人C-反应蛋白磁微粒化学发光酶免疫测定法的建立

人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是炎症以及各种相关疾病如病毒感染、心血管疾病等诊断、治疗和预后的临床检测指标。为了建立一种快速、准确的CRP定量免疫测定方法,将表达纯化的重组CRP作为抗原免疫小鼠,获得了5株稳定分泌抗体的单克隆抗体细胞株,采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)初步鉴定筛选的抗人CRP单克隆抗体,并分别选择mAb 9D6和mAb 9G4作为捕获抗体与检测抗体,建立用于人CRP检测的化学发光酶免疫测定法(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),最后通过测定分析临床血清CRP样本,评价CLEIA的性能。结果显示,基于9D6/9G4-AP单克隆抗体对的CLEIA测定范围为0.1767~500μg/L(可扩展至100 mg/L);所建立的CLEIA与医院采用的免疫散射比浊法(R^(2):0.9496,P<0.0001)表现出良好的相关性,且Bland-Altman分析中96.36%(106/110)的点在95%一致性界限范围内显示两种检测方法具有较好的一致性。结果初步表明,建立的分析方法在临床诊断中具有较好的应用前景。

用酶免疫测定法检测鱼害粘球菌的试验

本文介绍了不标记抗体酶免疫测定法检测鱼害粘球菌烂鳃病的试验结果。试验表明,鱼害粘球菌不同菌株的菌体都能与其各特异抗血清交叉反应,用酶标记显示棕色,获得阳性反应,其细长弯曲的菌体形态在光学显微镜下清晰可见。用正常兔血清或含吐温20 0.1M,pH7.4的磷酸缓冲液或吸收血清,或用Cg25和 Cg27菌株代替鱼害粘球菌的对照组,酶标记都呈阴性反应,菌体不呈棕色,在光学显微镜下观察有明显差别。以健康草鱼鳃上的粘液作对照试验,粘液本身呈淡黄色,只有红血球呈深棕色。 这种检测法对粘细菌病的流行病学调查或用于诊断鱼病有一定实际意义。这一检测技木对其他鱼类的病毒病的病原定位、传染源、传染途径的探索,以及对细菌性鱼病或寄生虫鱼病的研究也可能是适用的。

以合成多肽为抗原检测EB病毒抗体的酶免疫测定法

用固相合成肽方法合成了３ 个ＥＢＶ多肽抗原， 建立了测定ＥＢ病毒抗体的酶免疫测定法。共测定４５ 份鼻咽癌病人血清标本， 阳性率为８９％ 。本方法观察结果方便， 操作简单， 试剂稳定。

人粒细胞弹性蛋白酶的酶免疫测定法及其临床意义

近几年来发现,中性粒细胞在多种疾病的发病学中有广泛的作用。粒细胞弹性蛋白酶(neutrophil elastase, NE)是粒细胞嗜天青颗粒中的一种作用范围广、水解能力强的蛋白水解酶,与急慢性炎症及多种组织损伤性疾病的发生有密切关系。我们建立了一种测量人血浆NE的酶免疫——生物素法,需血浆量为20μl。正常不吸烟成人血浆NE含量为33.7±6.7ng/ml((?)±SD);慢性阻塞性肺疾患病人为48.0±10.9ng/ml;皮肤化脓性感染病人为69.1±15.7ng/ml,系统性红斑狼疮病人为61.0±13.9ng/ml;而再生障碍性贫血病人仅12.3±5.3ng/ml,这些结果与正常人相比均有显著差异。作者认为;本方法特异性好,灵敏度可达毫微克水平,可望作为探讨NE在疾病发生中的作用及监测某些疾病变化的较好指标。

采用体外酶免疫测定法对重庆地区40例哮喘患者进行过敏原的检测分析

目的 采用体外酶免疫检测方法测定哮喘患者的过敏情况 ,以了解重庆地区过敏性哮喘患者常见过敏原的发生情况。方法 抽取哮喘病人静脉血 2ml,30 0 0rpm 10min分离血清 ,吸取 0 4 μl血清入反应管 ,室温孵育 10 0min后 ,去除管内血清 ,用 1ml清洗液清洗 ,再加入结合液孵育 16h ,去除结合液 ,再用清洗液清洗 ,加入底物 /指示剂 ,0～ 90min观察颜色变化。结果 对重庆地区 4 0例支气管哮喘病人进行 7种抗原的检查 ,过敏原的阳性检出率 95 % ,32名患者均对 2种以上的过敏原出现阳性反应。 4 0例患者中有 38例IgE呈阳性升高 ,占 95 % ;屋尘阳性 14例 ,占 35 0 % ,尘螨 /粉螨阳性 17例 ,占 4 2 5 % ,霉菌 (点青霉、交链孢霉、黑根霉 ) 11例 ,占 2 7 5 % ;秋季花粉 (普通豚草、巨大豚草 ) 5例 ,占 12 5 % ,秋季花粉 2 (蒿属植物、艾蒿 ) 13例 ,占 32 5 % ,春季花粉 (榆树、柳树、杨树 )阳性 5例 ,占 12 5 %。结论 过敏性哮喘患者IgE普遍升高 (95 % ) ,重庆地区致敏原以“螨类”引起的哮喘最为常见 ,其次为屋尘和蒿属类。这可能与重庆地区地处盆地 ,气候温暖潮湿 。

酶免疫测定法对外周血单个核细胞内IL-4的检测

目的 :评价酶免疫测定法检测人产生IL 4的单个核细胞的有效性。方法 :使用酶免疫测定法和流式细胞术测定类风湿性关节炎患者 (RA组 )和正常人 (对照组 )外周血单个核细胞中产生IL 4的细胞数。结果 :用两种方法测各组所得结果均高度相关 (患者组r=0 .95 7,对照组r =0 .96 9) ;与对照组相比 ,RA患者产生IL 4的细胞数明显升高 (t=2 .478,P <0 0 5 )。结论 :酶免疫测定法可代替流式细胞术测定胞内细胞因子 ,并可用于临床Th1和Th2分群。

酶免疫测定法检测粪便中的Hp的临床价值

目的 对酶免疫测定法检测Hp粪便抗原 (HpSA)诊断Hp感染的准确性进行临床评估。方法 采用酶联免疫分析法检测 6 8例因上消化道症状接受胃镜检查病人的HpSA及 2 0例Hp阳性的消化性溃疡病人 ,行Hp根除治疗后 1月查HpSA。同时所有患者都行快速尿素酶 ,组织学检查印证。结果 在快速尿素酶、组织学检查均阳性的 43例中、HpSA检测为阳性 40例 ,阴性 3例 ;而在快速尿素酶、组织学均阴性 45例中 ,HpSA检测阴性的有 43例 ,阳性 2例。HpSA检测诊断Hp感染的敏感生、特异性及准确性分别为 93% (40 /4 3) ,95 6 % (43/4 5 )和 93 2 % (82 /88)。结论 HpSA检测是一种无创伤性的准确的可供以诊断Hp感染的方法 。

酶免疫测定法检测粪便孕酮进行母猪早期妊娠诊断的研究

粪便中孕酮含量是判断母猪卵巢机能状态的重要指标,应用粪样孕酮酶免疫法可以对母猪进行早孕诊断。由实验结果可知,配种后母猪粪便中孕酮的含量超过150 ng/g粪样时,就可确认其妊娠;小于150 ng/g时,可确认其空怀。对164头配种后21～25 d的母猪进行了检测,早孕诊断的准确率为95.9%(138/146),空怀诊断的准确率为72%(13/18)。母猪粪便孕酮酶免疫法进行早期妊娠诊断有较高的临床适用性,对提高母猪繁殖率和猪场经济效益具有重要意义。

ELISA结合微粒子酶免疫测定法检测低水平HBsAg结果分析

目的探讨ELISA结合微粒子酶免疫测定法(MEIA)对低水平HBsAg检测的结果影响,以指导临床工作。方法对2004年5—7月门诊体检及非因乙型肝炎住院的患者,采用ELISA检测,HBsAg浓度小于5μg/L(2.10≤S/N<9.39)的弱阳性血清标本共238例,采用MEIA法及中和确认试验进行检测。结果ELISA检测弱阳性标本238例中,MEIA检测结果有6例被判为阴性(S/N<2.00),16例被判为<1μg/L的阳性(2.00≤S/N<21.6),其余216例均被判为≥1μg/L的阳性(S/N≥21.6)。被MEIA判为阴性的6例血清标本经MEIA中和确认试验检测这6例仍为阴性(平均中和率35.85%)。被MEIA判为小于1μg/L阳性的16例血清标本经MEIA中和确认试验有15例确认为阳性,1例为阴性(平均中和率45.02%)。结论用ELISA结合MEIA及其中和确认试验检测低水平HBsAg不失为一种经济有效的好办法,对提高血清HBsAg检测的灵敏度,提高乙型肝炎的确诊率与治愈率,具有重要的临床及流行病学意义。

母猪粪便孕酮酶免疫测定法的建立及其初步应用

粪样中孕酮含量是判断母猪卵巢机能状态的重要指标。本试验建立了粪样孕酮酶免法：检测灵敏度为0．2ng／mL，回收率为95．78％，板内和板间变异系数分别为6．8％（n=9）和11．23％（n=8），用50％置换法测得孕酮抗体与雌二醇、雌三醇、雌酮交叉反应率均小于0．01％，与睾酮交叉反应率为0．35％。将该方法用于测定母猪粪样中孕酮含量。结果表明：所建立的方法简便实用，可以用于母猪发情检查、妊娠诊断及卵巢机能监控。

呼吸道合胞病毒抗原酶免疫测定法的临床评价

RSV是婴幼儿急性下呼吸道感染的主要病因。感染的症状可以分为从较轻的感冒到支气管炎或支气管肺炎。 RSV感染的流行发生在每年的晚秋至早春。流行病学研究证明,暴露于首次流行中的婴儿,约50％受到RSV感染;两次流行后,几乎全部儿童被感染。支气管炎年发病总数的85％和支气管肺炎年发病总数的35％是由RSV所致。一岁以下因支气管炎而住院的患儿中,40％是由RSV引起的。一岁以下婴儿中,因感染RSV而住院的约占1—2％。院内感染RSV也是儿科至关重要的问题。

酶免疫测定法在激素测定中的应用

近年来,以单克隆抗体、酶标记抗原及对应底物为主要测定系统的酶免疫测定法用于生物样品中激素含量的测定,为药代动力学和临床药学等学科的研究提供了一种新的方法。

酶免疫测定法的定量分析在预测高低危人群HIV感染的价值(摘要)

应用传统的 EIA 筛选和 WB 证实试验对22,823例血清标本进行测定,根据可能感染 HIV 的危险程度把来自这些标本的人群分为三组:(1)男性同性恋或双性恋者,(2)有静脉内使用毒品者,(3)非上述二者的异性恋者,共检出1747例阳性(7.7%),其中(1)组阳性率32.4%(1645/5067),(2)组阳性率2.4%(53/2254),(3)组阳性率0.3%(49/15502)。

尿视黄醇结合蛋白酶免疫测定法的建立和初步应用

我们自制兔（抗人ＲＢＰ）ＩｇＧ－ＨＲＰ酶标记物，建立了一种灵敏、简便、可靠的尿视黄醇结合蛋白（ＲＢＰ）双抗体夹心酶免疫测定法。方法灵敏度为０．４ｎｇ／ｍｌ；批内Ｃ．Ｖ．６．３％，批间Ｃ．Ｖ．１４．１％；工作范围０．４～５０ｎｇ／ｍｌ。本法的１００例正常健康人（２０～７４岁，平均４６岁）的尿ＲＢＰ值，以μｇ／ｍｍｏｌＣｒ表示，其算术均数（）±标准差（ｓ）为１１．２±６．０１；几何均数和９５％位点分别为９．５和２２。１０２例尿Ａ１ｂ正常的糖尿病患者，其尿ＲＢＰ值为４５．３±１０５．７μｇ／ｍｍｏｌＣｒ，较正常人明显增高（Ｐ＜０．００１），其中４０例（占３９．３％）高于正常上限。２５例肾功能正常的慢性肾盂肾炎中有２１例（占８４％）以及２４例其它各种肾小管间质疾病中的２２例（占９１．７％），尿ＲＢＰ值超越正常上限。肾小管损害可以是糖尿病肾病的一种早期症状。尿ＲＢＰ是近曲肾小管损害的一项敏感指标，对肾小管间质疾病的早期诊断具有重要价值。

异常凝血酶原酶免疫测定法作为肝癌标志物的研究

新近越来越多的临床研究资料表明,异常凝血酶原对原发性肝细胞癌(HCC)具有相当的诊断意义[1,2].本文采用酶免疫测定法检测1*!026例各种良恶性疾病患者血浆异常凝血酶原,进一步探讨异常凝血酶原作为HCC标志物的应用价值.

尿微量转铁蛋白酶免疫测定法及其临床应用

为了及时对糖尿病肾病进行早期诊断，建立了一种敏感、简便、可靠的尿微量转铁蛋白（ＴＲＦ）酶免疫测定法。工作范围０．５～１２８μｇ／Ｌ，检出限０．２６μｇ／Ｌ，批内变异系数（ＣＶ）６．３％，批间ＣＶ８．８％，回收率９７．３％。８０例正常健康人的尿ＴＲＦ值以μｇ／ｍｍｏｌＣｒ表示，其均数、几何均数、中位数和９５％位数分别为４４．９、３６．１、３２．３和１２７．５。正常人、糖尿病和肾小球疾病的尿ＴＲＦ和尿白蛋白（Ａ１ｂ）之间均呈现显著正相关性（ｒ＝０．６０～０．８６，Ｐ＜０．０１～０．００１）；疾病组中，尿ＴＲＦ增高幅度较尿Ａｌｂ增高幅度大。尿ＴＲＦ是一种肾小球滤过功能不全的敏感指标。

以新单克隆抗体为基础的酶免疫测定法检测血浆ADAMTS 13活性浓度

背景ADAMTS13能特异性裂解大的血管假性血友病因子（VWF）多聚体，后者在高切应力下能诱发血小板性血栓形成。伴有血栓性血小板减少性紫癜（TTP）的病人ADAMTS 13活性低下。测定血浆中ADAMTS 13活性浓度是鉴别诊断血栓形成性微血管病的前提。本文介绍一种独特的高灵敏度的测定ADAMTS 13活性的酶免疫分析法（EIA）。研究设计与方法ADAMTS 13水解VWF中Y1605和M1606之间的肽键。

母猪粪便孕酮酶免疫测定法的建立及其初步应用

粪样中孕酮含量是判断母猪卵巢机能状态的重要指标。本试验建立了粪样孕酮酶免法:检测灵敏度为0.2 ng/mL,回收率为95.78%,板内和板间变异系数分别为6.8%(n=9)和11.23%(n=8),用50%置换法测得孕酮抗体与雌二醇、雌三醇、雌酮交叉反应率均小于0.01%,与睾酮交叉反应率为0.35%。将该方法用于测定母猪粪样中孕酮含量。结果表明:所建立的方法简便实用,可以用于母猪发情检查、妊娠诊断及卵巢机能监控。

克隆酶供体免疫测定法在环孢菌素A浓度监测中的应用

目的 评价用自动生化分析仪测定全血环孢菌素A(cyclosporineA ,CsA)浓度的克隆酶供体免疫测定 (CEDIA)方法。方法 分析测定CEDIA方法的精密度、灵敏度、线性、准确性 (回收实验 )以及与荧光偏振免疫分析法 (FPIA/TDx)和酶扩大免疫测定法 (EMIT)之间的相关性。结果 CEDIA测定的批内CV分别为 1.8% (4 5 5 .7μg/L)、2 .2 9% (2 70 .5 μg/L)和 7.0 % (73.8μg/L) ;最低检出限为 7.0 μg/L ;测定线性范围可达 180 0 μg/L ;平均回收率为 99.4 % ;CEDIA法与FPIA/TDx和EMIT法进行对比 ,相关系数分别为 0 .931和 0 .94 5。结论 CEDIA方法测定CsA血液浓度具有操作简便、标本不需繁琐的前处理、精密度好和较宽的分析范围等特点 。