酶催化动力学光度法测定汞

基于醇脱氢酶催化乙醇和氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的反应中 ,汞离子对于酶催化的抑制作用 ,通过测定还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸吸光度的变化率得出其酶促反应速度 ,对应于汞而制得标准曲线。检出限为 0 .5 μg/L。讨论了pH值和共存离子对测定的影响。本方法具有快速、灵敏。

酶催化动力学光度法测定抗坏血酸

基于抗坏血酸对血红蛋白模拟酶催化体系的抑制作用,建立酶催化动力学光度法测定抗坏血酸的新方法。研究了体系的最佳条件及动力学行为,测定的线性范围为2.0×10-7—5.9×10-5mol/L,方法检出限为7.0×10-8mol/L。对6.0×10-6mol/L的抗坏血酸进行11次平行测定相对标准偏差为2.5%。此方法可用于药剂和蔬菜中抗坏血酸含量的测定。

酶催化动力学光度法测定肾上腺素

基于肾上腺素对血红蛋白酶催化体系的抑制作用，建立了酶催化动力学光度法测定肾上腺素的新方法。实验研究了体系的最佳条件及动力学行为，测定的线性范围为4．5×10^-7～1．4×10^-05 mol／L，方法检出限为5．2×10^-08 mol／L。对浓度为9．0×10^-6 mol／L的肾上腺素进行11次平行测定的相对标准偏差为3．5％。此方法可用于药剂中肾上腺素含量的测定。

酶催化动力学光度法测定盐酸氯丙嗪

酶具有高效的催化活性和高度的专一性。所以，酶促反应动力学在临床、药物、农业及工业过程监测中都具有广泛的应用。本文研究了在pH9．8NH3-NH4CI缓冲溶液中，盐酸氯丙嗪对牛血红蛋白模拟酶催化体系的抑制作用，建立了酶催化动力学光度法测定盐酸氯丙嗪的新方法。

酶催化动力学

文中对酶和酶催化进行简单阐述的基础上,重点介绍了酶催化动力学,M——M方程及各种影响因素.

应用酶催化动力学——吸光光度法评价美白化妆品功效实验中几个问题的解决方法

市场上销售的祛斑美白类化妆品绝大多数都是通过抑制酪氨酸酶的活性而起作用的,因此,检测其对酪氨酸酶活性的抑制强度是评价其功效的模式之一。吸光光度法具有快速,灵敏和准确等特点,已成为检测酶催化反应动力学的首选方法。由于化妆品的一些特性(成分复杂、多为乳化型、无公认的标准品等),应用吸光光度法检测美白化妆品的实验中曾遇到一些问题,就将几个主要问题的解决方法简介如下。

类普鲁士蓝纳米酶材料的制备及其酶催化反应动力学探究——推荐一个分析化学综合实验

将类普鲁士蓝纳米酶引入本科实验教学,设计了一个探究性的分析化学综合实验,实验内容包括三种类普鲁士蓝纳米酶材料的制备、表征和酶催化反应速率常数的测定,并将这些纳米酶材料应用于过氧化氢(H2O2)的分析检测。本实验所用试剂价廉易得、反应条件温和、实验现象直观、时间分配合理,适合本科实验教学,用于提升学生的实验技能和科研创新能力。

反胶束固定化乳酸脱氢酶的催化动力学性质研究

以十六烷基三甲基溴化铵(CATB)-辛烷-己醇反胶束体系对乳酸脱氢酶(LDH)进行固定化,试验了含水量、CTAB和己醇浓度对LDH固定化的影响。对游离酶和固定化酶的催化动力学性质研究表明:酶促反应的最适pH值分别为9.2和9.5,最适温度分别是37℃和43℃,对乳酸的米氏常数Km分别为1.4 mmol/L和2.3mmol/L。30℃时,游离酶存放2 h,约失活50%,而固定化酶仅失活10%,表明反胶束固定化LDH具有较好的热稳定性。

酶催化动力学光度法测定盐酸多巴胺

目的:建立了一种简单、灵敏的酶催化动力学光度法测定盐酸多巴胺的新方法。方法:在pH9.8的NH3-NH4Cl的缓冲溶液中,利用盐酸多巴胺对牛血红蛋白(Hemoglobin,Hb)模拟酶催化体系的抑制作用,研究了该抑制反应的最佳实验条件及动力学行为。结果:测定的线性范围为1.1×10-7～1.1×10-5mol.L-1,检出限为6.1×10-8mol.L-1。对浓度为5.0×10-6mol.L-1的盐酸多巴胺进行11次平行测定,其相对标准偏差为4.5(。结论:该方法简单,快速,灵敏,可用于盐酸多巴胺注射液中盐酸多巴胺含量的测定。

醇脱氢酶在反胶束溶液中的催化动力学性质

以十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)-辛烷-己醇反胶束体系对醇脱氢酶(ADH)进行固定化,考察了含水量、酶液pH值、CTAB和己醇浓度对ADH固定化的影响。对游离酶和固定化酶的催化动力学性质研究表明,酶促反应的最适pH值分别为8.2和8.8,最适温度分别是31和20℃,对乙醇的米氏常数Km分别为12和7.4 mmol/L。在30℃时,游离酶存放150 min后失活90%,固定化酶失活50%,表明反胶束固定化ADH有较好的热稳定性。

乳酸脱氢酶在CTAB-戊醇反胶束体系中的催化动力学研究

以十六烷基三甲基溴化铵(CATB)-异辛烷-戊醇反胶束体系对乳酸脱氢酶(LDH)了固定化,探讨了体系含水量W0(W0=n(水)/n(CTAB)、CTAB浓度、戊醇体积比对LDH固定化的影响及游离酶和固定酶的催化动力学性质.结果表明:LDH进入反胶束的最佳条件是:体系含水量为4.3,CTAB浓度为0.24 mol/L,戊醇体积比为25%.对游离酶和固定化酶的酶促反应的最适pH值均为8.8,最适反应温度分别为52℃和30℃,米氏常数Km分别为65mmol/L和48mmol/L.在25℃时,游离酶存放2 h后失活35%,而固定化酶仅失活16%,说明反胶束固定化LDH具有良好的活力稳定性.

微生物法生产丙烯酰胺的研究(Ⅱ)——腈水合酶催化反应动力学与失活动力学

在以丙烯腈为原料 ,微生物转化生产丙烯酰胺的过程中 ,酶催化反应是过程的关键。为了了解酶催化的动力学 ,本研究以自由细胞的酶为催化剂 ,进行了腈水合酶的反应动力学和失活动力学的研究。首先研究了菌体浓度、温度、pH值、丙烯腈浓度、丙烯酰胺浓度等对腈水合酶催化反应速度的影响。结果表明 ,在这些因素中 ,温度和丙烯酰胺浓度是最主要的影响因素。 2 8℃时酶活为 5 6 5 9u mL(菌液 ) ,在 5℃时的反应速率仅为 2 8℃时的11 72 % ,相应的表观酶活为 6 6 3u mL(菌液 )。而在丙烯酰胺 45 %浓度条件下的酶活大约只有丙烯酰胺 5 %浓度下的酶活的 1 2。经过对不同温度下的反应速度的研究 ,得到腈水合酶水合反应的活化能为 6 5 5 7kJ·mol- 1 。本文进一步研究了自由细胞状态下 ,菌体浓度、pH值、温度、丙烯腈浓度、丙烯酰胺浓度对腈水合酶失活的影响 ,得到了失活动力学。结果表明 ,在这些因素中 ,对酶失活影响的最主要因素还是温度和丙烯酰胺浓度。尤其当丙烯酰胺浓度到达 35 %时 ,酶活下降得很快 ,在 5 5h后 ,酶活几乎为零。而在丙烯酰胺浓度为 10 %的情况下 ,5 5h的酶活仍然还存在约 5 0 %。试验结果还表明 ,丙烯腈对酶的稳定性的影响很小。经过数据处理 ,得到的 2 8℃的酶失活速率常数为 5℃下的 2 1

KPC-2型碳青霉烯酶的表达纯化及其催化抗生素水解的动力学

目的:表达纯化KPC-2型碳青霉烯酶,并研究其催化抗生素水解的酶动力学活性。方法:将KPC-2基因与pET-22b(+)原核表达载体连接后转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,表达产物经FF镍柱纯化后,SDS-PAGE检测蛋白的纯度;用BioTek酶联仪进一步检测其抗生素水解范围及动力学特性。结果:构建了高效表达KPC-2的工程菌,得到了纯度在90%以上的KPC-2蛋白,该蛋白能水解几乎所有β内酰胺类抗生素,其水解美罗培南等碳青霉烯类抗生素的能力较强,最适温度约为40℃,最适pH值约为6.5。结论:为进一步了解最常见的KPC功能与活性提供了重要信息。

蒜酶催化蒜氨酸动力学研究

目的:研究酶促反应的动力学参数,为新药设计提供依据。方法:采用HPLC方法测定酶促反应的动力学参数及蒜酶的最适pH和最适温度。结果:蒜酶以蒜氮酸为底物,最大反应速度Vmax=27.9 μnml·min-1·mg-1,米氏常数Km=3.6 mmol/L,其最适pH为6.6,最适温度为35℃。结论:酶促反应的动力学参数为蒜酶寻求有利的反应条件、更大限度地提高酶反应的效率提供了参考数据。

纤维素酶水解动力学的人工神经网络模型研究

酶作用机制的模糊以及影响异相体系因素的大量存在,使得纤维素水解的酶催化过程高度复杂,很难为之建立理论模型.采用非理论模型人工神经网络模拟和预测了纤维素酶水解反应,并与常用的响应面模型进行了比较.选取加酶量X1,底物浓度X2和反应时间X3作为自变量,还原糖浓度Y1和原料转化率Y2作为响应值.结果表明,人工神经网络模型比响应面模型更适合作为研究纤维素酶水解的动力学工具.在模拟过程中,除中心试验点外,只有1个试验点上人工神经网络模拟值Y2产生的误差大于响应面模型.在预测过程中,人工神经网络模型的预测值都比响应面模型更接近实验值.

一种基于检测酶反应中间体而测定漆酶活性的动力学分析法

在反相胶束 (AOT n octane)介质中 ,漆酶 (laccase) -邻苯二胺 (o phenylenediamine ,OPDA)体系的酶催化反应呈现“超级活性” ,并且酶催化反应中间体与产物 2 ,3 二氨基吩嗪 (2 ,3 diaminophenazine ,DAP)的吸收光谱能很好的剥离分开。通过理论推导 ,表明酶催化反应中间体生成的初始速率与漆酶活性存在定量关系 ,采用初始速率法测定中间体的浓度 ,建立了一种基于检测酶催化反应中间体而测定漆酶活性的动力学分析新方法。该方法由于在反相胶束介质中采用初始速率法进行测定 ,具有较高的灵敏度和选择性。测定漆酶活性的线性范围为 0～ 2 .5U ;检出限为 0 .0 33U。

化学-酶催化动态动力学拆分工艺中多相催化剂的研究进展

利用外消旋体进行化学-酶催化动态动力学拆分是制备单一手性化合物的有效手段之一。论述了近几年用于动态动力学拆分工艺中的固定化脂肪酶和固相外消旋化多相催化剂的研究进展,介绍了过渡金属配合物、酸性β-沸石和酸性树脂等固相外旋消化催化剂与固定化脂肪酶配伍,用于化学-酶催化动态动力学拆分工艺的催化效果。

ImiS的表达、纯化及催化3类β-内酰胺类抗生素水解的动力学研究

目的研究金属β-内酰胺酶(MBL)ImiS催化β-内酰胺类抗生素水解的动力学特征,为研发MBLs的通用型抑制剂提供实验数据。方法在大肠埃希菌中表达ImiS,以SP-Sepharose离子交换层析柱纯化,通过MALDI-TOF MS测定其分子量,用UV-VIS测定ImiS催化法罗培南等3类6种β-内酰胺类抗生素水解的酶动力学参数,并考察不同pH、温度及底物浓度对酶活性的影响。结果表征获得ImiS的分子量为25209Da,ImiS对法罗培南、青霉素G、氨苄西林及羧苄青霉素水解的催化常数Kcat分别为(2.15±0.03),(0.85±0.03),(0.71±0.02)和(0.58±0.02)s-1,对头孢三嗪和头孢噻肟无活性。底物为法罗培南时,ImiS最适活性的pH为7.5±0.1,在酸性环境中酶活性降低较为明显,最适活性的温度为(44.8±0.8)℃。结论治疗携带ImiS的病菌引起的感染,使用法罗培南不妥,而头孢三嗪或头孢噻肟为合理。实验结果为ImiS抑制剂的设计与合成提供了很有价值的信息。

WT-L1与Co(Ⅱ)-L1的光谱表征及催化水解β-内酰胺类抗生素的动力学研究

目的表征金属β-内酰胺酶(MBL)L1的结构和动力学特性,以其发展MBL的通用型抑制剂。方法在大肠埃希菌BL21(DE3)中表达并纯化野生型L1(Wild type L1,WT-L1),以SDS-PAGE电泳确认;用EDTA除去WT-L1中的Zn(Ⅱ)离子得Apo-L1,再用Co(II)滴定制得Co(Ⅱ)-L1;通过UV-Vis,CD及荧光光谱表征WT-L1及Co(Ⅱ)-L1活性中心的结构;采用稳态动力学方法测定WT-L1及Co(Ⅱ)-L1催化3类9种β-内酰胺类抗生素水解反应的酶动力学参数,确定抗生素对L1的稳定性。结果获得纯化的WT-L1和重组的Co(Ⅱ)-L1;光谱表征表明L1具有两个金属活性中心,Co(II)-L1的二级结构发生显著变化;WT-L1对碳青霉烯类抗生素的酶促活性最强,青霉素类次之,头孢类抗生素较弱,Co(Ⅱ)-L1比WT-L1的酶催活性弱。结论 Co(Ⅱ)-L1的重组实现了对MBL-L1的结构表征,L1对青霉素类抗生素呈现强的催化活性,对头孢类抗生素稳定。