核酸探针与酶免疫反应板定向结合的方法

为了制备一种可供寡核苷酸探针定向结合的酶免疫反应板 ,利用部分水解的尼龙包被酶免疫反应板 ,通过尼龙所含的氨基基团与寡核苷酸探针所含的 5′磷酸基团 ,在水溶性碳二亚胺的催化下 ,与酶免疫反应板发生 5′端特异性定向共价结合 ,并对肺炎支原体的PCR扩增产物进行了重复检测 ,结果重复性好 ,方法稳定 .利用该方法制备的酶免疫反应板可用于核酸探针的临床检测 .

乙型肝炎病毒YMDD变异不同检测方法比较与评价

目的比较检测乙型肝炎病毒(HBV)YMDD变异的3种不同方法,评价其在监测拉米夫定抗HBV治疗中发生耐药突变的价值。方法对80例接受拉米夫定治疗的慢性乙型肝炎患者,测定其治疗前后血清HBVDNA含量、ALT水平变化,分别用聚合酶链反应微板核酸杂交-酶联免疫吸附法(PCR-ELISA)、通用模板信号扩增(UT-PCR)技术、以及基因测序3种方法进行HBVYMDD变异检测,并分析结果。结果80例患者用基因测序法检测出34例发生YMDD变异,变异发生率为41.25%;用PCR-ELISA法检测出21例变异阳性,与基因测序检测出的阳性率差异有显著性(χ2=4.68,P<0.05),两者结果的符合率为61.76%;用UT-PCR法检测出33例变异阳性,与基因测序检测出的阳性率无统计学差异(χ2=0.03,P>0.05),两者结果的符合率为97.06%。结论基因测序和UT-PCR方法检测HBVYMDD变异非常可靠,是监测拉米夫定耐药株的非常有效的方法,UT-PCR方法更适合临床应用,而PCR-ELISA方法需提高其敏感性。