基于酶切探针等温扩增技术快速检测汉坦病毒S4亚型方法的建立

汉坦病毒(hantavirus,HV)属汉城病毒S4亚型(Seoul virus-S4 subtype,SEOV-4)是东南沿海地区的主要HV流行亚型,目前尚缺乏快速诊断检测方法。本研究基于酶切探针等温扩增技术(Enzymatic Probe Isothermal Amplification,EPIA),以SEOV-S4较为保守的S序列为靶序列设计引物和探针,建立了一种快速检测SEOV-S4的方法。用靶基因合成质粒梯度稀释进行灵敏度和重复性验证,并用人源其他亚型HV进行特异性验证,结果显示,基于EPIA的SEOV-S4检测方法灵敏度可以达到10 copies/μL,且与人源其他亚型HV无交叉反应。结果表明,本研究建立的检测方法具有良好的敏感性、特异性和重复性,可用于相关样本的诊断与筛查。

B族链球菌恒温荧光探针检测方法的建立及方法学验证

目的 建立B族链球菌恒温荧光探针检测方法体系。方法 针对B族链球菌高度保守区域设计特异性引物和含RNA碱基的探针,建立B族链球菌酶切探针恒温扩增快速分子检测体系,并从检测限、灵敏度、特异性和抗干扰能力、精密度、准确性进行方法学验证。结果 该方法的检测限为102CFU/mL,灵敏度为100.0%,能检测出B族链球菌的5种亚型(Ia、Ib、II、III、V型),对于其他细菌的检测均为阴性,显示该方法特异性良好。检测108份阴道拭子的临床标本,检测结果与临床培养结果相一致,准确性100.0%。精密度检测显示变异系数均小于5.0%,精密度良好。结论 该方法的灵敏度高,特异性和精密度良好,操作简便、高效快捷,30min即可扩增完成,可用于B族链球菌的快速检测。