基于化学发光酶免疫分析法检测花生过敏原Ara h 2

Ara h 2是花生主要过敏原之一,为开发食物中Ara h 2过敏原成分的快速检测方法,减少因误食导致花生过敏事件的发生,该研究采用鼠源单克隆抗体作为捕获抗体、兔源多克隆抗体作为检测抗体,通过棋盘法优化抗体工作浓度,建立了一种检测花生过敏原Ara h 2的间接双抗夹心化学发光酶免疫分析法,并对该方法的灵敏度、准确度、精密度和特异性进行评价。该方法的检出限为1.085 ng/mL,线性范围为3.12~200 ng/mL,添加回收率为78.30%~94.39%,批内和批间变异系数均小于10%,且特异性良好,与其他常见食物过敏原无交叉反应。该方法与相同抗体所建立的间接双抗夹心酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法相比,在灵敏度上表现出一定优势。该研究开发的化学发光酶免疫分析法可对花生食品生产过程中和消费前的Ara h 2过敏原成分检测提供可靠的技术支持。

基于衍生化3-氨基-2-恶唑烷酮的夹心酶联免疫分析

建立一种3-氨基-2-恶唑烷酮(3-amino-2-oxazolidinone,AOZ)夹心免疫检测方法。通过1,6-己二醇连接2-硝基-4-羧基苯甲醛和生物素合成针对AOZ的新型衍生试剂。在样品前处理时加入衍生试剂可对AOZ进行衍生,衍生产率为89%。在酶标板上包被抗AOZ单克隆抗体并以辣根过氧化物酶标记的亲和素或抗生物素抗体作为第二结合物可实现AOZ的夹心酶联免疫吸附检测(enzyme-linked immunosorbnent assay,ELISA)。从实际应用的角度,得到双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下两个表位的极限距离,分别为12Å和13Å,理想距离分别为16Å和17Å。在双抗夹心和抗体-亲和素夹心模式下的检出限分别达到1.8 pg/mL和0.8 pg/mL(以AOZ质量浓度计),相对于竞争ELISA,其灵敏度最高提高了25倍。平均回收率为73%~85%,平均相对标准偏差为9.0%。

应用二抗技术建立灵敏检测奶中孕酮含量的酶联免疫分析法（EIA）

本研究应用二抗技术建立了灵敏检测奶中孕酮含量的酶联免疫分析法（ＥＩＡ）。微量滴定板首先包被二抗（羊抗兔ＩｇＧ），４℃孵育过夜。免疫反应溶液中包括２μｌ的奶样（用分析缓冲液稀释至２０μｌ），５０μｌ酶标孕酮和５０μｌ抗体。标准曲线的测试范围为０．２～１２．５ｐｇ／孔，相当于０．１～６．２５ｎｇ／ｍｌ，最小可测量０．１５ｐｇ／孔，５０％结合率对应的孕酮浓度是０．９２ｐｇ／孔。样品测定的平均批内与批间变异系数分别是４．６８％和１１．１０％。样品测定的回收率为９２．６７±１０．７９％。应用该方法测定全奶样品所得结果与应用ＲＩＡ测定结果高度相关（ｒ＝０．９７，ｎ＝４８，ｐ＜０．００１）。结果表明：该方法的灵敏度是本室ＲＩＡ的８０倍，与直接包被孕酮抗体的ＥＩＡ相比较，可以节约珍贵的抗孕酮抗体和酶标孕酮。

酶免疫分析法(EIA)在动物性食品中有机化学残留物测定上的应用

酶免疫分析法(EIA)是以酶学和免疫化学为基础发展起来的一种新技术,它是继放射免疫分析法(RIA)之后的一种超微量分析法。自从本法引入实际应用以来,已被生物学、生物化学和医学等领域普遍采用。在疾病的诊断和测定体液中的药物和激素方面应用更广。近年来有利用本法测定动物组织中有机化学残留物的报道。

间接竞争酶联免疫分析用于薏苡仁中杂色曲霉毒素的快速检测研究

杂色曲霉毒素(Sterigmatocystin,ST)是一种主要由杂色曲霉和构巢曲霉等真菌产生的次级代谢产物,其结构与黄曲霉毒素相似,具有潜在的致癌性和毒性,严重危害人类生命健康。研究发现部分中药易ST污染,但目前针对中药中ST的快速检测研究相对较少。通过系统优化样品前处理条件及影响检测灵敏度的关键参数,建立了简便的间接竞争酶联免疫分析法(ic-ELISA),用于消费量较大的药食同源薏苡仁中ST的快速筛查。所建立ic-ELISA的半数抑制浓度(Half-Maximal Inhibitory Concentration,IC 50)为0.11 ng/mL,线性范围为6.25~100μg/kg,加标回收率在79.27%~99.95%之间,相对标准偏差(RSD)<12%。此外,该方法可抗基质干扰,只需利用溶剂标准曲线即可进行定量。用所建立的ic-ELISA对96批薏苡仁样品进行了检测,并用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对阳性样品进行了确证。该ic-ELISA快速、准确、经济,可作为薏苡仁中ST高通量快筛的技术手段,同时为其他中药中ST的快速检测提供参考。

基于酶联免疫分析方法检测畜禽饲料中恩拉霉素

本文建立了一种应用于检测畜禽饲料中恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法。采用羰基二咪唑法将生物活性高的恩拉霉素A组分合成的半抗原偶联卵清蛋白,构建检测原;同时将杂交瘤细胞株2H1F91免疫BALB/c小鼠,制备特异性识别恩拉霉素的单克隆抗体。在此基础上,构建了恩拉霉素的间接竞争酶联免疫分析法的标准曲线,该曲线IC_(50)为91.61ng/mL,线性范围为25.73~471.39ng/mL,检出限为13.11ng/mL。猪饲料样品的添加回收率为91.60%~95.75%,鸡饲料的添加回收率为89.33%~94.80%,并且二者的变异系数均低于12%,这表明建立的方法结果可靠,适用于畜禽饲料中恩拉霉素含量的快速检测。

半抗原直接包被的四环素酶联免疫吸附分析法的建立

为建立更优的四环素(tetracycline,TC)酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),将TC与蛋白质偶联制备人工完全抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗TC的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)。采用酸性高锰酸钾羧化酶标板,将TC直接包被在酶标板上,并对ELISA反应体系条件进行优化,构建一种半抗原直接包被的TC ELISA检测方法。所制备的MAb特异性良好,交叉反应率低。所构建的检测方法最低检测限IC_(10)值为0.306 ng/mL,半数抑制率IC_(50)值为9.26 ng/mL,牛奶和水中加标回收率分别为96.46%~101.89%、96.84%~102.50%。与人工完全抗原包被的检测方法相比(IC_(10)值:0.624 ng/mL,IC_(50)值:28.24 ng/mL,牛奶和水中加标回收率分别为93.86%~105.12%、94.04%~105.56%),检测灵敏度有明显提高,并可用于实际样品中TC含量的检测,具备良好的应用前景。

酶联免疫吸附法检测在梅毒检验中的价值分析

目的 探讨梅毒检验中应用酶联免疫吸附法检测(enzyme linked immunosorbent assay, ELISA)的价值。方法 非随机选取2020年10月—2023年10月天水市第三人民医院收治的121例梅毒高危患者为研究对象。患者均接受快速血浆反应素试验(rapid plasma regain, RPR)、ELISA、化学发光免疫分析法(chemiluminescence immunoassay, CLIA)、明胶凝集试验(treponema pallidum particle assay, TPPA),以TPPA检查结果为金标准,对RPR、CLIA和ELSA诊断效能进行分析。结果 金标准诊断阳性患者为82例,阴性患者为39例。ELISA检测准确度、敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值分别为96.69%(117/121)、97.56%(80/82)、94.87%(37/39)、97.56%(80/82)、94.87%(37/39),均高于RPR、CLIA,差异有统计学意义(χ^(2)=13.337、9.528、22.318、9.517、22.318,P均<0.05)。结论 在梅毒检验中ELISA准确度、敏感度和特异度均较高,可为梅毒患者的临床诊治提供依据。

全自动酶标免疫分析仪的技术原理与故障案例分析

分析全自动酶标免疫分析仪的技术原理及典型故障案例,以提升全自动酶标免疫分析仪的使用效果。通过微粒子酶免疫分析(MEIA)技术完成酶免试验,以主定标、标准定标、定性定标及定标液修正为全自动酶标免疫分析仪的定标方式,提升酶免试验分析精度。通过分析全自动酶标免疫分析仪使用中遇到的洗板机、开机初始化报警、启动软盘、加样臂和滤光器等典型故障案例,提出故障解决应对措施,为全自动酶标免疫分析仪后期维修与管理提供参考。

电化学发光免疫分析与酶联免疫吸附测定法应用于乙型肝炎病毒血清学检验中的效果分析

目的对比乙型肝炎病毒血清学检验过程中采用电化学发光免疫分析(ECLIA)与酶联免疫吸附测定法(ELISA)的效果。方法90例乙型肝炎患者,分别以电化学发光免疫分析、酶联免疫吸附测定法进行病毒血清学检验。对比两种诊断方法对乙型肝炎病毒[乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)]阳性检出率以及不同浓度下两种检验方法HBsAg重复性。结果电化学发光免疫分析对HBcAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg、HBeAb的阳性检出率分别为85.56%、33.33%、48.89%、31.11%、64.44%;酶联免疫吸附测定法对HBcAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg、HBeAb的阳性检出率分别为83.33%、32.22%、45.56%、27.78%、44.44%。两种检验方法对HBcAb、HBsAb、HBeAg、HBsAg的阳性检出率对比无统计学差异(P>0.05),电化学发光免疫分析对HBeAb的阳性检出率明显高于酶联免疫吸附测定法(P<0.05)。两种检验方法在高浓度HBsAg批次间重复性相近,而电化学发光免疫分析在高浓度HBsAg批次内及中、低浓度HBsAg批次间、批次内重复性均明显低于酶联免疫吸附测定法。结论乙型肝炎患者接受病毒血清学检验可首选电化学发光免疫分析,其具有检出率高、结果准确等优点,值得临床运用并推广。

化学发光酶免疫分析法诊断乙型肝炎病毒感染的价值分析

目的:分析化学发光酶免疫分析法(CLIA)诊断乙型肝炎病毒(HBV)感染的价值。方法:选取2022年10月—2023年8月金沙县中医医院收治的疑似乙型肝炎患者60例作为研究对象,均接受酶联免疫吸附法(ELISA)、CLIA及综合检查,以综合检查诊断结果为“金标准”,比较ELISA、CLIA诊断HBV感染的效能。结果:综合诊断结果显示,HBV感染阳性50例,阴性10例。CLIA检测HBV核心抗体、HBV表面抗体、HBV e抗原、HBV e抗体、HBV表面抗原的阳性符合率高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05);CLIA的灵敏度、准确度、阴性预测值高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05);两种检测方法的特异度、阳性预测值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CLIA应用于HBV感染的诊断价值较高,能够稳定检出血清标志物,可为HBV感染的诊断及后续临床治疗工作提供重要依据,值得临床应用并予以推广。

化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附法在乙型病毒性肝炎诊断中的效能比较

目的:比较化学发光免疫分析(CLIA)法与酶联免疫吸附(ELISA)法在乙型病毒性肝炎(乙肝)诊断中的效能。方法:选取2020年5月至2022年5月该院收治的154例疑似乙肝患者为研究对象,均行CLIA法、ELISA法检测乙肝血清标志物[乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎e抗原(HBeAg)、乙型肝炎e抗体(HBeAb)、乙型肝炎核心抗体(HBcAb)]水平,以荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测结果为金标准,比较CLIA法与ELISA法在乙肝中的诊断效能及对低水平HBsAg的检出率。结果:154例疑似乙肝患者中,荧光定量PCR法诊断阳性92例,阴性62例;HBsAg水平0.06~0.10 U/mL 5例,0.11~0.50 U/mL 5例,0.51~2.50 U/mL 8例,2.51~3.00 U/mL 2例。CLIA法诊断阳性89例,阴性65例;ELISA法诊断阳性78例,阴性76例。CLIA法诊断乙肝的灵敏度、准确度、阴性预测值均高于ELISA法,漏诊率低于ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05)。CLIA法对HBsAg水平0.06~0.10 U/mL的检出率高于ELISA法,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:CLIA法在乙肝中的诊断效能高于ELISA法。

化学发光酶免疫分析(CLEIA)法测定猪肌肉组织中的氯霉素含量

[目的]建立高度灵敏的直接竞争化学发光酶免疫分析(CLEIA)方法,用于检测猪肌肉组织中的氯霉素残留。[方法]用卵清蛋白与氯霉素偶联物作为包被抗原,标准品或样品中氯霉素作为竞争抗原建立直接竞争CLEIA方法。[结果]所建立方法的检测限为0.018ng/ml,而并列的ELISA方法的检测限为0.177ng/ml。猪肌肉组织中氯霉素添加水平为0.1～5.0ng/ml时,CLEIA法的回收率为87%～118%,ELISA法的回收率为81%～107%。CLEIA法的批内和批间变异系数分别为3.22%～5.58%和4.95%～8.86%。[结论]CLEIA方法快速、简单、灵敏度高,适用于极低剂量氯霉素残留的快速检测。

化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附法检测乙肝病毒标志物临床比较化学发光免疫分析

比较CLIA与ELISA测定HBV标志物的差异性。方法 抽取2023年6月—2024年5月本科室诊治的80例HBV感染病患,采用ELISA、CLIA测定HBV标志物,比较2种方法的测定结果,统计阳性率;分析2种方法的诊断准确率;分析2种方法诊断结果的一致性,以CLIA诊断结果为准,计算ELISA对HBV感染诊断的准确率、敏感度、特异度;分析2种方法对低水平HBsAg的测定结果;对比2种方法对测定HBsAg的最低浓度。结果 CLIA测定HBsAg、HBeAg、HBeAb的阳性率高于ELISA,P<0.05;2种方法测定HBsAb、HBcAb的阳性率相近,P>0.05。CLIA对HBV感染诊断的准确率高于ELISA,P<0.05。以CLIA诊断结果为准,经计算,ELISA对HBV感染诊断的准确率、敏感度、特异度分别为86.25%、87.01%、66.67%。CLIA法对低水平HBsAg测定的阳性率高于ELISA法,P<0.05。ELISA测定HBsAg的最低浓度是0.126ng/ml,CLIA是0.032ng/ml,CLIA法更小。结论 CLIA测定HBV标志物的阳性率与准确率高于ELISA,测定的HBsAg最低浓度更小,能够为HBV感染的临床诊断提供更可靠的参考依据。

化学发光免疫分析法与酶联免疫吸附法在乙肝病毒标志物检测结果的比较分析

探讨比较化学发光免疫分析法(ECLlA法)与酶联免疫吸附法(ELISA法)在乙肝病毒标志物检测中的结果。方法 选取我院2023年1月至2023年12月收治的110例乙肝病毒感染患者,所有患者均同时采用ECLlA法与ELISA法进行血清标志物检测,比较两种检测结果及成本。结果 检测结果显示,ECLlA法检测中HBsAg、HBeAb、HBeAg阳性检出率高于ELISA法检测(P<0.05);ECLlA法检测的检测准确性为95.45%,高于ELISA法检测的77.27%(P<0.05);ECLlA法检测的成本为(112.36±8.35)元,高于ELISA法检测的(30.45±2.54)元(P<0.05)。结论 相较于ELISA法来讲,ECLlA法的乙肝五项阳性检出率更高,更有利于乙肝病毒感染的早期诊断,但其检测成本相对会高点,需根据患者个体情况选择合适检测方式。

中药致肾毒性成分马兜铃酸A单抗制备及酶联免疫分析方法的建立

采用活化酯法,将马兜铃酸A分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,得到免疫抗原马兜铃酸A-BSA和包被抗原马兜铃酸A-OVA。利用马兜铃酸A-BSA免疫Balb/c小鼠,制得鼠单克隆抗体1A11,单抗效价为2×104;单抗为IgG1类,轻链为κ型;与其结构类似物马兜铃酸B、C和D的交叉反应率分别为2.8%,3.5%和31.2%。基于抗马兜铃酸A单克隆抗体的间接竞争酶联免疫分析方法(icELISA)的IC50为1.9μg/L,检测范围为0.5～7.5μg/L。icELISA添加回收率为86%～97%,相对标准偏差在5.2%～11.1%之间。利用所建立的icELISA测定了6个中药材和5个中成药中马兜铃酸A的含量,并用高效液相色谱法(HPLC)进行了验证,其中关木通、广防己、天仙藤、马兜铃和青木香中均检测出马兜铃酸A,而川木通和5个中成药中未检测到马兜铃酸A。结果表明:本方法可用于中药中马兜铃酸A的快速检测。

应用酶联免疫技术分析水果中的对硫磷

介绍了水果中对硫磷的酶联免疫分析技术(ELISA).对硫磷在被还原成氨基对硫磷后,经重氮化反应与牛血清白蛋自(BSA)或兔血清白蛋白(RSA)联结,前者作为免疫抗原,后者作为包被抗原,测定水、梨、苹果时的最低检测浓度分别为3ppb、0.15ppm和0.225ppm对硫磷.样品的添加回收率均高于88％.

MAP-H_2O_2-HRP伏安酶联免疫分析新体系的光谱及电化学研究

提出了间氨基酚(MAP)-H_2O_2-辣根过氧化物酶(HRP)伏安酶联免疫分析新体系.本方法以线性扫描二阶导数伏安法检测HRP催化H_2O_2氧化MAP的产物,用于游离HRP和各种HRP标记物的测定,灵敏度均高于经典的ELISA显色光度法.测定游离HRP的线性范围为1.0×10^(-8)～1.0×10^(-6)g/L,检测限达3.8×10^(-9) g/L.制备出了HRP催化H_2O_2氧化MAP的产物纯品,并应用电化学分析,高效液相色谱,元素分析,紫外-可见光谱,红外光谱,~1H核磁共振谱,^(13)C核磁共振谱及质谱等技术对体系酶促反应进行了深入的研究.在选择的酶促反应条件下,生成的产物为2-氨基-5-[(3-羟苯基)氨基]-2,5-环己二烯基-l,4-二酮.提出了酶催化反应机理及其产物的电极还原过程.

酶联免疫吸附法及其在食品分析中的应用

简单介绍了酶联免疫吸附法 (ELISA) ,并且就其在食品分析中的应用进行了较详细的评述 ,主要包括ELISA用于食品微生物、食品中的毒素。

酶联免疫吸附分析法测定食品中的苏丹红Ⅰ号

本研究建立了测定食品中苏丹红Ⅰ号含量的间接竞争酶联免疫分析法。首先对苏丹红Ⅰ号分子作了的修饰,再与载体蛋白交联制得免疫原和包被抗原,经动物免疫制得抗苏丹红Ⅰ号的抗体。在包被抗原为100μg/L,抗体为1:100,000倍稀释,标记二抗为1:15000倍稀释的优化条件下,测得检出限为0.12μg/L,IC50值(标准曲线中吸光度抑制至最大吸光度值的50%时所对应的待测物浓度)为0.74μg/L。苏丹红Ⅰ号在番茄酱和辣椒面中的回收率分别为106%和110%。样品仅需甲醇萃取再用缓冲液简单稀释就可以直接进行ELISA测定。