基于酶促合成的非天然色氨酸衍生物生化合成研究

色氨酸是生活组成的基本氨基酸之一,是很多非天然色氨酸衍生物的关键。这类衍生物的生物活性极好,在药物开发和生物技术中发挥着重要作用。但传统的化合物生产方法存在许多问题 包括低效率、扩展成本高、环境也受影响。基于酶的生物催化法,持续性和高效是其明显特点,非天然色氨酸衍生物的生产从化学试验室转移到了生物实践。我们首先通过酶促合成,生成了一系列非天然色氨酸衍生物。紧接着,我们利用对分子动力学的理解,优化了酶促反应参数,以促进更高产量的非天然色氨酸衍生物生产。最后,我们证明了这些非天然色氨酸衍生物具有丰富的生物活性,并可以作为生物工程应用的有用资源。本研究结果为非天然色氨酸衍生物的生物工程生产提供了新的策略和见解,为蛋白质工程、药物发现和生物催化提供了有益的参考。

α－葡萄糖基－甜菊糖的酶促合成反应研究（Ⅰ）

研究了萄萄糖基转移酶ＧＴ－１催化甜菊糖转化为α－葡萄糖基－甜菊糖反应的各种影响因素。实验结果表明，甜菊糖的酶促转化到达一定程度后，继续增大酶和淀粉用量及延长反应时间，对转化结果没有太多改善。经过处理后。

酶促合成茶黄素的茶鲜叶酶源筛选

通过对不同季节、不同采摘标准的20个茶树品种鲜叶的多酚氧化酶(PPO)活性及其同工酶分析,筛选出了3种PPO活性较高的茶鲜叶原料,然后以其匀浆液以及在匀浆液中添加速溶绿茶的方法,以催化速溶绿茶酶促合成茶黄素的效率为标准筛选了酶促合成茶黄素的茶鲜叶酶源。结果表明,各茶树品种茶鲜叶PPO活性以夏季一芽二叶较高,酶活性较高的3个品种依次为政和大白茶、福云6号及桃源大叶;不同品种茶鲜叶的PPO同工酶在谱带数目、迁移率和谱带染色深浅3个方面有差异,20个品种有2条相同的同工酶带,其Rf值分别为0.27和0.53,政和大白茶、桃源大叶、福云6号均有5条明显的同工酶带,且以政和大白茶的谱带染色最深;单位质量的政和大白茶鲜叶匀浆液自身酶促合成茶黄素的量高于桃源大叶与福云六号;参加酶促反应合成茶黄素的儿茶素主要为EC、EGCG和ECG;添加速溶绿茶作为底物合成茶黄素的量远高于茶鲜叶自身酶促合成茶黄素的量,其中政和大白茶反应体系中茶黄素的质量浓度达212.01mg/L,为自身酶促合成茶黄素质量浓度(39.05mg/L)的5.43倍。

毛栓菌多酚氧化酶酶学性质及茶黄素的酶促合成研究

研究从毛栓菌中分离得到的多酚氧化酶（PPO）用于茶黄素的体外氧化制备。结果表明毛栓菌胞外PPO较适的反应温度范围在28—36℃之间；最适pH值为5．2；恒温反应30min内均表现出较高的活性和稳定性；50％的硫酸铵可以沉淀粗酶液中96．0％的PPO。将毛栓菌PPO加入到儿茶素反应液中进行双液相反应，可得到10．19％的茶黄素，与茶鲜叶来源的PPO相比，毛栓菌PPO制备茶黄素的总含量偏低，但其中TF-3-G的比例较高，达到总茶黄素的68．10％，占脂型茶黄素总量的92．08％。

酶促反应合成糖脂化合物

对糖脂化合物的酶促合成研究进行了总结,其中包括有机相中和无溶剂条件下的糖脂酶促合成。

EGCG甲基化衍生物酶促合成的反应条件研究

以EGCG-O-甲基转移酶催化EGCG生成EGCG3′′Me、EGCG4′′Me和EGCG3′Me等3种主要的EGCG甲基化衍生物的生成量为主要指标,考察了EGCG甲基化衍生物酶促合成的反应条件。结果表明,EGCG甲基化衍生物的酶促合成最佳反应条件为:温度35℃,pH7.5,DTT和Mg2+的浓度为2 mmol/L;在该反应条件下,反应体系中EGCG3′′Me、EGCG4′′Me以及EGCG3′Me的生成量分别可达到386.39μg/mL、23.40μg/mL和107.01μg/mL。

酶促合成全氟辛酸半乳糖脂

首次报道了酶促合成含氟糖脂。在IM-60脂肪酸催化下以85％产率得到了全氟辛酸半乳糖脂。

短小杆菌酶促合成二肽甜味剂Aspartame

研究多种因素对短小杆菌酶催化Ｌ－天冬氨酸（Ｌ－Ａｓｐ）和Ｌ－苯丙氨酸甲酯（Ｌ－ＰｈｅＯＭｅ）合成二肽甜味剂Ａｓｐａｒｔａｍｅ能力的影响。结果表明，反应最适ｐＨ为６．０，最适温度为４０℃，反应１０ｈ，催化能力为０．４７５ｇＡＰＭ／ｇ菌体，产率８０．５％，收率８１．０５％。

鲜切果蔬乙烯生物合成与酶促褐变的研究进展

对鲜切果蔬重要的生理变化——果蔬伤乙烯产生和褐变机理研究进行综述,详细介绍乙烯生物合成及其调节、褐变反应机理及其相关酶活性变化的研究进展,并对它们之间的相互作用进行一定的探讨。

酶促反应合成蔗糖棕榈酸酯的研究

讨论了以Novozym 4 35脂肪酶为催化剂 ,以蔗糖和棕榈酸为底物的糖酯合成反应及其影响因素。考察了在丙二醇和正己烷存在下 ,底物酸糖摩尔比、含水量、温度、脂肪酶浓度、时间以及摇床速度对转化率的影响。实验结果表明 ,底物棕榈酸与蔗糖的摩尔比为 1 2∶1 0、含水量为 4 % ,反应温度为 6 5℃、脂肪酶浓度为棕榈酸质量的 4 %、反应时间为 4 5h、摇床速度为 2 0 0r/min时 ,棕榈酸的转化率可达到 86 94 %。

离子液体中酶促转酯化合成咖啡酸苯乙酯的新工艺

为提高抗肿瘤活性化合物咖啡酸苯乙酯的生物合成效率,建立离子液体中酶促转酯化合成新工艺.文中以咖啡酸甲酯和苯乙醇为原料,以脂肪酶和离子液体分别作为催化剂和反应介质,以咖啡酸苯乙酯得率为指标,考察了离子液体、脂肪酶、反应温度、底物摩尔比和酶用量等对咖啡酸苯乙酯得率的影响.结果表明:Novozym 435和[Bmim][Tf2N]分别为最佳的催化剂和反应介质;当反应温度90℃、醇酯摩尔比20∶1、酶酯质量比10∶1时,转酯化反应24 h,咖啡酸苯乙酯得率达66.40%.因此,离子液体中酶促转酯化合成咖啡酸苯乙酯相比直接酯化合成法得率高,耗时短.

新型抗糖尿病药物那格列奈的化学酶促合成

以 4 异丙基苯甲醇为原料 ,对治疗Ⅱ型糖尿病新药那格列奈进行化学 酶促合成。采用两种不同的路线合成那格列奈 ,总收率分别为 18%和 2 9%。实验表明 :经由酶法水解反应的途径具有收率较高、反应条件温和等特点 ,关键中间体及最终化合物的结构经元素分析、质谱、核磁共振氢谱及碳谱得到确证。

化学与酶促相结合合成并克隆核糖体失活蛋白Gelonin基因

利用已知 Gelonin的氨基酸序列 ,逆向推算出整个基因的碱基序列 ,根据 E.coli的密码子偏爱性和后续基因克隆的需要 ,通过沉默突变设计相应的酶切位点和碱基序列 ,将整个基因分为四段 ,每个片段约1 75～ 2 2 0 bp,每一个片段中的互补链从 5′末端用化学合成 1 0 0～ 1 2 0的碱基单链 ,其中两个链的 3′末端有 2 0个互补碱基 .利用 T4 DNA聚合酶酶促添补成双链 DNA,用分子克隆技术 ,分别构建重组子 ,然后再构建成含整个 Gelonin基因的表达载体 p ET-gel进行表达 ,经诱导后 ,获得了一个 2 80 0 0的重组蛋白 。

单模聚焦微波辐射酶促合成PLA-PEG-PLA三嵌段共聚物

采用Discover微波精确有机合成系统及其单模聚焦微波辐射技术与空压气体同步冷却技术,分别以脂肪酶和辛酸亚锡为催化剂,聚乙二醇(PEG)为大分子引发剂引发消旋丙交酯(D,L-LA)开环聚合制备PLA-PEG-PLA共聚物,通过正交实验研究了功率、催化剂种类和用量、时间和温度对共聚物产率的影响,确定了最佳合成条件。在此基础上,改变n(D,L-LA)/n(PEG)投料比制备了不同组成的PLA-PEG-PLA共聚物,采用IR、1 H NMR、GPC和表面接触角测定对共聚物进行了表征。结果表明,在微波作用下,两种催化剂均可催化体系反应得到共聚物,但脂肪酶的催化效率较低,对应共聚物的分子量不高;原料配比对共聚物的组成与性能有显著影响,随n(D,L-LA)/n(PEG)值增大,共聚物的分子量增大;由于引入了亲水性的聚乙二醇链段,共聚物的亲水性明显优于单一的PLA材料。

糖酯酶促合成及抗真菌活性的初步研究

研究了糖酯对食品中腐败真菌的抗菌作用。以脂肪酶作为催化剂,采用丙酮-分子筛体系进行反应,经硅胶柱层析法分离纯化制备得到糖酯。分别测定几种糖酯在不同pH值条件下对草酸青霉、塔宾曲霉、卷枝毛霉和黑根霉的抗菌效果。结果表明,果糖月桂酸酯对草酸青霉和塔宾曲霉的抗菌作用最强,并随浓度的增大,其抗真菌活性也随之增强。果糖月桂酸酯除对供试真菌的菌落直径大小有影响外,还影响到了菌落薄厚和产色素情况,其抗菌活性受pH值影响较大,在中性条件下的抗真菌活性低于酸性和碱性条件。

酶促合成鱼油多烯脂肪酸维生素E酯的研究

以维生素E和鱼油为原料制备的ω－3PUFA为底物，对脂肪酸Lipozmpe酶促合成鱼油多烯脂肪酸维生素E酯的反应条件进行了研究。结果表明：在正乙烷溶剂反应体系中，当底物质量分数配比（VE／PUFA）为2：1时，37℃下搅拌速率为200r／min，加入4A分子筛，反应4h，酯合成转化率可达78．50％。

糖酯酶促合成转化率的影响因素分析

糖酯是典型的非离子型生物表面活性剂,具有多种用途和功能特性,广泛应用于食品、医药和化妆品等领域。酶促合成的糖酯较化学合成的具有更安全、更好的应用前景。为指导糖酯酶促合成工艺的优化,本文论述了反应器、反应体系、水分含量、反应温度、底物和酶等主要因素对糖酯酶促合成转化率的影响。

磷酸肌酸钠酶促合成法的优势探讨

磷酸肌酸是存在于脊椎动物体内的一种小分子生物活性物质，主要存在于心、脑、肾、视网膜、精细胞和神经末梢等高耗能细胞中．在细胞的能量代谢中发挥重要作用，既是能量最直接的供给物，又是能量在细胞内转移的载体。磷酸肌酸于1927年被发现，但对它生理功能的了解却花了约50年时间。在多年的深入研究后，人们才了解到这一药物的许多生理功能：首先它是高耗能细胞胞内ATP浓度恒定的“缓冲剂”。高耗能细胞是指肌肉、心肌、脑、视网膜、肾和精子等器官或细胞。这些器官或细胞的共同特点是，在生命活动过程中需消耗大量ATP，所耗ATP的补充要靠胞内的磷酸肌酸来转化。

有机相酶促合成阿魏酸糖酯

利用酶促方法合成阿魏酸葡糖酯,对酶和有机溶剂进行了比较和筛选,并对影响阿魏酸葡糖酯产率的因素(酶量、反应时间、反应温度、底物比)进行了研究。结果表明,葡萄糖和阿魏酸乙烯酯(摩尔比4∶1)分别加入到体积比2∶1的无水吡啶和叔丁醇中,20 g/L Novozym 435脂肪酶,在220 r/min的空气振荡器中50℃反应72 h,产率能达到80.9%。

鱿鱼皮酶促水解液Maillard反应合成肉类香味料的研究

研究以鱿鱼皮酶水解液为基料结合其它前体物质进行Maillard反应 ,产生肉类香味料。研究结果表明 ,在经胰蛋白酶水解 (水解度为 2 0 % )后的水解液中添加 0 .5 %L -半胱氨酸盐酸盐、3%食盐、0 .5 %VB1、1.875 %葡萄糖、0 .5 %Vc等物质后于 12 0℃、80min、pH6 .