用同工酶分析法鉴定苜蓿品种的探讨

一、前言 我国有许多优良的苜蓿地方品种，但长期以来，随着苜蓿品种引种和品种资源交流，使现有的一些苜蓿品种在名称上和来源上造成混乱，而且至今未能建立起有效的鉴定方法和标准。过去鉴定牧草和饩物品种，主要根据植株和种子的外部形态特征，这在许多牧草品种鉴定上是非常困难的。

放射酶分析法检测红细胞胰岛素降解酶活性

本文采用放射酶分析法检测红细胞胰岛素降解酶活性（ＥＩＤＥＡ）。该方法应用方便、灵敏度极高、结果准确。并对酶反应最佳条件进行了实验探讨，底物Ｋｍ为０．０９ｍＵ／ｍｌ，最适ｐＨ值７．４０，延滞期２５分钟，２５～４０分钟测得ＢＩＤＥＡ基本一致。批内ＣＶ为３．０的，批间ＣＶ为３．３％。氯化物、ＥＤＴＡ可抑制该酶活性。５０例健康人红细胞胰岛素酶活性为８０，１８±１３．８０Ｕ／ｍｇＨｂ，无性别、年龄差异。

简议酶分析法

简要介绍了酶分析法及其在部分领域的应用。

酶分析法在乳品工业上的应用

本文简述了通过测定牛乳中的碱性磷酸酶、乳过氧化物酶 ,过氧化氢酶、黄嘌呤氧化酶、还原酶等酶的活力 。

环境污染物监测的酶分析法

大多数酶分析法应用在临床化学和生物分析化学领域。本文介绍环境污染监测中的酶分析法。一。

应用免疫酶分析法测定抗口蹄疫免疫力

应用疫苗制品时免疫强度和免疫期限的测定,是实用免疫学的任务之一。解决这一任务的一条可能性途径就是测定特异性免疫球蛋白的水平。牛的免疫球蛋白是一些执行抗体功能的异种蛋白质。由特定结构和功能所区分的三类主要免疫球蛋白(C、M、A)中,免疫球蛋白 G

利用免疫酶分析法研究小麦对叶锈病的不完全抗性

本文用免疫酶分析法进行比较,研究了小麦植株上叶锈病病原小种的发生速度及小麦对该病不完全抗性的差异。结果表明,具有不完全抗性品种之叶片病原菌发生速度比易感染植株缓慢得多。对所有研究的病原菌生物型小种的抑制程度大致相同。

应用免疫酶分析法诊断鸡法氏囊炎

鸡传染性法氏囊炎多发于2—15周龄的幼鸡。侵害淋巴器官,从而产生免疫抑制。过去常用中和反应和扩散沉淀反应来诊断本病,但耗资大,费力费时且敏感性低。因而,作者采用了森得维契免疫酶分析法封闭变法。结果表明,35—40日龄的幼鸡在受感染后第4天的抗原效价最高,在用甲醛溶液和二巯氮丙啶溶液灭活病毒时效果良好。

半抗原直接包被的四环素酶联免疫吸附分析法的建立

为建立更优的四环素(tetracycline,TC)酶联免疫吸附分析法(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA),将TC与蛋白质偶联制备人工完全抗原免疫BALB/c小鼠,获得抗TC的单克隆抗体(monoclonal antibody,MAb)。采用酸性高锰酸钾羧化酶标板,将TC直接包被在酶标板上,并对ELISA反应体系条件进行优化,构建一种半抗原直接包被的TC ELISA检测方法。所制备的MAb特异性良好,交叉反应率低。所构建的检测方法最低检测限IC_(10)值为0.306 ng/mL,半数抑制率IC_(50)值为9.26 ng/mL,牛奶和水中加标回收率分别为96.46%~101.89%、96.84%~102.50%。与人工完全抗原包被的检测方法相比(IC_(10)值:0.624 ng/mL,IC_(50)值:28.24 ng/mL,牛奶和水中加标回收率分别为93.86%~105.12%、94.04%~105.56%),检测灵敏度有明显提高,并可用于实际样品中TC含量的检测,具备良好的应用前景。

化学发光酶免疫分析法诊断乙型肝炎病毒感染的价值分析

目的:分析化学发光酶免疫分析法(CLIA)诊断乙型肝炎病毒(HBV)感染的价值。方法:选取2022年10月—2023年8月金沙县中医医院收治的疑似乙型肝炎患者60例作为研究对象,均接受酶联免疫吸附法(ELISA)、CLIA及综合检查,以综合检查诊断结果为“金标准”,比较ELISA、CLIA诊断HBV感染的效能。结果:综合诊断结果显示,HBV感染阳性50例,阴性10例。CLIA检测HBV核心抗体、HBV表面抗体、HBV e抗原、HBV e抗体、HBV表面抗原的阳性符合率高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05);CLIA的灵敏度、准确度、阴性预测值高于ELISA,差异有统计学意义(P<0.05);两种检测方法的特异度、阳性预测值比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CLIA应用于HBV感染的诊断价值较高,能够稳定检出血清标志物,可为HBV感染的诊断及后续临床治疗工作提供重要依据,值得临床应用并予以推广。

草甘膦单克隆抗体的制备及酶联免疫分析方法的建立

目的制备出草甘膦(glyphosate,GLY)单克隆抗体,建立间接竞争酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测茶叶中GLY的方法。方法首先合成GLY完全抗原(包被原和免疫原),通过免疫小鼠成功制备出GLY单克隆抗体。根据ELISA的检测流程,采用棋盘法确定最佳包被抗原和抗体的稀释倍数,确定最佳包被的温度和时间,并确定最佳加入一抗、二抗后反应时间,建立检测方法并对其性能进行评价。结果GLY包被抗原和抗体的稀释倍数为1:2000,包被温度为37℃、包被时间为90 min,加入一抗、二抗后反应时间为60 min。该方法的线性方程为Y=-0.2353X+0.6539(r2=0.9871),半抑制浓度(50%inhibiting concentration,IC50)为4.508 ng/mL,检出限为1.18 ng/mL。变异系数均在10%以下,与异菌脲、多菌灵、三唑磷、甲基对硫磷、噻菌灵这5种标准品的交叉反应率均低于0.03%,在茶叶中加标回收率为90.86%~110.35%,且相对标准偏差均小于10%。结论该方法具有较高的灵敏度和特异性,可用于茶叶样本中GLY残留的快速检测。

化学发光磁酶免疫分析法检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌

建立化学发光磁酶免疫分析法检测牛奶中鼠伤寒沙门氏菌,并优化化学发光条件和免疫反应条件。结果表明:最佳发光条件为鲁米诺、过氧化氢、对碘苯酚的浓度分别为5.0×10^(-3)、1.76×10^(-2)、5.0×10^(-3)mol/L,辣根过氧化物酶的质量浓度为5.0×10^(-5)mg/mL;最佳免疫条件为免疫磁珠用量50μL、一抗体积稀释比1∶8000;方法的检出限为3.0×10^(3)CFU/mL,回收率为87.94%~113.04%。建立的方法可用于牛奶中鼠伤寒沙门氏菌的检测。

水产品中氯霉素酶联免疫吸附分析法的构建与应用

以氯霉素(CAP)为研究对象,通过系统优化反应条件,构建CAP的间接竞争酶联免疫分析法,并应用于水产品中CAP残留量的检测。氯霉素间接竞争酶联免疫分析方法的最佳工作条件为:0.05μg/孔包被量(CAP-OVA),4℃包被14 h,0.5%脱脂乳粉封闭液,CAP抗体稀释倍数为1∶16000。结果表明:构建的间接竞争酶联免疫分析方法的灵敏度(IC50)为4.88μg/mL,检测限(IC15)为0.29μg/mL,方法特异性良好,对氯霉素结构类似物和同类抗生素的交叉率低于0.1%。对大黄鱼、缢蛏、牛蛙进行5.0,10.0μg/kg和20.0μg/kg加标回收试验,回收率在83.90%~100.73%范围。本方法的日内和日间变异系数范围为2.28%~6.96%,该检测结果与LC-MS/MS分析结果具有良好的一致。本研究构建的CAP酶联免疫吸附分析法操作简单,灵敏度高,可应用于多种水产品中氯霉素残留量的快速定量检测,同时也为其它小分子危害物的酶联免疫分析方法的构建提供技术借鉴。

限制性内切酶分析法在柯萨奇B组病毒检测及分型中的应用

目的 探讨限制性内切酶分析法在柯萨奇B组病毒B1～B6型检测及分型中的应用。方法 利用GCG软件对柯萨奇B1～B6型病毒cDNA全序列进行了限制性内切酶酶切位点的分析。结果 共 114种限制性内切酶在柯萨奇B1～B6型病毒cDNA中分布有不同数量的酶切位点。经过比较和分析 ,得到了它们的一个共同cDNA片段 ,在这个cDNA片段中 ,B1～B6型病毒各自具有特异性的核苷酸序列 (特异的限制性内切酶位点 ) ,对柯萨奇B组病毒 6个已知型别标准毒株进行了成功的分型和检测。结论 本方法有效地解决了在柯萨奇B组病毒检定以往方法中所存在的非特异性问题 ,可以对柯萨奇B组病毒进行准确的检定和型别鉴定。

间接竞争酶联免疫分析法快速检测决明子中黄曲霉毒素B_(1)的研究

目的:建立适用于中药决明子中黄曲霉毒素B_(1)(aflatoxin B_(1),AFB_(1))快速检测的间接竞争酶联免疫分析法(indirect competitive enzyme linked immunosorbent assay,ic-ELISA)。方法:首先采用棋盘滴定法优化抗原抗体最佳浓度,建立抑制曲线,然后以显色值和灵敏度为评价指标筛选样品的提取和稀释方法。对所建立的方法进行方法学考察,最后用于实际样品检测。结果:经过优化,确定样品的最佳提取溶剂为乙腈-甲醇溶液(90∶10,v/v),稀释溶液为甲醇-PBS溶液(10∶90,v/v),稀释倍数为20倍。方法的半数抑制浓度为0.078 ng/mL,线性范围为0.016~0.25 ng/mL,回收率为85.00%~109.2%,RSD为0.45%~9.08%。采用所建立的方法对25批决明子进行了检测,经液相色谱-串联质谱法确证,超过限量标准的样品的假阳性率小于5%。结论:本文所建立的ic-ELISA灵敏、简便,适用于决明子中AFB_(1)的快速筛查,但仍存在一定的假阳性率,后续还需要对产生干扰的基质因素进行研究并消除,进一步提高检测的准确度。

中药致肾毒性成分马兜铃酸A单抗制备及酶联免疫分析方法的建立

采用活化酯法,将马兜铃酸A分别与牛血清蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联,得到免疫抗原马兜铃酸A-BSA和包被抗原马兜铃酸A-OVA。利用马兜铃酸A-BSA免疫Balb/c小鼠,制得鼠单克隆抗体1A11,单抗效价为2×104;单抗为IgG1类,轻链为κ型;与其结构类似物马兜铃酸B、C和D的交叉反应率分别为2.8%,3.5%和31.2%。基于抗马兜铃酸A单克隆抗体的间接竞争酶联免疫分析方法(icELISA)的IC50为1.9μg/L,检测范围为0.5～7.5μg/L。icELISA添加回收率为86%～97%,相对标准偏差在5.2%～11.1%之间。利用所建立的icELISA测定了6个中药材和5个中成药中马兜铃酸A的含量,并用高效液相色谱法(HPLC)进行了验证,其中关木通、广防己、天仙藤、马兜铃和青木香中均检测出马兜铃酸A,而川木通和5个中成药中未检测到马兜铃酸A。结果表明:本方法可用于中药中马兜铃酸A的快速检测。

内毒素定量酶免疫分析法的建立及应用

目的 建立双抗体夹心 EL ISA法检测血浆中内毒素 (endotoxin,ET)的方法 ,为临床诊治内毒素血症提供理论依据 .方法 用本实验室自制的两株抗 L PS- m Ab C3 A2 和H3 D3 ,建立检测 ET的双抗体夹心 EL ISA法 ,并与仪器法和鲎试验定性法做比较 ,进行敏感性和准确性实验 .用 3种方法分别测定 40例临床血浆标本 .结果 双抗体夹心法检测ET的最低敏感性为 5 0 ng· L- 1 ,仪器法的敏感性为 1ng·L- 1 ,鲎试验定性法的假阳性率比前 2种方法至少高 17.5 % .3种方法 (双抗体夹心法、仪器法、鲎试验定性法 )对 40份血浆标本检测 ET的阳性率分别为 75 .0 % ,5 7.5 %和 47.5 % .结论 双抗夹心法检测 ET虽敏感性不如仪器法 ,但特异性好 .仪器法的敏感性好 ,但准确性差 ,鲎试验定性法最不准确 。

吡虫啉的酶联免疫吸附分析方法研究

通过碳二亚胺法将吡虫啉交联于牛血清蛋白(BSA)作为免疫抗原,混合酸酐法将吡虫啉交联于卵清蛋白(OVA)作为包被抗原,免疫Balb/c小鼠,采用B细胞杂交瘤技术,经免疫、融合、筛选、克隆,得到抗吡虫啉单克隆抗体,抗体亚类为IgG1,制备的单克隆抗体效价达1×107,确定了吡虫啉酶联免疫吸附分析方法(ELISA)的最佳工作条件,建立了定量测定吡虫啉的间接竞争ELISA方法。本方法的IC50为(15.12±1.28)μg/L,检出限为(1.76±0.02)μg/L。与其它吡虫啉结构类似物无交叉反应。批内相对标准偏差为4.5%;批间相对标准偏差5.1%,饮用水、重庆理工大学地下水和重庆市花溪河地表水平均添加回收率分别为102%,97%和85%。本研究建立了一种快速检测环境水中吡虫啉残留的方法。

酶联免疫分析法及其在食品农药残留检测中的应用

介绍酶联免疫分析法(ELISA)的原理,酶联免疫分析法在食品农药残留检测中应用的技术要点和存在问题,并对酶联免疫分析法在食品农药残留检测中的应用前景作了展望。