测定人绒毛膜促性腺素(HCG)的酶免疫传感器的研制

本文研制了固定HCG抗体的醋酸纤维素生物活性膜。采用夹心法在膜上发生免疫化学反应,将形成夹心结构的膜,安装在氧电极上,构成酶免疫传感器。耦联过氧化物酶的膜,催化分解H_2C_2致使传感器的输出电流提高,表示为溶液O_2含量的增高。通过溶液中O_2含量的变化值ΔC_2,测定HCG的浓度。被测HCG的浓度范围为5～2500mIU/ml。酶免疫传感器与放射免疫测定相比较,两种方法具有高度相关性,相关系数r=0.998,P<0.001。

基于MEMS技术的安培酶免疫传感器研究

该文采用MEMS工艺制备可集成安培酶免疫传感器,用于人免疫球蛋白IgG的检测。该传感器以硅作为基底,铂作为电极,工作电极敏感面积1mm2。SU-8胶形成的微反应池结构使该传感器试剂用量仅为μl量级。聚吡咯作为酶与电极之间的电子转移基体聚合于工作电极敏感表面,戊二醛作为交联剂进行抗体(羊抗人IgG)的固定。抗体与酶标抗体(辣根过氧化物酶HRP标羊抗人IgG)对人IgG进行特异性夹心识别,通过检测酶标HRP对底物H2O2催化产生的电流信号实现免疫检测。该传感器工作电压?0.3V,检测下限5ng/ml,线性范围5～255ng/ml,响应时间3min,具有响应快、下限低、试剂用量少、微型化、便于集成等优点。

基于纳米金固定大肠杆菌O157:H7酶免疫传感器的研究

目的：建立一种快速检测大肠杆菌O157：H7的新型酶免疫传感器。方法：用静电吸附作用和抗原抗体特异性反应将大肠杆菌O157：H7单克隆鼠抗固定在辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG／纳米金修饰的玻碳电极表面，制备用于检测大肠杆菌O157：H7的酶免疫传感器。通过循环伏安法和恒电位法测定大肠杆菌O157：H7被固定在电极表面引起的电信号改变进行定量分析。结果：在含0．1mol／L PBS（pH7．4），1 mmol／L二甲氨基甲基二茂铁，0．2mmol／L H2O2，30℃的底液中该酶免疫传感器的检出限为1×10^2cfu／ml，检测线性范围为1×10^3～1×10^5 cfu／ml，相关系数为r=0．997。结论：该传感器制备方法简单，具有灵敏度高、检测时间短、操作简单等优点，在临床医学和环境监测中具有较好的应用价值。

电化学酶免疫传感器在食品安全检测中的研究进展

电化学酶免疫传感器是一种标记型的免疫传感器,它结合了酶的放大作用和免疫传感器的灵敏度及特异性,是近几年来研究最多、发展最快,应用最广的一种免疫传感器。本文综述了电化学酶免疫传感器的特点及其在食品安全领域(包括食源性致病菌、生物毒素、药物残留等)的研究应用进展,并且对酶免疫传感器的发展前景进行了展望。

再生丝素固定的酶免疫传感器及其应用前景的研究

酶免疫传感器是采用再生丝素将待测抗原 (免IgG)固定在石墨电极表面 ,选用抗体 (山羊抗兔IgG-HRP)与其识别结合。利用H2 O2 将抗原抗体结合的电位响应信号放大 ,采用直接电位法检测IgG的浓度。该传感器测定IgG的最低检测浓度可达 1.2× 10 -10 mol/L ,标准曲线的线性范围在 4.1× 10 -7～ 1.2× 10 -10 mol/L ,响应时间为 15s。通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合 ,反应时间由原来的 90min缩短到 30min ,这在国内外鲜有报道。以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶免疫传感器 ,不仅在临床检测、生物医学研究领域中 ,而且在动植物疾病检测、环境监测、HLA个人身份鉴定、PC安全、物理访问 (门禁 )、军事等领域都有着广阔的应用前景。

一种新型酶免疫传感器的制备及其性能

本文研究的酶免疫传感器是采用再生丝素将待测抗原（兔IgG）固定在石墨电极表面,选用抗体（山羊抗兔IgG-HRP）与其识别结合。利用H2O2将抗原体结合的电位响应信号放大,采用直接电位法检测IgG的浓度。该传感器测定IgG的最低检测浓度可达1.2×10-10mol/L,标准曲线的线性范围在4.1×10-7～1.2×10-10mol/L,响应时间为15s。通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合,反应时间由原来的90min缩短到30min,这在国内外鲜有报道。这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶免疫传感器,不仅在临床检测、生物医学研究领域中,而且在动植物疾病检测、环境监测等领域都有着广阔的应用前景。

氢离子敏场效应管酶免疫传感器的研制

介绍了以氢离子敏场效应管为基体电极，以碱性磷酸酶抗碱性磷酸酶抗体为例，在方法学上实现了电化学测量的一种酶免疫传感器．本生物传感器的响应时间达１８ｓ，标准曲线线性范围为７．８×１０（－２）μｇ／ｍｌ～０．６３μｇ／ｍｌ。另外，还讨论了适宜测量条件、抗体膜的寿命、抗原抗体复合物的寿命、抗原抗体复合物的分离及用不同抗体膜测量的重复性等。

双重放大酶免疫传感器检测鸡白痢鸡伤寒沙门菌

为探求新型鸡白痢鸡伤寒沙门菌快速检测技术,本研究首次利用多壁碳纳米管与离子液体[BMIM]PF6修饰四通道丝网印刷碳电极,制成双重放大信号检测鸡白痢鸡伤寒沙门菌的酶免疫传感器。用原子力显微镜表征其表观形态,循环伏安法监测其电化学特性。结果表明,在优化的检测条件下,免疫电极对目标菌的线性响应范围为103～109 cfu.mL-1,检出限为3.93×102 cfu.mL-1(S/N=3),4℃放置28d后,响应电流为初始值的90.15%,具有良好的稳定性、特异性、重现性和准确性。多壁碳纳米管与离子液体结合制备的鸡白痢鸡伤寒沙门菌酶免疫传感器实现了检测信号的双重放大,检测灵敏度高,离子液体有助于保持酶标抗体的活性,延长免疫电极的有效时间。依据该方法构建的酶免疫传感器为快速检测其它致病菌酶免疫传感器的研究提供了良好的参照模型。

一种酶免疫传感器的制备和性能测试

这种酶免疫传感器是采用丝素蛋白溶液将待测抗原(兔IgG)固定在基础电极表面,选用抗体(山羊抗兔IgG-HRP)与其识别结合.利用H2O2将抗原抗体结合的电位响应信号放大而检测抗原的浓度.该传感器测定抗原的最低检测浓度1.0×10-10mol/L,线性范围1.0×10-8～1.0×10-10mol/L,响应时间为10 s.通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合,反应时间由原来的90 min缩短到30 min,这在国内外鲜有报道.这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶免疫传感器,在临床检测、生物医学研究等领域将会有广阔的应用前景.

纳米金掺杂壳聚糖-四氧化三铁复合物修饰的高灵敏电流型酶-免疫传感器

甲胎蛋白（AVe）是一种酸性糖蛋白，血清AFP对消化道恶性肿瘤及肺癌的诊断有较高的阳性率，是国际公认的肿瘤标志物之一。酶免疫传感器将酶的化学放大作用与免疫物质的专一性识别相结合，兼有电化学分析的灵敏性和免疫反应的特异性，近年来其发展备受关注。

再生丝素固定的酶标免疫传感器的研究

所研究的酶标免疫传感器是采用再生丝素将待测抗原 (兔IgG)固定在石墨电极表面 ,选用抗体 (山羊抗兔IgG HRP)与其识别结合。利用H2 O2 将抗原抗体结合的电位响应信号放大采用直接电位法检测IgG的浓度。该传感器测定IgG的最低浓度可达 1 2× 10 - 1 0 mol L ,标准曲线的线形范围在 4 1× 10 - 7～ 1 2× 10 - 1 0 mol L ,回归方程为 : E =- 10 4 9+ 72 1g[IgG],响应时间为 15s。通过电泳的方法加速抗原抗体的识别结合 ,反应时间由原来的 90min缩短到 3 0min。这种以固定化抗原结合酶标抗体量的多少作为检测抗原标准的新型酶标免疫传感器 ,在临床检测、环境监测、HLA个人身份鉴定等领域都有着广阔的应用前景。

电化学酶联免疫传感器的发展概述

电化学酶联免疫传感器广泛应用于临床检测、生化分析等领域。该文介绍了电化学酶联免疫传感器的概念与工作原理。根据检测换能器的不同进行了分类比较,并分别阐述了各种电化学酶联免疫传感器的工作原理与特点。综述了近年来常用于电化学酶联免疫传感器的标记酶及其在分析测试中的应用。

白藜芦醇作辣根过氧化物酶底物的布氏杆菌抗体酶联免疫传感器研究

一种纯天然产物白藜芦醇用作辣根过氧化物酶（HRP）底物。对其化学性质的研究证实，白藜芦醇在空气中较稳定，对HRP、H2O2的电化学响应性能优于传统HRP底物，对人体无毒害。白藜芦醇在HRP催化下可被H2O2氧化成醌，产物醌在电极上于一376mV处可被还原，其电流的大小与HRP的浓试在一定浓度范围内呈线性相关。将兔布氏杆菌抗原包埋在石墨．石蜡基质中制备了测定兔布氏杆菌抗体的电化学酶联免疫传感器，该传感器测定兔布氏杆菌抗体的线性范围为3×10^-4～1．65×10^-2g／L；检出限为1×10^-4g／L；RSD为4．6％。本方法制备免疫传感器的电化学性能稳定，抗原活性保持良好。

基于磁性碳纳米管修饰印刷电极的无酶型HIV p24安培免疫传感器

在多壁碳纳米管(MWNTs)表面固定Fe3O4(核)/Au(壳)纳米微粒(GMP),使其具有超顺磁性,包被p24抗体(anti p24),制得检测探针(MWNTs-GMP/anti p24);在磁场作用下将此探针吸附于N,N'-双(2-羟基苯亚甲基)邻苯二胺合铜(CuRb)修饰的碳基丝网印刷电极(SPCE|CuRb)表面,制得了免疫传感电极(SPCE|CuRb/MWNTs-GMP/anti p24)。当此电极在含p24样本中于室温下温育15min后,随p24浓度的增加在电极表面生成的免疫复合物增加,导致CuRb对H2O2的催化还原电流下降。在含5mmol/L H2O2的PBS(pH7.0)中和-300mV下,催化还原电流降低值ΔIo与p24浓度在0.6～160μg/L呈线性关系;检出限为0.32μg/L(3σ)。将其用于实际样品检测,结果与标准EILSA方法一致。由于MWNTs-GMP/anti p24具有超顺磁性,并可以显著提高电极比表面积及anti p24负载量,而CuRb代替易失活的HRP酶,使得该传感器灵敏度和稳定性俱佳,电极表面可更新,可用于艾滋病人血清中p24筛测。

基于多壁碳纳米管/海藻酸钠4-SPCE福氏志贺氏菌酶免疫传感器的研究

目的：为增强响应信号,改善生物相容性,研制可以快速检测福氏志贺氏菌（Shigella flexneri,S.flexneri）的电化学免疫传感器。方法：将辣根过氧化物酶标记福氏志贺氏菌抗体（HRP-anti-S.flexneri）吸附在多壁碳纳米管（MWCNT）/海藻酸钠（SA）复合物修饰的四通道丝网印刷电极表面,制得一次性酶免疫传感器。采用原子力显微镜（AFM）表征免疫电极和孵育抗原后的电极表面形态以及循环伏安法（CV）考察不同修饰电极的电化学特性;采用一步法检测福氏志贺氏菌,CV监测酶促反应;根据免疫反应前、后还原峰峰电流的降低值来检测样品中的福氏志贺氏菌。结果：在优化的试验条件下,酶免疫传感器与福氏志贺氏菌浓度的对数在104~1011cfu/mL范围保持良好的线性关系,检出限为3.1×103cfu/mL（S/N=3）。结论：该酶免疫传感器放大了电化学反应信号,保持了生物物质的活性,具有较好的特异性、重现性（RSD=7.8%）、稳定性（4℃放置两周后电流响应为初始值的95.16%）和准确性（与GB/T 4789.5-2003符合率为97.5%）,有望用于福氏志贺氏菌的快速筛检。

多壁碳纳米管/DMF复合物4-SPCE福氏志贺氏菌酶免疫传感器的研制

利用戊二醛交联法将辣根过氧化物酶标记的福氏志贺氏菌抗体固定在多壁碳纳米管修饰的四通道丝网印刷碳电极表面,制备了可用于检测福氏志贺氏菌的酶免疫传感器。采用循环伏安法对不同修饰电极进行电化学表征。根据抗原-抗体特异性结合形成的免疫复合物使敏感膜有效扩散截面积减小的特性,采用循环伏安法检测样品中的福氏志贺氏菌。在优化的实验条件下,该酶免疫传感器对福氏志贺氏菌的检测范围为104~109 cfu/mL,检出限为3.4×103 cfu/mL（S/N=3）。该酶传感器还具有较好的特异性、重现性、稳定性和准确性。

壳聚糖-SiO2杂化膜酶免疫传感器的研制及其快速检测副溶血性弧菌的评价

目的为改善已有免疫传感器存在的关键技术问题——生物敏感元件的固定化方法及其生物活性的保持，研制壳聚糖（CS）-SiO2杂化膜酶免疫传感器，并对研制的新型传感器进行评价。方法采用溶胶-凝胶法制备CS—SiO2杂化膜，将辣根过氧化物酶标记的副溶血性弧菌抗体（HRP—anti-VP）掺杂于该杂化膜中，制备副溶血性弧菌酶免疫电极。通过循环伏安法表征免疫电极和监测酶促反应，根据免疫反应前后还原峰电流降低率（DP）来实现对副溶血性弧菌的检测。选择溶藻弧菌等7种菌进行特异度实验。结果通过研究3种膜的红外光谱得出，CS-SiO2杂化复合膜制备成功，HRP—anti—VP被固定于杂化膜中。在优化的免疫反应条件及电化学检测条件下，在10^4-10^9cfu／ml浓度范围内，免疫电极免疫反应前后还原峰电流下降的DP与副溶血性弧菌浓度C的对数呈线性关系，线性回归方程为DP=6．5 lgC-3．319，线性相关系数0．9958，检出限为6．9×10^3cfu／ml[信／噪比（S／N）=3]。该免疫电极具有较好的特异度、重现性[相对标准偏差（RSD）〈6％]、稳定性（1周后电流响应为初始值的95％）和准确性（与GB／T4789．7-2003的符合率为96．7％）。结论研制出的CS—SiO2杂化膜酶免疫传感器用于快速筛检副溶血性弧菌效果良好。

快速检测奶粉中阪崎肠杆菌新型酶免疫传感器

为探求奶粉中阪崎肠杆菌(Enterobacter sakazakii,E.sakazakii)更好的快速检测技术,将硫堇和辣根过氧化物酶标记阪崎肠杆菌抗体依次自组装到多壁碳纳米管/羧甲基壳聚糖-海藻酸钠修饰的丝网印刷碳电极上,制得一种阪崎肠杆菌酶免疫传感器。采用交流阻抗法和循环伏安法对不同修饰电极进行电化学特性表征测试,根据免疫电极CV还原峰电流在孵育前后的变化差值(ΔI)对阪崎肠杆菌进行检测。优化试验条件下,该方法对阪崎肠杆菌检测线性范围为103～109 CFU/mL,检出限为6.6×101 CFU/mL;且具有良好的特异性(非目标菌ΔI<0.5μA)、准确性(与GB/T 4789.40-2010符合率为100%)、稳定性(免疫电极在4℃无菌环境下保存30d,响应电流仍能达到初始值的92.3%)和重现性(RSD=6.3%)。

电化学酶联免疫传感器在农畜产品安全检测中的应用研究

电化学酶联免疫传感器是一种标记型的免疫传感器,它结合了酶电极的放大作用和免疫传感器的灵敏性及特异性,是近几年来研究最多、发展最快、应用最广的一种免疫传感器。综述了电化学酶联免疫传感器的特点及其在农畜产品安全领域(农药残留、兽药残留等)的研究进展和应用现状,并对电化学酶联免疫传感器的发展前景进行了展望。

基于Fe^(3+)与聚谷氨酸螯合作用的无酶磁免疫传感器的研究

利用金属螯合剂-聚谷氨酸与金属离子间的相互作用构建了一种新型的无酶信号放大磁免疫传感器。密度泛函理论计算表明聚谷氨酸对Fe^(3+)的螯合能力高于其他金属离子。因此,将聚谷氨酸修饰在聚苯乙烯微球表面形成纳米刷,并用于对Fe^(3+)的螯合,进而将负载大量金属离子的纳米刷作为免疫分析的信号报告分子。该纳米刷对Fe^(3+)的负载量高达1.92×108(每个纳米刷颗粒),该材料对Fe^(3+)的高负载量为高灵敏无酶免疫传感器的构建提供了可能。经过在纳米刷表面修饰抗原以及纳米磁颗粒表面修饰抗体,利用免疫竞争法实现了对微囊藻毒素的捕获,然后通过菲咯嗪法对纳米刷螯合的Fe^(3+)进行定量,从而实现对微囊藻毒素的定量检测。本工作构建的新型纳米刷具有高稳定性、储存周期长等优点,为现场即时检测提供了具有前景的平台。