固定化木瓜蛋白酶制备大豆肽的研究

采用固定化木瓜蛋白酶水解大豆分离蛋白,对大豆分离蛋白的最佳预处理温度进行了探讨,并对制备大豆肽的工艺条件进行了正交实验。结果表明:大豆蛋白的最佳预处理温度为90℃;在底物浓度2.7mg/mL、温度55℃、pH7.8、流速0.6mL/min的条件下,利用固定化木瓜蛋白酶制备大豆肽,酶解液中的可溶性蛋白含量为1.384mg/mL,水解度43.65%;影响酶水解反应的因素主次顺序为:pH>温度>底物浓度>流速。

固定化酶制备及应用的研究进展

酶作为一类重要的生物催化剂,具有催化效率高、专一性强、反应条件温和、无污染等特点,被广泛应用于制药、环保、食品、酿造等领域。但酶在实际应用中也存在诸多缺陷,如对热、强酸、强碱、有机溶剂等不够稳定,难以从反应体系中回收,最终导致生产成本的提高等。

核酸内切酶制备的siRNA抑制HBV基因表达和复制

目的:研究核酸内切酶制备的siRNA(esiRNA)对HBV基因表达和复制的抑制作用。方法:利用分子生物学方法制备了分别针对HBV S基因和C基因的esiRNA(SesiRNA、CesiRNA),与HBV复制型质粒pHY106+wta共转染HepG2细胞,化学发光微粒免疫分析方法检测细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg,Northern和Southern印迹检测HBV的mRNA和病毒复制中间体水平。结果:EsiRNA特异抑制HBV基因表达和复制,呈剂量依赖性。在工作浓度为100 nM时,SesiRNA和CesiRNA分别抑制细胞培养上清中75.96%和68.09%的HBsAg,79.69%和78.40%的HBeAg,降低细胞内60%和58%的HBV mRNA,抑制90%和87%的HBV病毒复制中间体。而且SeciR-NA对于多种HBsAg自然突变体的表达均有抑制作用。结论:EsiRNA可以有效抑制HBV的基因表达和病毒复制,尤其对于HBV的不同基因型/亚型和准种可以发挥广谱效应。

腈水合酶制备关键技术研究

腈水合酶是一类可以催化腈类物质转化相应的酰胺类化合物的金属酶,工业上利用其催化丙烯腈转化为丙烯酰胺.该生物法制备丙烯酰胺工艺在1985年被开发,是生物法替代化学法的典型案例.

德国研发半合成氢化酶制备氢气新技术

德国波鸿鲁尔大学光生物技术研究所的研究人员开发出一种新技术，通过半化学合成的手段，制备出了具有生物活性的氢化酶，为氢化酶制氢技术的大规模应用创造了新的可能性。研究人员模仿氢化酶中具有催化作用的生物活性中心的结构和形成过程，首先合成出由铁原子构成的簇状化合物，这种铁原子簇化合物的铁原子间有一氧化碳和氰基“搭桥”连接，

青霉素酰化酶制备D-氨基酸方法通过鉴定

由中国科学院成都有机化学公司自主研究开发的”用青霉素酰化酶制备D-氨基酸的方法”项目通过了四川省科学技术厅组织的技术鉴定。该方法提供了一种制备D-氨基酸的新技术，具有工艺先进、产品纯度高、环保、生产成本低等特点。该成果采用化学消旋和生物酶法拆分相结合制备D-氨基酸方法，制备出多种高光学纯度的D-氨基酸产品，其技术具有先进性和创新性；其制备过程对环境基本无污染，

褐藻胶寡糖的酶法定向制备及其结构-功能关系的研究进展

褐藻胶寡糖(alginate oligosaccharides,AOS)是由褐藻胶降解得到的含有2~10个单糖的线性低分子质量聚合物,具有多种生物活性,包括抗炎、抗菌、抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等,在医药、食品、饲料和农业等领域有广泛的应用。AOS的生物活性与其结构密切相关,包括降解方式、聚合度、甘露糖醛酸与古罗糖醛酸比值、非还原端结构、分子修饰等。酶法降解褐藻胶可定向制备具有特定单体组成和聚合度的功能性AOS,且产物分布与酶的来源、性质、反应条件等有关。本文系统综述了酶法制备AOS的方法及影响因素,并讨论了褐藻胶寡糖结构-功能的关系,以期为AOS的定向制备和应用提供理论参考。

限制性内切酶的无细胞快速制备研究

限制性内切酶在分子生物学研究中是一类重要的工具酶,目前主要由异源生物合成的方式进行表达与生产,由于它们对特定的DNA序列(即酶切位点)具有切割活性,在异源表达时会对宿主产生较高的细胞毒性。而无细胞生物合成体系具有操作快捷、灵活高效、无细胞毒性等优势,因此,本研究利用无细胞蛋白合成(cellfree protein synthesis,CFPS)技术进行限制性内切酶的表达制备。本课题组选择3种限制性内切酶Eco RⅠ、BamHⅠ和BsaⅠ作为研究对象,构建线性DNA为表达模板,无需甲基化酶对宿主的保护,在6 h内即可完成蛋白表达。经亲和色谱与凝胶色谱两步纯化,得到了纯度高(95%左右)、酶活相当(EcoRⅠ3.7×10^(5)~3.7×10^(6)U/mg,BamHⅠ8.3×10^(2)~4.1×10^(3)U/mg,BsaⅠ4.4×10^(5)~4.4×10^(6)U/mg)的目标蛋白。同时,建立了限制性内切酶的实时酶活检测方法,将有助于限制性内切酶的催化和快速筛选研究。本研究所开发的限制性内切酶无细胞表达制备体系,从基因模板构建到纯化蛋白所需时间短(1~2 d)、蛋白产量高(32.5~130 mg/L无细胞反应)、制备效率高(1.3×10^(5)~5.7×10^(8)U/L无细胞反应),具有较好的普适性,为限制性内切酶的研发与制备生产提供了新的思路。

食品用米曲霉α-淀粉酶的制备

米曲霉(Aspergillus oryzae)突变株6-193麦麸固体培养物酶的浸出,采用自来水或pH4.6—5.0的缓冲液在室温至50℃之间浸泡1—2小时较好。用截流分子量10000的中空纤维超滤柱过滤即得高活力的浓缩酶液,制成食品用酶制剂,收率90%。制备粉剂时,酒精沉淀总收率为55.2%,丙酮沉淀总收率高达94.1%,冷冻干燥总收率达87.6%。

杜仲籽粕蛋白酶解制备抗氧化肽工艺优化

以杜仲籽粕蛋白为原料,采用蛋白酶酶解制备抗氧化肽。以水解度和超氧阴离子自由基清除率为评价指标,在单因素试验基础上,运用响应面设计优化抗氧化肽酶解制备条件。结果表明:最佳酶解条件为底物质量浓度7.40g/100mL、酶用量12292U/g、酶解时间2.6h、pH7.0、酶解温度50℃。此条件下所制备的杜仲籽粕蛋白抗氧化肽对超氧阴离子自由基清除率可达56.60%。

超声波在酶解制备技术中的应用进展

超声波技术作为一种高效且对环境友好的制备手段,在食品加工、化工、医疗、生物工程等领域应用广泛,尤其通过与酶解反应的耦合技术在生物催化领域得到了快速发展。就超声场对酶解体系的作用方式、影响超声波辅助酶解制备效果的关键因素以及超声波对酶解制备可能的作用机制等方面进行了系统的论述,对目前此技术的应用情况及存在的问题进行了分析,并对该项技术的应用前景进行了展望。

多酶协同制备低聚异麦芽糖研究

进行了多酶协同制备低异麦芽糖研究,考察了各种α-葡萄糖转苷酶的转苷反应能力,探讨了麦芽糖生成酶及其配合方式以及糖化转苷反应方式对低聚异麦芽糖生成的影响。在此基础上以玉米淀粉为原料研制的低聚麦芽浆中异麦芽糖、潘糖和异麦芽三糖总含量达40%,优于国外同类产品。

鲤鱼卵酶解制备钙离子结合活性肽的条件优化

用胰蛋白酶对脱脂鲤鱼卵进行酶解能够得到具有钙结合活性的酶解物。最佳水解条件为:温度49℃,加酶量3 000(U/g底物),底物浓度2%,p H 9.0。用氢氧化钠对鱼卵进行适度的脱磷处理,当脱磷率为30.39%时,能显著提高鱼卵的水解度及酶解液钙结合能力,胰蛋白酶酶解12 h后,水解度为31.05%,酶解液钙结合能力为0.67(mmol Ca/g蛋白)。

电聚吡咯固定化酪氨酸酶电极的制备及性能

在应用恒电位法电化学聚合吡咯的同时 ,将酪氨酸酶固定在导电聚吡咯膜内 ,制成一种灵敏、稳定的酪氨酸电极 .讨论了溶液 pH值和聚合电位对酶固定化的影响 ,对酶分子嵌入吡咯膜前后的SEM图和CV曲线进行了分析、比较 .该电极对甲苯酚响应的线性范围为 5 .0× 10 -8～ 1.0× 10 -6mol/L ,最适 pH值为 6 .6 ,酶反应表观上遵循Michaelis_Menten动力学 ,表观米氏常数为 2 .2× 10 -5mol/L .

微生物酶催化制备人参皂苷20(S)-Rg2,20(S)-Rh1和20(S)-PPT

以微生物Microbacterium esteraromaticum GS514的培养液中分离的粗酶为催化剂水解人参皂苷Re和Rg1,并通过1HNMR和13C NMR谱对水解产物的结构进行了表征.实验结果表明,反应体系中无机盐NaCl的存在与否直接影响人参皂苷Re,Rg1与粗酶液的反应结果.人参皂苷与粗酶液直接反应时,人参皂苷Re不发生反应,人参皂苷Rg1通过C6所连β-D-吡喃葡萄糖的选择性水解转化成人参皂苷F1.而该反应在无机盐NaCl存在下进行时,人参皂苷Re通过对C20所连β-D-吡喃葡萄糖的选择性水解定向转化为20(S)-人参皂苷Rg2;人参皂苷Rg1定向转化成20(S)-人参皂苷Rh1以及20(S)-原人参三醇(PPT).表明NaCl的加入激活了C20β-D-吡喃葡萄糖苷酶的活性,这对定向合成不同次级人参皂苷具有重要意义.

交联草酸脱羧酶聚集体的制备及其性质

为了获得缓解泌尿系统草酸盐结石病症的酶制剂,用无载体固定化方法——交联酶聚集体(CLEAs)制备交联草酸脱羧酶聚集体。使用基因工程菌E.coli BL21(DE3)/pET32a/YvrK诱导表达制备草酸脱羧酶粗酶液,用30%的乙醇进行沉淀分离提纯,纯化倍数为2.7倍,酶活回收率91.2%;在戊二醛添加量为0.06%、pH5、牛血清白蛋白添加量0.5g/L、4℃的条件下处理该酶2h,得到交联草酸脱羧酶聚集体(oxdc-CLEAs),酶活回收率达95.4%;酶学性质研究表明,相对游离草酸脱羧酶,交联草酸脱羧酶聚集体的耐酸性、耐热性、耐胰蛋白酶降解能力均有提高。

具有结合胆酸盐作用卵形鲳鲹蛋白酶解物的制备和分子量分布研究

以卵形鲳鲹(Trachinotus ovatus)鱼肉为原材料,以酶解产物与胆酸盐的体外结合率为指标,从5种常用食品用蛋白酶中筛选最优蛋白酶。进而采用正交法优化酶解条件,以提高酶解产物的胆酸盐结合率,并采用GPC法分析产物中蛋白肽的分子量分布情况。结果表明,胰蛋白酶酶解产物(100 mg·m L^(-1))与胆酸钠、甘氨胆酸钠和牛磺胆酸钠等3种胆酸盐的体外结合能力均好于其他4种蛋白酶,结合率分别达到42.1%、33.5%和30.1%,分别相当于降血脂药物考来烯胺散(20 mg·m L^(-1))的78.3%、74.4%和76.8%;经过正交试验优化的制备卵形鲳鲹蛋白肽的工艺条件为酶解时间2 h,加酶量2 000 U·g^(-1),料液比1∶4(g·m L^(-1)、p H 8、37℃)。该条件下酶解产物(20 mg·m L^(-1))对甘氨胆酸钠体外结合率达到同浓度阳性对照物(考来烯胺散)的48.3%,酶解产物中相对分子量3 k D以下的肽类组分占总蛋白水解物的77.30%。

细菌内同源重组构建和制备含过氧化氢酶基因的重组腺病毒

利用细菌内同源重组法构建制备含过氧化氢酶基因的重组腺病毒。先自过氧化氢酶质粒载体pZeoSV2-Cat中酶切出过氧化氢酶cDNA,亚克隆至腺病毒穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-Cat,再转化含pAdEasy-1的超感受态大肠杆菌BJ5183,采用细菌内同源重组法构建重组腺病毒质粒pAdEasy-1-Cat;用PacI酶切线性化pAdEasy-1-Cat,转染Ad-293细胞,包装成重组腺病毒颗粒;用氯化铯超速梯度离心纯化获取高滴度的重组腺病毒AdCat。结果发现,线性化的pShuttle-CMV-Cat转化含pAdEasy-1的超感受态大肠杆茵BJ5183,24 h后获得了30％阳性重组质粒克隆,经酶切鉴定说明pAdEasy-1-Cat构建成功。重组质粒经Ad-293细胞包装后产生的重组腺病毒经聚合酶链反应检测表明含有目的基因。氯化铯纯化获取的重组腺病毒滴度为4.12×1015OPU/L。说明应用细茵内同源重组能快速构建含过氧化氢酶基因的重组腺病毒载体pAdEas-1-Cat,可高效制备均一的高滴度重组腺病毒。

酶促制备EPA/DHA磷脂的研究进展

相对于鱼油和微藻油等产品,二十碳五烯酸和二十二碳六烯酸磷脂(EPA/DHA-PL)因其在氧化稳定性、生物利用效率和营养功能等方面的优势越来越受到关注。目前以南极磷虾、海鱼卵为原料提取EPA/DHA-PL的技术已经实现产业化,而EPA/DHA-PL的酶促制备仍鲜见产业化案例。本文中,笔者根据不同制备策略,从酰基替换法、酰基结合法和酰基脱除法这三个方面综述了近年来酶促制备EPA/DHA-PL的研究进展,以期为EPA/DHA-PL酶促制备技术的进一步研究和产业应用化提供参考。