氧化型琼脂糖凝胶基片结合酶免疫反应的蛋白质分子微阵列

目的 研制适于常规免疫学检验的蛋白质分子微阵列。方法 利用分子组装技术 ,以琼脂糖凝胶为基质 ,于玻片表面制成自组装膜 ,经过碘酸钠氧化后再与戊二醛分子偶联 ,而成为具有双功能分子层的薄膜。基片表面衍生的醛基可与各类抗原 (如重组多肽、磷脂和DNA)、辣根过氧化物酶及抗体分子中的氨基形成Schiff′s碱共价连接。结果 基于上述原理 ,制作生物分子微阵列 ,优选出IgG分子的最佳点样浓度为 10 0 μg/ml,点样量以 5 0nl为宜。通过不同的实验模式 ,成功地在基片表面建立了酶免疫检测体系 ,可敏感特异地检出抗原、抗体分子及酶与底物之间的相互作用。结论 该法最突出的优点在于减少了样本和试剂用量 ,可对多种自身抗体实施高通量的平行分析 ,以酶 底物 (HRP DAB H2 O2 )作为芯片信号显示系统 ,结果较为直观 。

核酸探针与酶免疫反应板定向结合的方法

为了制备一种可供寡核苷酸探针定向结合的酶免疫反应板 ,利用部分水解的尼龙包被酶免疫反应板 ,通过尼龙所含的氨基基团与寡核苷酸探针所含的 5′磷酸基团 ,在水溶性碳二亚胺的催化下 ,与酶免疫反应板发生 5′端特异性定向共价结合 ,并对肺炎支原体的PCR扩增产物进行了重复检测 ,结果重复性好 ,方法稳定 .利用该方法制备的酶免疫反应板可用于核酸探针的临床检测 .

五种丙型肝炎病毒(HCV)基因重组抗原斑点酶免疫反应检测血清抗-HCV

五种丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因重组抗原斑点酶免疫反应检测血清抗－ＨＣＶ谭德明刘双虎胡国龄刘安国刘国珍应用五种丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因重组抗原，包括ＨＣＶ核心蛋白（Ｃｏｒｅ），包膜蛋白１（Ｅ１）、包膜蛋白２（Ｅ２／ＮＳ１）、ＮＳ３和ＮＳ５抗原〔１，２...

NY/MMJ型酶联免疫反应加速仪在高原地区的临床使用

目的在昆明高原地区使用NY/MMJ型酶联免疫反应加速仪,与传统水浴箱两种仪器在使用同种诊断试剂条件下,评价该仪器的临床使用价值。方法依据美国NCCLS方案和《全国临床检验操作规程》,分别对90份乙肝两对半检测、60份丙肝病毒抗体检测、20份癌症标志物定量检测血清实行随机抽样,使用这两种仪器进行孵育反应,并对检测结果进行对比分析。结果NY/MMJ型酶联免疫反应加速仪在酶联免疫吸附分析(ELISA)中缩短反应时间而不影响反应后的结果,同时具有较好的线性、重复性、灵敏度和特异性。结论该仪器操作简易、性能稳定,对临床正确、快速诊断有很大的积极意义。

酶联免疫反应加速仪在酶联免疫反应的实验评价

目的 通过对ELISA方法影响因素的分析,对酶联免疫反应加速仪进行评价.方法 应用正交试验设计对ELISA反应外界影响因素（温度、振动频率、反应时间）的优化,以检测HBsAg为例来进行评价.结果 在ELISA反应的三个影响因素中,振频和反应时间对结果有显著性影响（P〈0.05）,温度虽对结果有一定的影响但无显著性意义;酶联免疫反应加速仪检测HBsAg的最低检出限与常规法都为1 ng/ml,二者差异无统计学显著性意义（P＞0.05）.结论 酶联免疫反应加速仪能够加速反应进行,反应的灵敏度和阳性检出率符合检测要求,而且具有良好的重复性和特异度.

酶联免疫反应加速仪在HIV抗体筛查试验ELISA法中的应用与探讨

随着HIV感染人数的逐年上升,HIV抗体初筛实验室在各县级医院的逐步建立,使得HIV抗体筛查已在县级以上医院作为产前检查和输血前检查的必检项目,而HIV抗体初筛实验室则承担这项繁重而艰巨的任务。ELISA法目前以其在HIV抗体筛查方法中较为敏感的优势成为各HIV抗体 初筛实验室首选使用的初筛方法[1]。但因其多为两步法，检测时间较长，明显影响工作效率。

酶联免疫反应加速仪在麻疹病毒IgM抗体检测中的应用

目的探讨酶联免疫反应加速仪在麻疹病毒IgM抗体检测中的应用价值。方法选取2013年6-12月哈尔滨医科大学附属第一医院儿科疑似麻疹病例血清238份,麻疹病毒IgM抗体阳性血清1份,在酶联免疫吸附试验中分别采用常规温育法（常规法）和酶联免疫反应加速仪法（加速法）进行麻疹病毒IgM抗体的检测,比较两种方法在检测麻疹病毒IgM抗体的重复性、灵敏度及特异性。结果加速法的变异系数（CV）为2.86%-9.52%,灵敏度为97.40%,特异度为100.00%,均符合试剂盒标准;且加速法和常规法对麻疹病毒IgM的定量检测结果呈正相关（P〈0.05）。结论酶联免疫反应加速仪在麻疹病毒IgM抗体检测中,各项指标均符合试剂盒要求,可应用于临床检测。

预制备抗体-DNA偶联物的免疫聚合酶链反应检测HBsAg

目的 探讨一种实用敏感的乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)检测方法。 方法 利用亲和素作为桥梁连接生物素化DNA和抗体 ,形成抗体 亲和素 DNA偶联物。在抗原抗体特异性反应的基础上 ,聚合酶链反应 (PCR)扩增抗体所连的DNA片段 ,通过检测DNA来判断相应抗原存在与否。结果 免疫PCR检测敏感度为常规酶联免疫试剂盒的 30 0倍。结论 预制备抗体

酶联免疫反应加速仪在检测丙肝抗体中的应用

目的探讨酶联免疫反应加速仪在酶联免疫吸附试验（ELISA）检测丙型肝炎抗体中的应用。方法用酶联免疫反应加速仪和常规温育方法同步检测4种不同S／CO的混合血清，同时用实时荧光定量聚合酶链反应法检测临界值水平血清／灰区标本的HCV．RNA，并对结果进行比较分析。结果4种混合血清用两种方法检测的抗-HCV吸光度值（OD值）比较，差异有显著性（P〈0．05）。有3种混合血清定性结果相一致，S／CO为0．9的混合血清用常规温育法检测结果为阴性，用酶联免舨应加速仪检测结果为阳性，而检测20份S／CO为0．9的血清的HCV—RNA含量，其中14份大于1×10^3拷贝／mL。4种混合血清，酶联免疫反应加速仪的OD值CV％分别为2．5、2．0、2．1、2．3，常规温育方法的OD值CV％分别为3．5,4．1、4．0、4．2。结论酶联免疫反应加速仪在确定最佳反应时间条件下，具有加速抗原抗体反应的作用，可以提高ELISA检测的灵敏度，为临床判读“灰区”标本的结果提供可靠依据，避免漏诊。

质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测沙眼衣原体

目的:建立高度灵敏特异的质粒缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法(Gap-LCR-ELISA)检测沙眼衣原体(Chlamy-diatrachomatisCT)。方法:根据CT共有隐蔽性质粒设计并标记4条寡核苷酸探针,对6型CT标准株和鹦鹉热衣原体及其他常见泌尿生殖道病原菌行Gap-LCR-ELISA。结果:质粒Gap-LCR-ELISA可检测出6型CT,并与其他病原体无交叉反应,其最低检测限为2.5个原体(elementarybodiesEB)比PCR敏感10倍。结论:质粒Gap-LCR-ELISA对检测CT感染具有极高的灵敏度和特异度,适宜于我国进行大规模CT流行病学调查。

聚合酶链反应-酶联免疫法筛选孢子丝菌特异性探针

目的筛选出对孢子丝菌结合效率相对较高的探针。方法以50株纯培养的孢子丝菌及标准株为样本,以毛霉、烟曲霉、念珠菌各1株为阴性对照,用聚合酶链反应-酶联免疫法(PCR-ELISA)对已报道的5个孢子丝菌特异性探针(U26852、U26866、U26866'、M85053及AF117945)进行筛选。记录各探针与合成DNA片段杂交底物显色与否及酶免疫测定指数(EI)值。结果 PCR产物测序证实5个探针均位于产物序列上;在相同的ELISA条件下,探针U26852显色最强,EI值最高。结论针对28Sr RNA的探针U26852是目前与孢子丝菌结合效率相对较高的探针。

缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附法检测孕妇沙眼衣原体感染

目的:用缺口-连接酶链反应-酶联免疫吸附(Gap-LCR-ELISA)法检测重庆地区孕妇沙眼衣原体感染,以了解围生期沙眼衣原体(CT)的感染现状。方法:以512名孕妇首段尿(FVU)及配对宫颈刮片为研究对象,按照扩大金标准,采用质粒探针和外膜蛋白探针Gap-LCR-ELISA法用于不同类型临床标本检测CT感染。结果:①孕妇的CT感染呈很强的隐匿性,由扩大金标准所确证的CT真阳性共42例,所检重庆地区孕妇的CT感染率为8.2%(42/512),其中88.1%(37/42)可同时从尿道和生殖道检出CT,而另9.5%(4/42)和2.4%(1/42)仅能单独分别从生殖道或尿道检出。②Gap-LCR-ELISA用质粒与外膜蛋白作为探针检测FVU中CT的敏感性分别为90.48%和71.43%(P<0.05),质粒Gap-LCR-ELISA用于宫颈刮片和FVU两种标本的敏感性分别为97.62%和90.48%(P>0.05),特异性均为100%。结论:质粒Gap-LCR-ELISA法用于孕妇FVU以检测围生期无症状CT感染患者,是一种非侵袭性的、高度敏感特异的、适合于发展中国家和地区进行大规模流行病学调查的方法。

酶联免疫反应加速仪用于ELISA检测CEA和CA242

目的评价酶联免疫反应加速仪用于ELISA检测CEA、CA242的方法。方法采用NY/MMJ ELISA加速仪改进法与常规ELISA法分别检测临床血清标本,评价加速仪改进法的精密度以及两法的相关性和一致性。结果加速仪改进法检测CEA和CA242的批内、批间变异系数(CV)均<8%,批间CV明显优于常规ELISA。改进法与常规法检测CEA、CA242结果的总符合率分别为99.3%和98.6%,Kappa值分别为0.985和0.934。结论加速仪具有加速反应的作用,不影响检测结果,可应用于ELISA方法的改进。

利用酶联免疫反应鉴定梨树S基因型

梨是蔷薇科植物,具有典型的配子体自交不亲和性。获取各品种S基因型是果树生产中一项重要内容。现有S基因型鉴定方法存在一些缺陷。利用通用引物扩增S-RNase高变区,结合单链核苷酸探针杂交、酶联免疫反应,成功鉴定8个品种的7个S基因型。PCR酶联免疫法结果显示爱宕(S2S5),爱甘水(S4S5),二十世纪(S2S4),丰水(S3S5),今村秋(S1S6),新高(S3S9)和幸水(S4S5)7个品种都能与各自对应的S基因型探针杂交结合,颜色反应明显,无明显假阳性反应。秋荣(S4smS5)S4sm-RNase基因在花柱中不表达,只在秋荣花柱中检测到S5-RNase基因信号。与目前已有的方法相比,PCR酶联免疫法操作简单,结果可靠,能够广泛用于梨树S基因型鉴定。

酶联免疫反应加速仪在化学发光法检测HBsAg的临床评价

目的:探讨酶联免疫反应加速仪在化学发光法快速检测HBsAg及患者乙肝两对半的应用效果。方法:用酶联免反应加速仪取代乙型肝炎病毒检测操作步骤中的恒温箱37℃温育,其余操作步骤均相同,同时检测HB-sAg标准品、正常人血清和196例乙肝患者血清两对半标志物。结果:加速仪反应30 min已达最佳实验效果,加速仪的特异性为100%,加速仪反应30 min与恒温箱37℃温育60min实验结果一致。结论:酶联免疫反应加速仪应用于化学发光法检测乙型肝炎病毒标志物具有加速反应功能,可缩短一半反应时间,准确度高,可替代常规温育方法,值得在临床推广使用。

聚合酶链反应-酶联免疫吸附试验检测乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸

目的 :评价聚合酶链反应 -酶联免疫吸附试验 (PCR- EL ISA)测定乙型肝炎病毒 DNA(HBV DNA)的临床应用价值。方法 :采用定量 PCR- EL ISA法和 EL ISA法分别检测 2 0 8例乙型肝炎患者血清的 HBV DNA和 HBV血清标志物(HBVm ) ,3 4份健康体检者作为阴性对照。结果 :血清 HBV DNA含量 >4× 10 6 拷贝 /ml分别是抗 HBc Ig M组、HBe Ag组、抗 HBc组、抗 HBe组和三抗体组 (抗 HBs、抗 HBBe、抗 HBc) ,其 HBV DNA阳性率分别为 10 0 % ,97.75 % ,62 .3 0 % ,41.67% ,16.0 0 %。结论 :PCR- EL ISA法定量检测 HBV DNA具有较强的特异性和灵敏度 ,为临床早期诊断 ,了解乙型肝炎病毒复制情况 。