双抗夹心酶免疫检测法快速鉴定天花粉真伪的研究

目的:以天花粉蛋白(TCS)为定性检测指标,建立快速鉴定天花粉药材真伪的方法。方法:以TCS为免疫抗原分别免疫新西兰大耳兔及Bal b/c雌性小鼠,收集免疫后的兔血清;通过杂交小鼠骨髓瘤细胞技术制备抗TCS的单克隆抗体。利用多克隆抗体和单克隆抗体建立检测TCS的双抗夹心酶免疫检测方法,并通过棋盘格法优选最佳反应条件。将所建立的方法实测不同产地天花粉药材及其混伪品,利用药材吸光值(A)与空白对照吸光值(A_(0))之比作为药材真伪评判指标。结果:所建立的双抗夹心酶免疫检测方法最佳反应条件为:兔血清稀释倍数为500倍、单克隆抗体浓度为1.0μg/mL、酶标二抗浓度为2μg/mL。通过对真实样品的检测,发现天花粉正品吸光值明显高于混伪品,且正品天花粉A/A_(0)>2.0,混伪品A/A_(0)<2.0。结论:所建立的TCS双抗夹心酶免疫检测方法可实现天花粉真伪的快速鉴别,且样品处理简单、检测效率高,具有推广应用价值。

微粒子酶免疫检测法测定血中FK506的浓度

为探讨微粒子酶免疫检测法(MEIA)测定全血中FK506浓度的可行性和准确性,采用微粒子酶免疫检测法,对血样中的FK506浓度进行检测。用本法检测的血液FK506浓度的结果,其回收率、精密度等均符合要求。说明微粒子酶免疫检测法用于全血中FK506的浓度测定,操作简便、快速、自动化程度高,适用于临床大量样品的测定。

转基因作物pat蛋白的双抗体夹心酶联免疫检测方法研究

将克隆到的pat基因构建原核表达载体pET30（＋）-pat并在大肠杆菌中进行表达，分离纯化得到高纯度pat蛋白。用所得到的pat蛋白制备了兔多克隆抗体和鼠单抗2F6。多抗效价〉8000，单抗效价为5×10^4；单抗为IgGl类，轻链为，（型。基于抗pat蛋白单克隆抗体和兔多克隆抗体建立了双抗夹心酶联免疫分析方法（SandwichELISA）。检测范围为1．6～100μg／L，线性回归方程y=0．6914x-2．572，决定系数为0．9951。用所建立的方法测定了5个转基因抗虫棉和2个非转基因棉花品种叶片中pat蛋白的含量，其中转基因抗虫棉中的3个品种检测出pat蛋白，其余均未检出pat蛋白。

呋喃唑酮代谢物间接竞争酶联免疫检测方法的研究

建立了呋喃唑酮代谢物间接竞争酶联免疫检测法。用活化酯法将卵清蛋白和半抗原连接成为包被原,对包被原和单克隆抗体的稀释倍数,封闭液浓度、竞争时间、酶标二抗孵育时间和显色反应时间进行优化,同时通过灵敏度、特异性、精密度和准确度等指标进行方法学评价。结果显示,最佳条件为:包被原和单克隆抗体稀释倍数分别为800倍和6 400倍,封闭液是1%脱脂乳,竞争时间是60 min,辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗孵育时间是45 min,显色时间是15 min。通过建立的标准曲线计算得到线性方程是Y=-0.253X+1.336(R2=0.995),IC50是2.015 ng/m L,线性范围是0.131~30.911 ng/m L,空白猪肉添加回收率是84.8%~90.3%,批内和批间变异系数分别为3.3%~4.1%和4.6%~6.7%。此方法特异性强,准确性、精密度和重现性均良好,可用于动物源性食品中呋喃唑酮代谢物的快速筛查。

呋喃它酮代谢物间接竞争酶联免疫检测方法的建立

目的建立呋喃它酮代谢物5-甲基吗啉-3-氨基-2-唑烷基酮(5-morpholine-methyl-3-amino-2-oxazolidinone,AMOZ)间接竞争酶联免疫检测法。方法通过衍生化反应制备了人工抗原CPAMOZ并用活化酯法将其与鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)连接成为包被原CPAMOZ-OVA。对包被原和单克隆抗体的最佳工作浓度、封闭液浓度、竞争时间、辣根过氧化物酶标记羊抗鼠二抗(horseradish peroxidase labelled goat antimouse Ig G conjugate,HRP-Ig G)、孵育时间和显色反应时间进行优化,并对方法灵敏度、特异性、精密度和准确度进行方法学评价。结果最优条件下,包被原和单克隆抗体稀释倍数分别为500倍和2000倍,封闭液浓度为2%,竞争时间为30 min,二抗孵育时间为30 min,显色时间为15 min。所建立标准曲线的对应线性方程是Y=-0.439X+0.670(r^2=0.992),IC_50为2.439 ng/m L,线性范围为0.506~11.765 ng/m L,回收率为86.7%~90.1%,批内和批间变异系数分别为1.4%~5.8%和2.1%~4.9%。结论该方法特异性强,准确性、精密度和重现性良好,可用于对AMOZ的快速筛查。

PCR产物酶联免疫检测法在临床检验中应用效果分析

目的:探究PCR产物酶联免疫检测法检测的临床应用效果。方法:对PCR产物进行微孔板技术、酶联免疫法、PCR杂交联合检测,分析检测结果对临床疾病的诊断价值。结果:PCR产物检测可以诊断结核分枝杆菌、肺炎支原体、人乳头瘤病毒、百日咳杆菌等多种病菌的引起的疾病,在临床疾病诊断中具有重要作用。结论:PCR产物采用酶联免疫检测法检测操作简单,受主观因素影响小,特异性高,稳定性强,具有较高的临床检验价值。

黄衣红曲中黄曲霉毒素B1的酶联免疫检测法

本文报道了ELISA方法测定福建大田县传统工艺生产的酿酒用黄衣红曲中黄曲霉毒素B1含量。随机抽取了四个生产厂家的样品进行分析,检测结果表明四个黄衣红曲的样品所含黄曲霉毒素B1含量均低于国家食品安全限量标准,处于安全范围之内。

探讨PCR产物酶联免疫检测法在乳腺癌临床检验中的临床价值

目的探析在乳腺癌临床检验中应用聚合酶链式反应(PCR)产物酶联免疫法的临床效果与价值。方法此次研究对象为该院2018年11月至2019年11月期间收治的60例乳腺癌患者,均应用PCR产物酶联免疫法对患者进行检测。以手术病理检查结果作为诊断金标准,对比两种检查方式(PCR产物酶联免疫检测法、手术病理检查)的诊断符合率、灵敏度与特异度。结果PCR产物酶联免疫检测法的诊断符合率为95.00%,灵敏度为96.49%,特异度为66.67%。结论在乳腺癌患者临床检验中应用PCR产物酶联免疫检测法,可促进诊断结果准确性的提高,并为患者治疗方案的制定提供参考。

高度灵敏的SEB化学发光酶联免疫检测法的建立及其在多种基质中的应用

金黄色葡萄球菌肠毒素B（Staphylococcal enterotoxin B，SEB）是金黄色葡萄球菌分泌的细菌外毒素。sEB引起的食物中毒在细菌性食物中毒中占有很高的比例，其半数致死剂量（LD50）约20ng／kg，半数有效剂量（ED30）约0．4ng／kg，可以致残。SEB性质稳定，易于制备，能够以气溶胶的形式散布，被美同疾病控制中心确定为B类生物战剂。因此，在食物、水源和人的体液中能检测出低剂量SEB的高灵敏度和高特异性的方法，对食品安全卫生和反恐怖战争具有十分重要的意义。我们建立了具有高度灵敏性和特异性的SEB微孔板式化学发光酶联免疫检测法（micro-plate chemiluminescent immunoassay，MP-CLEIA）。本研究中，我们使用常规方法制备了20株针对SEB分子的单克隆抗体，并进行了腹水效价测定和抗体表位鉴定，从中筛选m两株效价高、特异性强、分属不同表位组的两株单抗组成抗体配对，并对CI．EIA的反应条件进行了优化。本方法的线性动力学范围在0．0l～5ng／ml之间，实际可测的检测限（1imit of deteclion，LOD）达到0．01ng／ml，批内和批问变异均小于13％。本方法特异性强，与SEA、SEC1和SED之间不存在交叉反应，可用于不同基质中SEB的检测，如污水、自来水、河水等环境基质；烤牛肉、花生酱、熏火腿、10％脱脂奶粉、牛奶、橙汁等食品堪质；人尿液、血清等体液基质。我们建立的微孔板式CLEIA检测sEB的方法具有高特异性、高灵敏度、操作简单等优点，在公共卫生和军事侦察领域具有广阔的应用前景。

HPV新型夹心酶联免疫检测法的建立及验证

目的建立一个新型夹心酶联免疫检测系统,为宫颈涂片中高危HPV病毒的检测提供参考。方法使用兔抗HPV16/18/45 E7蛋白的兔单克隆抗体作为包被抗体,使用生物素化的多克隆山羊抗血清作为第二抗体,利用夹心ELISA分别对HPV 16/18/45 E7重组蛋白、宫颈癌细胞和宫颈涂片裂解液中的HPV进行检测。结果确定每孔0.5 pg的HPV 16/18/45 E7蛋白含量为检测限。宫颈涂片HPV检测结果显示,15个为阳性(HPV 16:12个;HPV 18:10个),35个为阴性,与其HPV DNA分型一致。结论本研究建立并验证的新型夹心ELISA法可用来检测3种最普遍的宫颈癌高危HPV类型中的E7蛋白,值得在临床检测中推广。

抗人AFP单克隆抗体酶联免疫检测法

AFP的定量测定,在临床上主要用于原发性肝癌和胎儿神经管缺损畸形的早期诊断。检测AFP常用的方法为放射免疫分析法。为寻求一种更特异、敏感、快速的检测方法,浙江省医学科学院生物工程所采用高度特异的抗人AFP单克隆抗体与兔抗人AFP多克隆抗体相结合,建立一种适用于临床检测AFP的酶联免疫检测法。其敏感度达10μg/ml,标准曲线呈较好的线性关系。变异系数均【10％,说明方法具有较好的重复性。用该法检测63名献血员AFP【10μg/ml 54名,10～20μg/ml 8名;乙肝18例,【10μg/ml 15例,10～20μg/ml 2例;50～100μg/ml1例;甲肝20例,【 10μg/ml 18例,10～20μg/ml 2例;肝癌 22例,200～300μg/ml 9例,】400μg/ml 13例。

酶联免疫法定量检测市售燕窝及其加工制品中特征蛋白含量

燕窝唾液酸糖蛋白是一种燕窝特征蛋白,在燕窝中高丰度存在且热稳定。其含量的高低指示了燕窝的掺伪情况以及燕窝制品中燕窝的添加量。通过竞争酶联免疫检测方法对市售燕盏及其加工制品中的燕窝唾液酸糖蛋白含量进行调查,结果显示燕窝专柜、农批市场、餐馆等各个环节无论是50元以上包装精美的高档燕盏,还是10元左右的低价散装产品均存在唾液酸糖蛋白含量较低的样品。唾液酸糖蛋白含量和燕窝制品的单价总体上呈正相关,部分燕窝制品未检出燕窝唾液酸糖蛋白。

PCR产物酶联免疫检测法在乳腺癌临床检验中的应用价值

目的:分析PCR产物酶联免疫检测法在乳腺癌临床检验中的应用价值。方法:选取75例乳腺癌患者作为研究对象,对纳入研究的患者进行PCR产物酶联免疫检测,以手术病理检查结果作为诊断金标准,分析PCR产物酶联免疫检测对乳腺癌的诊断效能。结果:PCR产物酶联免疫检测诊断乳腺癌的准确度为98.67%(74/75),敏感度为98.67%(74/75)。结论:PCR产物酶联免疫检测法诊断乳腺癌的准确度及敏感度均较高,可为临床治疗方案的确定及实施提供可靠依据。

酶联免疫吸附法检测鸡蛋中三聚氰胺的残留

将三聚氰胺与琥珀酸酐反应以合成半抗原,再采用混合酸酐法合成人工完全抗原,然后免疫新西兰白兔获得针对三聚氰胺的特异性抗体(IC50为42 ng/mL),以此抗体为核心建立了检测三聚氰胺的间接竞争酶联免疫吸附检测法,检测限为8.5 ng/mL。鸡蛋样品以氨化乙腈提取,正己烷去脂,微孔滤膜过滤后检测;在空白样品中添加不同浓度的三聚氰胺,回收率范围为88.9%～96.1%,变异系数小于11.6%。表明:酶联免疫吸附法,快速、简便且灵敏,可作为鸡蛋或其他动物性食品中三聚氰胺残留的常规筛选方法。

微粒子酶免法检测献血者的巨细胞病毒感染情况

目的探讨全自动快速微粒子酶免分析法 (MEIA)在检测献血者巨细胞病毒 (CMV)感染的意义。方法采用MEIA法检测207例献血者巨细胞病毒(CMV)IgG、IgM。结果CMVIgG阳性率为97.6 %,IgM为13.0 %,后者不同性别间有明显差别。结论MEIA具有特异性强 ,灵敏度高 ,重复性好 ,快速简便等优点 ,为目前最新最理想的CMVIgG、IgM检测方法。

小鼠生物法和酶联免疫法(ELISA)定量监测沿海5省养殖河豚鱼中的河豚毒素(TTX)

为进一步扩大国内养殖河豚鱼消费市场提供依据,应用小鼠生物法监测了我国辽宁、河北、山东,江苏和福建4种养殖河豚鱼(红鳍东方鲀,菊黄东方鲀,双斑东方鲀和暗纹东方鲀4种组织(皮、肉、肝脏和性腺)中河豚毒素(TTX)含量及周年变化,并用酶联免疫法(ELISA)同步检测了山东红鳍东方鲀的皮,肉和肝脏各组及个别卵巢样品。结果4种养殖河豚鱼的皮,肉和肝脏每组平均含毒量均属无毒(小鼠生物法检测结果小于0.5μg/g,ELISA检测结果小于0.8μg/g)。卵巢发现一强毒例,精巢则全部无毒。通过监测,发现养殖河豚鱼组织器官的毒力呈现一定的周年变化。ELISA法与小鼠生物试验测得的结果相符合。养殖河豚鱼皮,肉和精巢认为可以考虑科学安全的利用,肝脏须谨慎对待,由于养殖河豚鱼上市规格较小,卵巢一般无食用意义,加工过程应注意不要污染可食部分。

直接竞争酶联免疫法测定呋喃妥因代谢物

目的建立动物组织中呋喃妥因代谢物1-氨基乙内酰脲的直接竞争酶联免疫(ELISA)检测法,为检测食品中呋喃妥因代谢物残留提供快速检测的方法。方法采用活化酯法制备辣根过氧化物酶标记抗原,并用棋盘法确定酶标抗原和抗体的稀释度,优化反应条件,建立检测呋喃妥因代谢物的直接竞争酶联免疫法,并对其进行方法学评价。结果该方法的线性方程为Y=-34.723X+158.01(r2=0.9922),线性检测范围为0.177~11.508ng/m L,IC50为1.291 ng/m L;猪肉、鸡肉、鱼肉的最低检测限分别为0.115、0.113、0.109μg/kg,加标回收率在82.6%~104.7%之间,批内变异系数在3.6%~9.3%之间,批间变异系数在4.3%~12.4%之间。结论本方法快速准确,适用于动物组织中呋喃妥因代谢物的检测。

牛布鲁氏杆菌病的间接酶联免疫快速检测

本文通过制备布鲁氏杆菌菌壁抗原,建立了牛布鲁氏菌病的间接酶联免疫检测方法,应用虎红平板凝集试验方法、补体结合试验、间接酶联免疫吸附试验方法对145份牛血清进行了布鲁氏菌病的检验,间接酶联免疫吸附试验检出率最高,虎红平板凝集试验与补体结合试验的结果符合率为95.6%,虎红平板凝集试验与间接酶联免疫吸附试验的结果符合率为96.7%,补体结合试验与间接酶联免疫吸附试验的结果符合率为92.7%。结果表明间接酶联免疫吸附试验方法特异性较强,具有检测快速、灵敏、准确等优点。