拟除虫菊酯类杀虫剂的酶促降解

测定了降解菌Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓｓｐ．ＹＦ１１粗酶液对拟除虫菊酯杀虫剂的降解性能．粗酶液降解杀灭菊酯、甲氰菊酯、氯氰菊酯、溴氰菊酯、氯菊酯、三氟氯氰菊酯的最适ｐＨ分别为８．０、８．５、８．０、８．０、９．０、７．５；米氏常数分别为４１．４、１３６．８、６５．４、２２２．８、５．２、８．６７ｎｍｏｌ／ｍｌ；最适温度为３２．５℃．该粗酶液在ｐＨ５．０—１０．５均具有降解活性．

真菌WZ-Ⅰ对有机磷杀虫剂毒死蜱的酶促降解

从高效降解真菌镰孢霉属WZ-Ⅰ(Fusarium LK.ex Fx)中提取了降解酶,研究了该降解酶的分离条件及对毒死蜱的降解特性,研究表明,其胞内酶对毒死蜱的降解率高达60.8%,细胞碎片对毒死蜱的降解率为48%,但由(NH4)2SO4沉淀提取的胞外酶液对毒死蜱的降解率仅为11.3%,经8次非诱导条件下培养提取粗酶液,酶活力损失较少,判断WZ-Ⅰ菌株的毒死蜱降解酶为胞内酶且属于组成酶.以牛血清白蛋白为标准蛋白测得粗提酶中可溶性蛋白的含量为3.36mg·mL-1;该酶对毒死蜱的酶促降解最适pH为6.8,在pH 6.0～9.0之间都有较高的活性;最适温度为40℃,在实验温度范围(20～50℃)内该降解酶均具有较好的降解活性,但在55℃时,酶活迅速降低,降低到最高酶活力的41%.测得粗提酶中其米氏常数Km为1.049 26mmol·L-1,vmax为0.253 5μmol·(mg·min)-1.研究结果表明该酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,对热和pH均具有较好的耐受力,高效降解真菌WZ-Ⅰ所产生的胞内酶对毒死蜱具有较好的降解效果.

杀灭菊酯的微生物降解及酶促降解

测定了降解菌ＹＦ１１及其胞内酶对杀灭菊酯的降解特性．在纯培养系统中，菌量为ＯＤ４１５ｎｍ０．２０时，ＹＦ１１对大于３０ｍｇ／Ｌ的杀灭菊酯的降解呈零级动力学特征，浓度为３０－１００ｍｇ／Ｌ时，降解速率为１．８７６—２．１２４ｍｇ／（Ｌｈ）；浓度大于２００ｍｇ／Ｌ的杀灭菊酯对降解菌ＹＦ１１的降解产生抑制作用．降解速率与菌量近似成正比关系；１０ｍｇ／Ｌ杀灭菊酯的降解曲线呈一级动力学特征．从ＹＦ１１提取的粗酶液在３２．５℃、ｐＨ８．０时对杀灭菊酯显示最大的降解活性，其最大降解速率为２１１．８ｎｍｏｌ／（ｍｉｎｍｇ蛋白）、米氏常数（Ｋｍ）为４１．

久效磷降解菌的分离及其酶促降解特性研究

从某农药厂废水处理池的污泥中分离到1株久效磷高效降解菌株M-1,经过对其形态特征、生理生化、以及16S rDNA序列分析,该菌株初步鉴定为Paracoccus sp..M-1能以久效磷作为唯一碳源生长,24 h对100 mg.L-1久效磷的降解效率为92.47%.久效磷降解酶定域表达试验表明该酶为胞内酶,组成表达.久效磷酶促降解的最适反应pH为8.0,最适反应温度为25℃;其米氏常数(Km)为0.29μmol.mL-1,最大降解速率(Vmax)为682.12μmol.(min.mg)-1.久效磷降解酶热稳定性差,碱性条件下能够保持较高降解活性.

邻苯二甲酸二(2-乙基己基)酯酶促降解性的研究

从处理石化厂废水的活性污泥中分离出一株邻苯二甲酸酯降解菌FS1(PseudomonasfluorescensFS1) ,测定了P .fluo rescensFS1的邻苯二甲酸酯降解酶对邻苯二甲酸二 (2 乙基己基 )酯 (DEHP)的降解特性 .P .fluorescensFS1细胞中的颗粒部分、溶液部分对DEHP都具有降解作用 ,初步认为P .fluorescensFS1降解酶属胞内酶 .P .fluorescensFS1降解酶对DEHP的最适酸度为 pH 6 .5— 8.0 ,温度为 2 5— 35℃ ,米氏常数Km为 190 .48nmol/mL .在好氧条件下 ,DEHP与P .fluorescensFS1降解酯酶作用 ,形成邻苯二甲酸单酯和邻苯二甲酸后 ,可进一步降解成苯甲酸、对羟基苯甲酸 ,最终转化为CO2 和H2

一硫代磷酸酯杀虫剂的酶促降解

从降解菌ＹＦ１１中提取了降解酶并测定了该降解酶对对硫磷、甲基对硫磷和杀螟松的降解特性．对硫磷和甲基对硫磷酶促降解的最适ｐＨ均为８．０，杀螟松的最适ｐＨ为８．５，最适温度为３２．５℃．该降解酶对对硫磷、甲基对硫磷和杀螟松的米氏常数分别为１８７．２、２０５．５和２１２．

蒽和菲的酶促降解条件及动力学特征

研究了蒽和菲酶促降解的最佳反应条件及其动力学特性.结果表明,利用黄杆菌FCN2产生的胞内酶降解蒽、菲时的最佳pH为6,而且在弱酸性介质中胞内酶的活性较高;在30℃—35℃之间胞内酶能保持较好的降解活性,32℃时胞内酶活性最高.对蒽和菲酶促降解的米氏常数分别为3×10-4mol.l-1和4×10-4mol.l-1,相同实验条件下,对蒽降解的最大反应速率为2×10-6mol.l-1.min-1,对菲的最大反应速率为1×10-6mol.l-1.min?1.酶促降解蒽的反应级数接近于0.93,表观速率常数的对数lgk为-1.86,而降解菲的反应级数接近于0.76,表观速率常数的对数lgk为-2.05.

细菌HB-5对除草剂莠去津的酶促降解研究

研究了从高效降解细菌HB-5（Arthrobacter）中提取的降解酶的分离条件及酶对莠去津的降解性能．研究证明，对莠去津的降解主要是胞内酶在起作用．从高效降解菌HB-5中提取到的降解酶。在不含有莠去津的培养基中连续转接7次，会逐渐丧失对莠去津的降解代谢活性，由此判断该降解酶不是组成酶，而是诱导酶．以牛血清白蛋白为标准蛋白测得粗提酶中可溶性蛋白含量为0．65mg·mL^-1；在pH8．0～9．5之间，酶活力均能保持在最高酶活力的89％以上，该酶降解莠去津的最适pH为8．5；在25～45℃的温度范围内能保持较好的降解活性，最适温度为35℃；进一步研究发现，该酶具有较好的热稳定性和pH稳定性，暴露在温度30—40％，pH6．0—9．0的条件下2h仍能保持较高的酶活力；该酶与底物莠去津结合力强，对莠去津具有较好的降解效果，其米氏常数Km为0．7034mmol·L^-1，最大降解速率为0．1863μmol·mg^-1·min^-1．

正十六烷微生物降解酶的定域和酶促降解性

以正十六烷为研究对象,通过室内实验,利用细胞静息技术提取了2株菌种的胞外酶、膜周酶及膜内酶对石油烃类污染物质的微生物降解酶定域,并研究了菌株受环境影响的产酶条件和酶的一般性质.结果发现：蜡状芽孢杆菌DQ01能降解正十六烷的关键酶位于膜周和膜内,芽孢杆菌DQ02降解正十六烷的关键酶是胞外酶和膜内酶.通过GC-MS对代谢产物进行测定发现,关键酶对十六烷的代谢途径是常见的单末端氧化.2株菌种产酶的最佳环境条件：ρ（正十六烷）为100 mg/L,c（鼠李糖脂）为2 mmol/L.另外,关键酶在pH为6.5-8.0的环境中活性较高,在pH为7.0左右时的活性最高.酶促降解性的最适温度为30℃.

粪产碱杆菌ZWS11菌株对烟嘧磺隆的酶促降解特性

为明确粪产碱杆菌Alcaligenes faecalis ZWS11菌株对烟嘧磺隆的酶促降解特性,采用丙酮沉淀、超声波破碎和高速离心等方法,提取制备了ZWS11菌株的胞外和胞内粗酶液以及菌体碎片悬浮液,并分别测定了其酶活力。结果表明：当V（菌体发酵液）：V（丙酮）=1：3时提取到的胞外粗酶液具有较高的酶活力;胞外粗酶液、胞内粗酶液和菌体碎片悬浮液对24.9μmol/L烟嘧磺隆的平均降解率分别为87.4%、16.9%和17.4%,胞外粗酶液的降解能力与胞内粗酶液或菌体碎片悬浮液相比差异显著（P〈0.05）,由此确定对烟嘧磺隆起降解作用的酶属于胞外酶。最适降解条件研究表明：该降解酶的酶促反应适宜温度为35℃,较适p H值为6.0,反应时间为30 min,在此条件下其对烟嘧磺隆的降解率在80%以上。此外,该降解酶在35~70℃、p H值4.0~9.0范围内均能够保持较高的酶活力,对烟嘧磺隆的降解率均在60%以上,表明该降解酶具有较好的热稳定性和酸碱稳定性。加入不同浓度十二烷基硫酸钠（SDS）和苯甲基磺酰氟（PMSF）,对该降解酶的活力表现出了不同程度的抑制作用。研究结果可为烟嘧磺隆降解酶制剂的规模化生产及被烟嘧磺隆污染土壤的生物修复提供科学依据。

恶臭假单胞菌XP12对拟除虫菊酯类农药的酶促降解特性及其应用研究

试验选用使用量较大、毒性较强、不易自然降解的高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氟氰菊酯作为参试农药,对一株能高效降解拟除虫菊酯类农药的恶臭假单胞菌XP12进行深入的研究,以期了解该菌株在拟除虫菊酯类农药的生物降解体系中酶的分布特征、酶促降解的动力学特征。结果表明:对拟除虫菊酯类农药起催化作用的酶属于组成型胞内酶,反应pH值为6.5～8.0时,降解酶对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氟氰菊酯的降解率都在70%左右,最适反应pH值为7.5;反应温度在25～40℃时,降解率在70%以上,最适反应温度为30℃。在最适反应pH和温度条件下,降解酶粗酶液对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氟氰菊酯的Km分别为42.78、50.64和77.90 nmol/mL,Vmax分别为12.05、10.31和16.39 nmol/min。粗酶液在叶类蔬菜上拟除虫菊酯类农药的降解也有明显效果,对高效氯氰菊酯、溴氰菊酯和高效氯氟氰菊酯的降解率分别为93.3%、85.2%、83.5%。

农药阿维菌素酶促降解的初步研究

从受阿维菌素长期污染土壤中分离到一株高效降解菌株,研究了其最适产酶条件:培养温度35℃,培养液起始pH值7.0,培养时间96h, Hg2+对该菌株产酶有显著的抑制作用.从该降解菌中提取的粗酶液在pH值7.5和37.5℃时显示最大的降解活性,其米氏常数(Km)为6.78nmol/mL,最大降解速率为81.5nmol/(minmg).

金属离子对多环芳烃酶促降解的影响作用

采用超声波细胞破碎仪破碎获得胞内酶、紫外分光光度法测定多环芳烃含量的方法研究了黄杆菌FCN2产生的胞内酶对多环芳烃蒽、菲、芘的酶促降解作用并对影响酶促降解的主要条件(pH、温度、金属离子的激活作用)进行了优化。研究结果表明:(1)对影响多环芳烃酶促降解的条件进行了优化。当pH为6、温度为32℃时,胞内酶粗酶液对多环芳烃蒽、菲、芘的降解效果最好。(2)在pH为6、最佳温度为32℃时,研究了Ca2+、Mg2+、Mn2+、Fe3+、Fe2+、Cu2+6种金属离子对胞内酶粗酶液降解活性的影响作用。研究结果表明,Ca2+、Cu2+两种金属离子对蒽、菲、芘的酶促降解都可起到激活作用。Ca2+对胞内酶酶促降解不同底物的激活作用最为明显;当向体系中加入的Ca2+为0.5mmol·L-1时,蒽、菲、芘的去除率可分别提高为不加金属离子时的1.34倍、1.59倍、1.84倍。(3)通过测定米氏常数发现,当不加金属离子时,以蒽、菲、芘为底物时粗酶液的米氏常数值分别为2.69×10--4、4.28×10--4、3.56×10--4mol·L-1;加入0.5mmol·L-1 Ca2+时的米氏常数值分别为1.54×10--4、3.58×10--4、2.46×10--4mol·L-1,说明金属离子的加入增大了粗酶液与底物的亲和力,因此使得加入金属离子时蒽、菲、芘的去除率显著提高。

氯氰菊酯的酶促降解

阴沟肠杆菌w10j15经过纯培养、超声波破碎和高速离心，提取到氯氰菊酯降解酶。在实验条件下测定了降解酶对氯氰菊酯的降解特性。结果表明，降解酶在40℃、pH7．5时对氯氰菊酯显示最大的降解活性，对氯氰菊酯的降解率为78％；它在30～50C或pH6．5～8．0稳定性良好。Lineweaver-Burg法做图分析表明，其酶蛋白最大降解速率Vmax为63.69nmol·mL^-1·min^-1，米氏常数（Km）为377．35nmol／mL。

有机磷农药(乐果)的酶促降解研究

从高效降解真菌Ｚ５８培养物中通过硫酸铵分级沉淀和ＳｅｐｈａｄｅｘＧ１００分子筛层析提取和纯化降解酶，研究了该降解酶对乐果的降解特性，Ｚ５８菌株的乐果降解酶为胞内酶，主要分布于细胞膜组分，该酶对乐果酶促降解最适ｐＨ为７５，最适温度为４０℃，其米氏常数Ｋｍ为０５９％．

末端为磷酰胆碱基团的聚丁二酸丁二醇酯的酶促降解和热性能

以聚丁二酸丁二醇酯(PBS)为参照,研究了酯酶Lipase AY30对亲水磷酰胆碱(PC)基团改性的聚丁二酸丁二醇酯(PBS-PC)的生物降解性能的影响.结果显示,在酯酶Lipase AY30作用下,21 d后PBS的质量损失仅为1.9%,而PBS-PC的质量损失了9.7%.相同条件下扣除各自水解引起的质量损失(PBS 1.4%和PBS-PC 6.5%)后,PC亲水基团的引入对聚合物的降解起到了促进作用.示差扫描量热(DSC)研究结果表明,改性后的聚合物熔融温度和熔融焓降低,玻璃化转变温度升高,表明PC端基的引入降低了PBS的结晶能力,非晶相结构的增多对聚合物降解有促进作用.因此PBS-PC有望作为一种新的具有良好生物降解性和生物相容性的高分子材料,应用于药物控释、基因治疗及组织工程等生物医用材料领域.

氯菊酯的酶促降解

从降解氯菊酯的分离株YF11提取降解酶并测定了对氯菊酯的降解特性。降解酶在32.5℃、pH9.0时对氯菊酯显示最大的降解活性，其每毫克蛋白质最大降解速率为20．8nmol／min，米氏常数（Km）为5.2nmol／mL。

农药杀螟硫磷酶促降解的研究

从长期受农药杀螟硫磷污染的土壤中分离到一株高效降解菌株,研究了其最适产酶条件:培养温度为30℃,培养液起始pH为7.0,培养时间为30 h.从该降解菌中提取的粗酶液在pH 7.5和30℃时显示最大的降解活性,其米氏常数Km为2.92×10-4mol/L,最大降解速率为2 422.79 nmolm in-1mg-1.

甲氰菊酯的酶促降解

阴沟肠杆菌w10j15中提取到甲氰菊酯降解酶,测定了其对甲氰菊酯的降解特性。研究结果表明,降解酶在40℃、pH7 5时对甲氰菊酯显示最大的降解活性,对甲氰菊酯的降解率为65%。经实验测定,其每毫克酶蛋白质最大降解速率Vmax为48 08 nmol·mL-1·min-1,米氏常数(Km)为332 23 nmol·mL-1。

白腐菌Phlebia brevispora TMIC34596对林丹的酶促降解特性

为了阐明白腐菌株Phlebia brevispora TMIC34596对有机氯杀虫剂林丹的酶促降解机理及规律,在实验室条件下,通过菌株的纯培养、超声波破碎和高速离心等过程,提取到胞内粗酶液和胞外粗酶液,并研究了胞内及胞外酶对林丹的降解特性、最佳降解条件及动力学参数等。结果表明,胞内酶起主要的降解催化作用,相同处理时间内对林丹的降解率是胞外酶的4~5倍。胞内酶降解林丹的酶促反应最适温度为35℃,最适p H值为5.0,最适条件下反应2 h后的林丹降解率为64.0%。胞内酶在25~40℃、p H值在4.0~6.5时能保持较高的降解活性,对林丹的降解率在50%以上。胞内酶降解林丹的米氏常数Km为1.30μmol/L,最大反应速率Vmax为1.18μmol/min,表明胞内酶对林丹有较强的亲和力,降解林丹速度较快。通过气相色谱-质谱分析,五氯环己醇和四氯环己二醇被鉴定为林丹的胞内酶代谢产物,表明胞内酶可通过连续的脱氯及羟基化作用将林丹转化为多羟基化产物,该途径不同于目前所报道的白腐菌对林丹的降解途径。