射免疫分析试剂盒,进行比较,相关性方程为y=0.95x-3.82,相关系数r=0.954。方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。

CA125酶促化学发光免疫分析方法的建立

CA125是细胞表面的一种高分子糖蛋白。对卵巢癌患者血清中CA125浓度进行测量，结果显示80％的上皮癌患者血清中的CA125含量有所升高，而健康女性中CA125升高比例只有不到1％，所以利用CA125浓度值来判断卵巢癌的发生具有重要的临床意义。酶促化学发光免疫分析方法继承了酶联免疫分析的特点，又普遍具有高灵敏度、快速检测等优点，已被医院大量使用。利用双抗体夹心法建立CA125酶促化学发光免疫分析方法具有重要意义。

人促甲状腺激素酶促化学发光免疫分析方法的建立

采用双抗体夹心法建立了定量检测人血清中促甲状腺激素含量的酶促化学发光免疫分析方法，其中，1株抗TSH抗体包被96孔微孔板，另1株与辣根过氧化物酶结合形成酶标记物，鲁米诺-过氧化氢作为发光底物。该方法测量范围为0.1～100 mIU/L ，分析灵敏度为0.04 mIU/L ，批内、批间变异系数分别为3.98％～6.48％和4.61％～13.1％，回收率为95.8％～117.4％，高浓度 TSH样品系列倍比稀释后，测定值与稀释度呈线性相关，相关系数大于0.99。与LH的交叉率＜1.62％，与FSH和 HCG的交叉率分别＜0.05％和＜0.02％。与罗氏化学发光免疫分析方法测定的临床值进行比较，相关性方程为 y＝1.10 x -0.207，相关系数 r＝0.969。与免疫放射分析试剂盒进行比较，相关性方程为 y＝1.00 x＋0.191，相关系数 r＝0.965。本方法操作简便、快速，适用于临床检测和科研应用。

癌抗原15-3酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的建立癌抗原15-3（CA15-3）酶促化学发光免疫分析方法。方法利用双抗体夹心法建立CA15-3化学发光检测体系,分别对该体系的最低检测限、线性、分析特异性、准确度和精密度进行评估,并与进口全自动化学发光检测结果进行对比。结果本方法灵敏度为0.26 U/m L,线性范围为0-300 U/m L,与CEA和CA125无交叉反应,添加回收率在97.0%-105.6%之间,分析内与分析间CV均小于10%,与进口全自动化学发光试剂同时检测160份样本的CA15-3浓度,检测结果的线性相关系数为0.987。结论成功建立了CA15-3酶促化学发光免疫分析方法。该方法灵敏度高、重复性好,在临床应用中可替代进口化学发光检测试剂。

促甲状腺激素生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的建立一种低成本、高灵敏度的检测血清促甲状腺激素(TSH)的生物素-亲和素酶促化学发光免疫分析方法。方法引入生物素-亲和素放大系统,一株抗TSH的单克隆抗体包被微孔板,另一株标记生物素,辣根过氧化物酶标记链亲和素,鲁米诺作为发光底物,采用夹心法,建立TSH酶促化学发光免疫分析方法。结果方法分析灵敏度为0.01mIU/L,批内变异系数为2.01%～5.40%,批间变异系数为2.96%～17.9%,回收率为90.6%～114.4%,高值促甲状腺激素血清样品经系列倍比稀释后,测定值与稀释度呈线性关系,相关系数大于0.99,与原子高科TSH免疫放射分析方法和罗氏电化学发光分析法的测定值具有良好的相关性。结论生物素-亲和素TSH酶促化学发光免疫分析方法具有成本低、灵敏度高、特异性高和稳定性好的特点,具有广阔的应用前景。

江苏兴化地区血清肿瘤标志物CEA、AFP、CA125微粒子酶促化学发光法检测的参考区间研究

目的:研究分析江苏兴化地区血清肿瘤标志物癌胚抗原(CEA)、甲胎蛋白(AFP)、糖类抗原125(CA125)是否与性别、年龄存在差异,建立本地区本实验室血清CEA、AFP、CA125的参考区间。方法:选取2017年1月~2017年12月兴化市人民医院体检中心健康体检者为研究对象。采用贝克曼库尔特Unicel DXI 800全自动微粒子酶促化学发光免疫分析系统检测血清CEA、AFP、CA125水平。对检测结果进行统计学分析,建立各检测项目的参考范围。结果:血清总体CEA参考区间为:男性0~4.92 ng/ml;女性0~3.56 ng/ml。血清总体AFP参考区间为:男性0~6.02 ng/ml;女性0~5.57 ng/ml。血清总体CA125参考区间为:男0~22.2 U/ml;女性0~27.64 U/ml。结论:江苏兴化地区血清肿瘤标志物CEA、AFP、CA125含量在不同性别和年龄组间存在差异,必须建立相应的参考区间,为临床诊断、治疗和预后判断提供科学准确的依据。

抗苗勒氏管激素的生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶酶促化学发光免疫分析方法的建立

目的:抗苗勒氏管激素(AMH)在评价卵巢储备功能方面具有更高的准确性,将其用于青春期、生育期女性的生育指导时具有很好的临床价值。目前对于AMH的检测,临床上常采用的是酶联免疫分析法,但存在灵敏度低、检测范围窄等缺点,而影响AMH实际水平的测定,使得对病情的预估不准确对疾病的治疗产生影响。因此,建立一种低成本、高敏感度的检测AMH水平的方法尤为重要。方法:利用生物素-亲和素放大系统,将一组抗AMH的第一抗体包被微孔板,同时用生物素标记第二抗体,与第一抗体-抗原复合物结合之后,再与生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶结合物结合,加入发光底物,建立AMH酶促化学发光免疫分析方法,同时对这一体系的线性、灵敏度、特异度、稳定性、回收率等参数进行检测,并与常规ELISA法进行相比检测AMH浓度。结果:线性检测范围为(0.42～50.00)U/ml,该体系稳定性好,灵敏度0.42U/ml,批内差异小于10.0%,批间差异小于10.0%,与常规ELISA对比差异有统计学意义。结论:AMH的生物素-链霉亲和素-辣根过氧化物酶酶促化学发光免疫分析易于操作、灵敏度高、价格低廉,适用于临床检测。

酶促化学发光免疫分析检测梅毒抗体的临床应用评价

目的以梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)为标准参考方法,采用ROC曲线分析,判断酶促化学发光免疫分析(CLIA)对梅毒抗体检测的应用价值。方法回顾性分析218例CLIA检测梅毒抗体阳性血清及100例阴性血清及其与TPPA结果进行比对,采用SPSS19.0统计软件进行ROC曲线分析。结果 ROC曲线分析曲线下面积0.942,在S/CO=7.22时,CLIA检测梅毒抗体的灵敏度96%,特异性88.2%。结论 CLIA检测梅毒抗体具有较好的灵敏度与特异性,适用于输血或手术前的大批量筛查。

光激化学发光法定量测定AFP和CEA的性能评价

目的探讨光激化学发光法(LiCA)和酶促化学发光法测定甲胎蛋白(AFP)和癌胚抗原(CEA)结果的可比性,评估LiCA AFP和CEA检测试剂的分析性能。方法依据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)和《体外诊断试剂临床研究指导原则》,评估LiCA AFP和CEA检测试剂的分析灵敏度、不精密度和线性;分别用2种系统定量检测血清AFP(406例)和CEA(442例),对结果进行统计学分析。结果 LiCA AFP和CEA检测试剂分析灵敏度分别为0.112和0.05 ng/mL;批内变异系数(CV)分别为4.32%和4.56%;批间CV分别为5.89%和6.47%;线性范围分别为2.6～950.2和1.2～862.6 ng/mL。与酶促化学发光法测定AFP和CEA的相关系数(r)均>0.99。结论 LiCA检测AFP和CEA具有较好的分析性能,与酶促化学发光法高度相关,能满足临床检测要求。

抗肌红蛋白单克隆抗体的制备与鉴定及其初步应用

目的制备和鉴定抗肌红蛋白（Mb）单克隆抗体,为人肌红蛋白检测试剂的研制奠定基础。方法用人肌红蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,采用杂交瘤技术进行细胞融合,用ELISA方法筛选,有限稀释法进行克隆化培养阳性杂交瘤细胞株。ELISA法测定小鼠腹水滴度,CLIA法对抗体进行配对实验与特异性鉴定。结果筛选培养出9株分泌抗肌红蛋白单克隆抗体的杂交瘤细胞株,腹水滴度为1∶5×104~1∶2×105。通过配对实验,有5株抗体6种组合可以成功配对。这5株抗体的亲和常数为6.46×108~3.68×109L/mol。用5株抗体所建立的6种化学免疫分析方法与人Hb交叉反应率为7.434×10-3%~2.904×10-2%,与人ALB交叉反应率为4.980×10-7%~3.830×10-5%。用Mb17B6与Mb21E8两株抗体建立的CLIA标准曲线的线性系数为0.997,灵敏度为6.02ng/m L。结论成功制备了可以应用于免疫分析的抗肌红蛋白单克隆抗体。