大叶藤黄叶片角质层的酶分离技术

角质层运输特征的研究在生态学、环境和农用化学等方面都具有非常重要的意义 ,完好地分离角质层是进行这方面研究的前提。本文以生长在西双版纳热带雨林中的大叶藤黄为材料 ,探讨了角质层的酶分离技术。结果表明 ,30℃时用 2 % (w/v) ,pH 3 0的果胶酶和纤维素酶溶液浸泡大叶藤黄叶圆片 9h ,叶圆片边缘角质层分离 ,浸泡 5d可分离到完整的角质层 ,角质层在硼酸盐缓冲液 (0 0 1mol·L-1,pH 9 0 )中充分浸泡数日去除石炭酸 ,空气中干燥 。

旋叶动态膜滤技术在酶制剂生产中菌-酶分离过程的应用研究

通过旋叶式动态膜滤机装置的实验，利用核孔膜α淀粉酶发酵液和２７０９碱性蛋白酶发酵液进行了菌酶分离。实验结果表明。

生物素类活性探针在酶分离中的应用研究进展

酶是一类具有重要意义的生命活性物质,而如何高效快速地从生物体内提取目的酶已成为生物学领域的一个关键性问题。近年来,越来越多的研究将蛋白质组学的热门技术——活性探针技术运用于酶的分离纯化中。对近年来研究得最多的链霉素亲和层析相关的活性探针技术应用于酶分离的研究进行了综述,并例举了丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、N-乙酰氨基葡萄糖苷酶、脯氨酰基寡肽酶、组蛋白脱乙酰酶的分离技术及其机理。

罗氏沼虾肝胰腺几丁质酶分离纯化及部分性质

报道罗氏沼虾 (Macrobrachiumrosenbergii)肝胰腺 (heptopancreans)经抽提 ,再生几丁质亲和层析 ,SephadexG 10 0凝胶过滤 ,CM SephadexC 2 5凝胶离子交换层析 ,获得了聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的酶制品 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳法测得其分子量约为 38kDa .,等电聚焦测得其等电点为 5 .7.该酶的最适pH值为 4 ,在pH3.0 - 8.0间表现稳定 .最适温度 5 5℃ ,高于 65℃稳定性降低 .

人肝癌组织特异性γ-谷氨酰转移酶分离纯化

目的:分离纯化人肝癌组织中特异性γ-谷氨酰转移酶(GGT),为进一步制备其抗血清提供抗原材料,以便对肝癌早期诊断进行研究。方法:人肝癌组织经匀浆、离心、溶解、透析、凝胶层析及凝集素亲和层析等步骤进行分离纯化;纯化过程用IFCC推荐方法监测GGT催化活性,紫外法监测蛋白质出峰图谱,Lowry法测定蛋白含量。结果:经过粗提、DEAE阴离子交换层析、凝胶过滤层析及凝集素亲和层析等纯化步骤得到电泳纯的GGT,其比活为10.58U/mg蛋白,纯化倍数为84.9,得率为1.60%。结论:该方法能够较好地分离纯化人肝癌组织中特异性GGT。

一株产凝乳酶变色栓菌鉴定及其凝乳酶的分离纯化与酶学性质研究

微生物凝乳酶具有生产周期短和易于发酵生产的优点,是传统小牛皱胃酶的经济高效替代选择之一。为了筛选新的凝乳酶产生菌,该研究以从传统发酵腐乳分离的霉菌为出发菌株,筛选具有高凝乳活性和低蛋白水解活性的霉菌菌株。采用内源转录区间隔区结合线粒体小亚基核糖体DNA扩增测序的方法对菌株进行了分子鉴定。通过硫酸铵分级盐析沉淀、DEAE-Sepharose Fast Flow阴离子交换柱、Sephadex G100凝胶过滤层析法对酶进行了纯化,并研究了凝乳酶酶学特性。筛选出菌株CQ3具有良好的凝乳活性和低蛋白水解活性,该菌株鉴定为变色栓菌(Trametes versicolor)。CQ3凝乳酶纯化后经SDS-PAGE分析呈现出分子质量为61 kDa的唯一条带。该酶作用的最适温度为45℃,最适pH值为6.5,Ca^(2+)对酶活力有显著的促进作用。该酶在pH值为4.5~7.0和温度低于50℃条件下有良好的稳定性。蛋白酶抑制剂试验表明,该酶为一种天冬氨酸蛋白酶。该研究结果报道了一种新的产凝乳酶菌种资源,为丰富凝乳酶产生菌株资源,进一步评价栓菌凝乳酶在干酪加工适用性的研究提供了理论基础。

蛋白酶和盐酸分离牦牛绒中黑色素的研究

采用木瓜蛋白酶、盐酸搅拌和盐酸静置的方法，从牦牛绒中分离出黑色素。研究牦牛绒中黑色素的物理和化学性能；并对三种分离方法作了比较。

生物功能化纳米SiO_2微球的构建及对谷胱甘肽S-转移酶的捕获分离

采用巯基丙基三甲氧基硅烷(MPS)一步水解法制备了表面带有巯基(—SH)的纳米SiO2微球(nSiO2-SH),探讨了水/醇体积比、反应温度、MPS初始浓度及反应时间对nSiO2-SH微球形貌的影响,并分析了反应机理.制备的nSiO2-SH微球进一步与还原型谷胱甘肽(GSH)中的—SH反应生成双硫键(—S—S—),在微球表面键合上GSH分子,得到了生物功能化的纳米nSiO2-GSH微球.通过扫描电子显微(SEM)、透射电子显微镜(TEM)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)和热重分析仪(TG)对样品的表面形貌、尺寸和组成等进行了表征.利用十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(SDS-PAGE)检测样品对谷胱甘肽S-转移酶(GST)的分离效果,结果表明,nSiO2-GSH微球能从混合蛋白中特异性吸附GST,达到了分离GST的目的.

Microbacteriu estmeraromaticum GS514菌株中一种人参皂苷β-葡萄糖苷酶的分离及其性质研究

人参土壤微生物Microbacterium esteraromaticum GS514显示出良好的人参皂苷转化能力.采用DEAE-cellulose DE-52阴离子交换树脂,从人参土壤微生物Microbacterium esteraromaticum GS514中分离一种使人参皂苷Rb1水解为人参皂苷Rd的β-葡萄糖苷酶,并进行酶性质研究.结果表明,该酶分子量约为58.7kDa,在pH值6.5和40℃时显示出最强酶活性.

液体深层发酵饲料用纤维素酶的分离及酶化粗饲料

研究目的是对液体深层发酵的纤维素酶采用喷雾干燥和硫酸铵沉淀两种方法分离提纯的影响因素进行比较 ,并对影响酶化粗饲料的因素进行了研究 .研究结果显示了两种酶分离提纯方法的优缺点 。

磁微粒分离酶联免疫法在日本血吸虫抗体检测中的应用

目的探讨磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA)用于检测日本血吸虫病血清抗体的效果。方法用MPAIA测定日本血吸虫病血清中特异性抗体。结果用MPAIA检测384例非血吸虫病流行区阴性血清,均为阴性;检测61例急性血吸虫病人血清、788例慢性血吸虫病人血清、32例晚期血吸虫病人血清其阳性率分别为100%、94.2%、90.6%;检测14例并殖吸虫病人、13例囊虫病人、9例旋毛虫病人血清,均未发现交叉反应。结论MPAIA检测日本血吸虫血清抗体有较高的灵敏度和特异度,可用于日本血吸虫病的临床诊断和现场疫情监测,该方法具有广阔应用前景。

应用磁分离酶联免疫技术检测抗日本血吸虫虫卵抗体

目的建立检测日本血吸虫病患者血清中特异性虫卵抗体的磁微粒分离酶联免疫法(MPAIA)。方法采用异硫氰酸荧光素(FITC)标记日本血吸虫可溶性虫卵抗原(Sj-SEA)为检测抗原,标记羊抗FITC抗体的磁微粒为固相载体,碱性磷酸酶(ALP)标记羊抗人免疫球蛋白G(IgG)作为酶标二抗,以单磷酸酚酞溶液为底物,检测日本血吸虫病患者血清中虫卵特异性抗体。结果用磁微粒分离酶联免疫法检测日本血吸虫虫卵抗体,阳性检出率为96.7%(116/120),与旋毛虫、并殖吸虫、嚢尾蚴等其他寄生蠕虫抗体无交叉反应现象,检测试剂4℃可保存12个月。灵敏度参考品的灵敏度为1∶1600,精密度参考品的精密度(CV)<10%。结论磁微粒分离酶联免疫法具有灵敏度高、特异性强、技术先进,试剂保存时间长等特点。

磁性分离酶免疫法在唐氏综合征产前筛查中的应用

目的 :探讨磁性分离酶免疫分析技术 (magnetic -separatedenzymeimmunoassay ,MEIA)在唐氏综合征产前筛查中的实用性。方法 :对MEIA方法测定孕中期母血清甲胎蛋白 (AFP)和游离 β -绒毛促性腺激素 (β -HCG)含量进行方法学检测 ,同时与酶联免疫吸附法 (ELISA)和放射免疫法 (RIA)相比较。并通过检测及随访 1745例孕产妇建立了青岛地区孕中期母血清各孕周AFP、β-HGC中位数值。结果 :MEIA -AFP方法的灵敏度 <0 .2 1IU/ml,批内平均变异系数 (CV)为 4.7% ,批间平均CV为 6 .8% ,平均回收率为 97.4% ,与ELISA、IRMA法高度相关 (r=0 .90 0和 0 .986 )。MEIA - β -HCG方法的灵敏度为 1mIU/ml,批内平均CV为 2 .4% ,批间平均CV为 2 .4% ,平均回收率为 99.6 % ,与ELISA、IRMA法高度相关 (r=0 .942和 0 .976 )。建立了青岛地区孕中期产前筛查各孕周中位数值 ,其随孕周变化趋势与文献报道一致。筛查中暂未发现漏检病例。结论 :MEIA方法适用于测定孕中期母血清AFP和 β -HCG含量 ,进行唐氏综合征和开放性神经管畸形的产前筛查。

“酶胆分离”作为判断重度肝损害指标的再探讨

本文旨在重新探讨酶胆分离在判断重度肝损害时的价值。结果表明慢性重症肝炎组与胆汁郁积型肝炎组的酶胆分离的发生率相近(P>0.05),但两组的死亡率却明显不同(P<0.05);入院时及住院期间,慢性重症肝炎组及胆汁郁积肝炎组的DIL及ALT改变均呈高度正相关:当ALT/BIL的比值≤0.75时,两组无明显差别(P>0.05),而胆汁郁积型肝炎组的存活率为100％,慢性重症肝炎组仅50.9％。以上结果提示,酶胆分离现象可以发生在重症肝炎,也可以发生在胆汁郁积型肝炎。因此在肝细胞明显损伤时,酶胆分离现象主要与血胆红素水平有关。

酶聚合结合超滤技术分离豆腐废水乳清蛋白的工艺研究

为改善豆腐乳清蛋白及低聚糖的回收率、提高膜通量,研究采用转谷氨酰胺酶在豆腐黄浆水自然条件下(温度50℃、pH值6.0)对乳清原液预处理,使蛋白质聚合,方便后续分离工艺选用截留分子质量大的超滤膜分离大豆乳清蛋白。数据显示转谷氨酰胺酶Ⅰ可有效催化大豆乳清蛋白聚合,1%的酶添加量50℃反应30 min即可催化95%以上的大豆乳清蛋白聚合,酶添加量0.3%,聚合时间延长至5 h。与对照组相比,乳清采用酶法预处理然后超滤分离,蛋白截留率及膜通量分别提高了2倍和1.3倍,而低聚糖的透过率没有明显影响。试验结果表明,相对于单纯的超滤工艺酶聚合预处理乳清然后超滤的分离效果是显著的。

人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位磁分离酶联免疫方法的建立

目的建立一种新的测定人绒毛膜促性腺激素游离β亚单位(hCGβ)磁分离酶联免疫分析法(MEIA)。方法用识别不同表位的两株单克隆抗体(mAb),一株mAb用FITC标记,另一株用碱性磷酸酶(AP)标记;以偶联羊抗FITC抗体的磁珠作为固相,以酚酞单磷酸酯溶液为底物,建立测定hCGβ磁分离酶免疫测定法。结果本MEIA法的灵敏度为0.1IU/L,批内CV小于8.5%,批间CV小于14%,平均稀释回收率为92.5%;与促黄体生成激素(leuteinizinghormone,LH)、促甲状腺激素(thyroidstimulatinghormone,TSH)和促卵泡成熟激素(folliclestimulatinghormone,FSH)均无交叉反应,与完整的hCG(1000IU/L)的交叉反应为1.2%,有效期不低于14个月。结论本方法的性能优于现有的放射免疫(RIA)和ELISA试剂盒,接近进口同类试剂的水平,有助于为市场提供一种高质量而价廉的hCGβ测定试剂盒。

机械分离与胰酶消化分离对长期培养的神经干细胞神经发生能力的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）培养的分离传代技术及其在长期培养条件下的神经发生能力。方法取孕14d的Wistar胎鼠大脑皮层，消化分离后，以1×10^5／ml浓度进行NSCs原代培养。分别采用机械分离与胰酶消化法进行NSCs传代培养，台盼蓝活细胞计数测定分离后细胞存活率，计算细胞倍增时间和细胞增殖率。取第4、8、12、20、30代机械分离传代培养的NSCs球接种到24孔培养板中的盖玻片上，加入分化培养液，观察长期培养条件下NSCs的神经发生能力的变化。结果与胰酶消化法进行的NSCs球传代相比，机械分离的NSCs球为小细胞球和单细胞传代，传代后细胞存活率高，细胞倍增时间短，增殖能力强（P均〈0．05）。体外长期培养条件下，随着培养时间的延长，NSCs分化为神经元的比例逐渐降低，星形胶质细胞的比例逐渐增高；在4—12代NSCs分化为神经元的能力表现出下降的趋势，但仍较为稳定；12代后，神经元的分化比例迅速下降，星形胶质细胞的比例迅速上升。结论与胰酶消化法相比，逐步减小吸管口径的机械分离传代法，减少了传代对细胞的损伤，保证了大部分细胞间连接的完整性，显著增强了NSCs的增殖能力。体外长期扩增的NSCs，由于微环境和（或）自身基因的调控，随着传代的延续，其神经发生能力逐渐降低，分化为神经元的比例逐渐减少，分化为星形胶质细胞的比例逐渐增加。

磁性分离酶联免疫测定在糖尿病中的临床应用

目的 :观察磁性分离酶联免疫测定技术水平。方法 :使用磁性分离酶联免疫测定 (IEMA )技术 ,测定糖尿病患者 C-肽、胰岛素。 1型糖尿病 (IDDM) 12例 ,2型糖尿病 (NIDDM) 90例 ,健康人正常对照 2 0例 ,做 OGTT试验 ,使用BIOCHEM IMMU NOSYSTEMS公司发明的 SEROZYME酶联免疫双抗体夹心检测系统和 BIODATA试剂测定胰岛素(INS)和 C-肽 (C-P)。结果 :IEMA批内变系数 (CV% )为 3.95 % ,批间变系数为 6 .72 % ,灵敏度分别为 0 .5 7m U / L和0 .39pmol/ L。 IEMA结果与放射免疫法 (RIA )之间有显著的直线相关性 (P<0 .0 1)。健康人 OGTT试验时 ,空腹胰岛素和 C肽分别为 (15 .76± 6 .32 ) m U/ L 和 (8.71± 16 3.38) pm ol/ L,在 30～ 6 0分钟达到峰值 ,平均为 (5 9.6 4± 7.84) m U/ L 和(2 0 73.83± 2 88.0 9) pm ol/ L。IDDM患者胰岛素和 C-肽空腹水平低 ,OGTT试验无峰值出现 ,而 NIDDM患者峰值延迟。结论 :IEMA是一种灵敏、特异、有效、可与免疫放射法相匹敌的非放射标记的免疫化学检测技术。

木瓜蛋白酶的分离纯化——关于食品生物化学综合设计性实验的构思

针对食品生物化学课的实际情况,提出了开设综合设计性实验的思路,初步给出了木瓜蛋白酶分离纯化实验的内容,旨在为今后的实验提供理论指导.