机械分离与胰酶消化分离对长期培养的神经干细胞神经发生能力的影响

目的探讨神经干细胞（NSCs）培养的分离传代技术及其在长期培养条件下的神经发生能力。方法取孕14d的Wistar胎鼠大脑皮层，消化分离后，以1×10^5／ml浓度进行NSCs原代培养。分别采用机械分离与胰酶消化法进行NSCs传代培养，台盼蓝活细胞计数测定分离后细胞存活率，计算细胞倍增时间和细胞增殖率。取第4、8、12、20、30代机械分离传代培养的NSCs球接种到24孔培养板中的盖玻片上，加入分化培养液，观察长期培养条件下NSCs的神经发生能力的变化。结果与胰酶消化法进行的NSCs球传代相比，机械分离的NSCs球为小细胞球和单细胞传代，传代后细胞存活率高，细胞倍增时间短，增殖能力强（P均〈0．05）。体外长期培养条件下，随着培养时间的延长，NSCs分化为神经元的比例逐渐降低，星形胶质细胞的比例逐渐增高；在4—12代NSCs分化为神经元的能力表现出下降的趋势，但仍较为稳定；12代后，神经元的分化比例迅速下降，星形胶质细胞的比例迅速上升。结论与胰酶消化法相比，逐步减小吸管口径的机械分离传代法，减少了传代对细胞的损伤，保证了大部分细胞间连接的完整性，显著增强了NSCs的增殖能力。体外长期扩增的NSCs，由于微环境和（或）自身基因的调控，随着传代的延续，其神经发生能力逐渐降低，分化为神经元的比例逐渐减少，分化为星形胶质细胞的比例逐渐增加。

微波辅助酶法从橙皮中提取果胶的实验研究

以酸提醇沉方法,将微波萃取技术与酶分离法相结合,提取橙皮中的果胶。考察纤维素酶用量、pH值、微波时间、微波温度及料液比等对提取效果的影响。结果表明,当橙皮粉末和纤维素酶的用量一定时,保持提取溶液的pH值为5.5,在料液比为1 g∶25 mL,微波温度50℃,微波时间3 min时,提取率可达到11.49%。

大鼠肺动脉平滑肌细胞的分离及鉴定

为探讨肺动脉平滑肌细胞的急性分离方法，在机械分离出大鼠肺动脉后，应用胶原酶和木瓜蛋白酶对大鼠肺动脉平滑肌细胞进行急性分离，并用电子显微镜对所分离出的细胞进行鉴定。结果成功地分离出单个、梭型的肺动脉平滑肌细胞，并经电镜观察证实分离液中９０％的细胞为肺动脉平滑肌细胞。该方法操作较简便，结果稳定，重复性好，可推广使用。

盐酸吡格列酮治疗2型糖尿病的临床研究

目的 观察盐酸吡格列酮对 2型糖尿病患者血糖、血脂代谢和胰岛素抵抗的影响 ,并检测治疗前后血清肿瘤坏死因子 α(TNF α)、纤溶酶原激活物抑制剂 1(PAI 1)以及可溶性血管细胞粘附分子 1(sVCAM 1)的变化。方法 80例接受磺脲类和 /或双胍类降血糖治疗的 2型糖尿病患者进行 12周随机、双盲、安慰剂平行对照的临床试验。结果 治疗 12周后 ,(1)试验组空腹血糖、餐后2小时血糖、糖化血红蛋白 (HbA1C)和HOMA胰岛素抵抗指数分别下降了 1 2 8mmol/L、1 94mmol/L、0 89%和 2 0 5 % ,显著低于治疗前和对照组 (P <0 0 1)。空腹、餐后 2小时胰岛素、HOMA胰岛素分泌指数治疗前后无显著变化 ;(2 )试验组总胆固醇、低密度脂蛋白、甘油三酯均有下降 ,高密度脂蛋白升高了 0 11mmol/L ,与对照组比较有显著性差异 (P <0 0 1) ;(3)试验组sVCAM 1、PAI 1含量明显低于治疗前和对照组 (P <0 0 5 ) ,TNF α有所下降 ,显著低于对照组 (P <0 0 5 ) ,但与治疗前比较无显著性差异。结论 盐酸吡格列酮可改善 2型糖尿病患者的血糖及血脂代谢 ,降低胰岛素抵抗 ,并减少血TNF α、sVCAM 1和PAI 1含量 ,有助于防治糖尿病血管并发症 ,是较为理想的抗糖尿病新药。

烟草早期胚胎细胞观察方法研究

【目的】分析整体透明法和酶解分离法在烟草早期胚胎观察中的应用效果,为烟草细胞发育研究提供参考。【方法】分别采用整体透明法和酶解分离法对烟草早期胚胎细胞进行连续观察,分析两种方法的优缺点。【结果】采用整体透明法观察烟草胚胎,均可清晰观察到烟草的2-细胞原胚、4-细胞原胚至未分化的球形胚,而观察的早期球形胚基部胚柄不够清晰,且后期发育的胚胎不易观察。酶解分离法能够观察到烟草整个发育阶段的胚胎,即烟草2-细胞原胚、开始分化的球形胚、心形胚;但经二次酶解分离,从2-细胞原胚到16-细胞早期球形胚时期的胚胎细胞均存在质壁分离现象,而晚期胚胎未出现此现象。整体透明法具有操作简便、所需材料较少、具有原位地形学观察等优点,能够保持胚胎组织的原位性。酶解分离法耗时较短,但其胚胎细胞缺乏原位性,部分存在质壁分离现象,可获得独立的不包含母体组织的胚胎细胞。【结论】在烟草胚胎发育时期,可根据对不同时期胚胎研究的需要,合理选择适宜的观察方法;或结合整体透明观察法与酶解分离法对早期胚胎进行观察,提高烟草胚胎发生的连续观察效果。

原代骺板软骨细胞的高效分离和体外培养观察

目的 设计原代骺板软骨细胞的高效分离法 ,并对骺板软骨细胞的体外培养进行初步观察。 方法 改良设计以 1g L的胰蛋白酶 / 1g L的乙二胺四乙酸 (EDTA)、1g L的透明质酸酶和 2g L的Ⅰ型胶原酶系列消化分离原代软骨细胞的三步酶消化分离法 ,观察其对幼兔骺板原代软骨细胞的分离效果 ;倒置显微镜和光镜下观察体外培养条件下细胞生物学特性。 结果 ( 1)三步酶的消化可使软骨基质完全解离降解 ,细胞均得以分离 ,收获量与组织湿重呈非常显著的正相关 ,每克软骨的细胞收获量平均为 32 .3× 10 6 个 ,细胞存活率平均为 97.6 %。 ( 2 )原代和第 1代细胞附壁生长呈三角形或多角形 ,生长融合时呈卵圆形 ,Ⅱ型胶原免疫组化和甲苯胺蓝 (TB)异染反应均呈阳性 ;第 3代以后细胞逐渐变为梭形 ,Ⅱ型胶原免疫组化为阴性 ,TB异染反应明显减弱。结论 ( 1)原代骺板软骨细胞三步酶消化分离法具有细胞收获率高、细胞存活率高、操作简便等特点。 ( 2 )随着传代培养次数的增加 ,骺板细胞出现去分化 ,逐渐失去软骨细胞的特异性表型。