针刺对大鼠局部筋膜和脊髓细胞外信号调节激酶1/2和P38丝裂酶原活化蛋白激酶信号通路的影响

目的:观察针刺捻转拉伸大鼠皮下筋膜对局部筋膜和脊髓背角细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)和丝裂原活化蛋白激酶P38(P38MAPK)信号通路的影响及筋膜结缔组织的形态学变化。方法:20只SD大鼠通过随机分组,每组5只,针刺后三里组和针刺非穴位组进行手针捻转,拉伸刺激组进行拉伸刺激,采用免疫组化技术观察筋膜和脊髓组织中细胞信号蛋白的变化;利用相差显微镜观察拉伸刺激组局部皮下筋膜形态学变化。结果:组织学改变:拉伸刺激组皮下筋膜的纤维以拉伸点为中心呈向心性分布,单位面积内细胞密度增大,细胞骨架和胞核重构成"扁梭形"。细胞信号蛋白变化:针刺组筋膜结缔组织ERK1/2和P38MAPK表达与对照组相比均有增加,但以非穴组增加显著;ERK1/2与P38MAPK在脊髓中的表达位置由胞质转向胞核,ERK1/2与空白对照组相比差异没有显著性意义;P38MAPK的表达有所增加。结论:针刺对局部浅筋膜的ERK1/2和P38有上调作用,但与脊髓中的信号蛋白增加幅度并不完全一致,提示筋膜结缔组织支架可能在微观的信号转导层面对局部细胞分化与增殖具有促进作用。

注射用避孕药对纤溶酶原活化物抑制因子活性影响的研究

观察94名妇女使用Mesigyna或Cyelofem 9mo后其血浆中纤溶酶原活化物抑制因子(PAI)的活性变化,并与口服低剂量避孕药的妇女作比较。结果显示注射用药的妇女PAI在用药期间略有升高,但变化处在正常范围内,且停药3个月后恢复至用药前水平,这些改变与口服用药的妇女相比较没有统计学意义。说明Mesigyna和Cyelofem作为生育控制是安全的。

心房颤动导管消融术中应用凝血酶原活化时间分段法指导首剂肝素用量的观察研究

目的:观察心房颤动(简称房颤)导管消融患者术中依据凝血酶原活化时间分段法指导首剂肝素用量对抗凝达标和并发症的影响。方法:将120例房颤行导管消融术患者随机分为对照组和观察组各60例,对照组患者根据基础ACT值经验性给予首次肝素剂量,观察组则根据基础ACT值分为A、B、C、D四组进行个体化给药,比较两组抗凝达标率和并发症发生情况。结果:观察组穿刺处出血、血肿发生率明显低于对照组(P<0.05);两组抗凝达标率比较差异无统计学意义(P>0.05),但观察组抗凝达标率百分比高于对照组。结论:采用凝血酶原活化时间分段法指导首剂肝素用量安全有效,减少了出血相关并发症的发生。

重组牛凝乳酶原与重组单峰驼凝乳酶原活化速率的初步比较

原核表达的重组牛凝乳酶原与重组单峰驼凝乳酶原，包涵体经溶解和复性后，酸化／中和处理获得成熟凝乳酶。酸化／中和处理两种酶原时发现二者的活化速率有明显差别。相同条件下，牛凝乳酶原在2h以内即可完全活化，而单峰驼凝乳酶原需3d以上。将牛凝乳酶propeptide序列部分或全部取代单峰驼凝乳酶原相应序列，并构建到相同原核表达载体进行表达与复性，获得的融合蛋白MuT-1和MUT-2经酸化／中和处理，MUT-1在pH2．0～8．5范围均不能活化，MUT-2的活化情况与单峰驼凝乳酶原相同。这也暗示酶原的激活不仅涉及propeptide与酶活性部位的静电作用，还可能与凝乳酶的结构或酶活相关。

双调蛋白诱导乳腺癌细胞表达尿激酶型纤溶酶原活化物

目的:在人乳腺癌模型上研究双调蛋白与尿激酶型纤溶酶原活化物表达之间的关系。方法:乳腺癌NS2T2A1细胞经双调蛋白反义cDNA质粒转染后经潮霉素B筛选获得表达双调蛋白反义RNA的AR-AS1及AR-AS3两个细胞克隆,转染空载体获得NS2T2A1V对照细胞,接种至裸鼠皮下形成肿瘤。测定细胞及肿瘤uPA表达水平,并研究uPA与细胞侵袭性之间的关系。结果:AR-AS1及AR-AS3细胞体外及体内uPA表达均被抑制。外源性双调蛋白可刺激对照细胞uPA的表达,并部分恢复AR-AS1及AR-AS3细胞uPA的表达水平。双调蛋白反义cDNA质粒转染及抗uPA抗体均导致乳腺癌细胞体外侵袭性的降低。结论:在乳腺癌模型上,uPA表达与肿瘤细胞的侵袭密切相关。双调蛋白反义RNA表达可有效地抑制uPA的表达,进而抑制肿瘤细胞的侵袭性。

尿激酶型纤溶酶原活化物和基质金属蛋白酶类在腹主动脉瘤组织中的表达

目的探讨尿激酶型纤溶酶原活化物(u-PA)和明胶酶A(MMP-2)、明胶酶B(MMP-9)在腹主动脉瘤(AAA)组织中的表达及产生的源泉。方法用u-PA和MMP-2、MMP-9单克隆抗体以免疫组织化学方法在30例AAA组织和30例正常腹主动脉组织切片上检测u-PA和MMP-2、MMMP-9抗原(蛋白);用u-PA的寡核苷酸探针和MMP-2、MMP-9的cDNA探针以原位杂交方法,在上述AAA组织和正常腹主动脉组织的冰冻切片上探测u-PA和MMP-2、MMP-9的mRNA。结果u-PA和MMP-9主要在AAA组织中层和外膜巨噬细胞表达,在正常腹主动脉组织中无表达;MMP-2在AAA组织中主要由中层平滑肌细胞表达,在正常腹主动脉组织中无表达。结论由巨噬细胞产生的u-PA直接激活原MMP-2和原MMP-9,在AAA形成和扩张中起着关键性作用。

人胎肺细胞的条件化培养液中两种类型纤溶酶原活化物的分离

用正常人胎肺细胞体外培养，从其培养液中分离纤溶酶原活化物（ＰＡ），通过ＣＭ－ＳｅｐｈａｄｅｘＣ－５０层析，硫酸铵沉淀和Ｆｉｂｒｉｎ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ，Ｌｙｓｉｎｅ－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ亲和层析及ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０凝胶过滤等步骤，从１０．５ｌ条件培养液中分离纯化得到两种类型的纤溶酶原活化物，ｔ－ＰＡ９０μｇ，ｕ－ＰＡ８００μｇ．在还原条件下ＳＤＳ－ＰＡＧＥ均显示单带，分子量ｔ－ＰＡ为７２ｋＤ，ｕ－ＰＡ为５４ｋＤ，纤溶比活分别为１５６０００ＩＵ／ｍｇ蛋白和１０６０００ＩＵ／ｍｇ蛋白．

纤溶酶原活化剂抑制物缺乏症1例

患者,男,17岁。因“痔疮手术后创面渗血不止3d”转入笔者所在医院继续治疗。外院病历资料提示术前血常规及凝血五项正常、手术过程顺利,术后约4h开始出现创面渗血不止,患者自觉皮肤损伤后止血缓慢、伤口愈合较慢,但无自发性皮肤黏膜出血;本次手术后多次输注新鲜冰冻血浆、冷沉淀及凝血酶原复合物,但止血效果差,复查血小板计数及凝血五项正常;家族史无异常。入院专科查体：轻中度贫血貌,皮肤黏膜无瘀斑瘀点及出血点,心肺查体无异常,肝脾肋下未触及,肛门处渗血。入院查：血WBC 9。2x10^9/L、Hb91 g/L、Plt 214x10^9/L;肝肾功正常;病毒学指标检测阴性;ApTT、PT、APTT活动度、TT、BT正常;纤维蛋白原1。9 g/L;D-二聚体正常;3P试验阴性;血栓弹力图提示凝血因子及血小板功能正常,纤溶亢进;外送检测因子Ⅷ及Ⅸ活性、vonWillebrand因子抗原、血小板聚集功能检测均正常。优球蛋白溶解时间90 min（正常对照＞120 min）、加入生理浓度（50 ng/ml）的PAI-1（纤溶酶原活化剂抑制物）后优球蛋白溶解时间恢复正常;t-PA活性及t-PA抗原在正常范围;α2抗纤溶酶活性正常。临床诊断：纤溶酶原活化剂抑制物缺乏症（即PAI-1缺乏症;因条件所限未能检测PAI-1活性及PAI-1抗原水平,所以不能完全排除抗PAI-1抗体引起的继发性PAI-1缺乏）。即给予氨甲环酸200 mg,1次/8 h静脉滴注,伤口仍有渗血。后根据伤口渗血症状及动态检测血栓弹力图的结果逐渐增加氨甲环酸剂量至400 mg,1次/6h,伤口渗血停止,复查优球蛋白溶解时间正常。患者伤口愈合,逐渐减少氨甲环酸用量至停药,现已出院。

尿型纤溶酶原活化素受体在大肠癌活检标本中的表达和意义

肿瘤转移与局部纤溶酶原括性增强有关，其中肿瘤细胞分泌尿型纤溶酶原活化素(Urokinase-type plasminogen activator，u-PA)抗原增多，癌细胞表面的尿型纤溶酶原活化素受体(u-AR)增强。u-PA是一类丝氨酸蛋白酶，能使纤溶酶原活化为纤溶酶。后者能催化多种蛋白质的降解和活化Ⅳ型胶原酶来溶Ⅳ型胶原的网状结构。u-PA在体内作用有赖于细胞膜上相应的受体表达。

新诊断Ⅱ型糖尿病患者饮食治疗后血纤溶酶原活化剂抑制物－Ⅰ活性降低（摘要）

新诊断Ⅱ型糖尿病患者饮食治疗后血纤溶酶原活化剂抑制物－Ⅰ活性降低（摘要）［ＢａｈｒｕＹ，ｅｔａｌ．ＤｉａｂｅｔｉｃＭｅｄ，１９９３，１０：８０２）］已报道Ⅱ型糖尿病患者血纤溶酶原活化剂抑制物－Ⅰ（ＰＡＩ－Ⅰ）活性增高，并认为是冠心病的一个危险因素。本...

新诊断Ⅱ型糖尿病患者纤溶酶原活化剂抑制物－1与胰岛素抵抗之间的关系（摘要）

新诊断Ⅱ型糖尿病患者纤溶酶原活化剂抑制物－１与胰岛素抵抗之间的关系（摘要）［ＧｏｕｇｈＳＣＬ，ｅｔａｌ．ＤｉａｂｅｔｉｃＭｅｄ，１９９３，１０２：６３８］本研究的目的是观察新诊断的Ⅱ型糖尿病、血压正常、且临床上无阻塞性血管病变者血纤溶酶原活化剂抑制物...

内含肽介导谷氨酰胺转胺酶酶原的活化

链霉菌来源的谷氨酰胺转胺酶(microbial transglutaminase,MTG)以酶原(pro-MTG)的形式表达,需要蛋白酶将其活化。蛋白酶有降解MTG及其底物的可能,且增加MTG的分离纯化成本。为解决上述问题,将一种pH值依赖型的内含肽(intein)插入pro区和MTG之间,用以介导二者之间的断裂,实现MTG的pH值控制活化。结果表明:重组蛋白(pro-Intein-MTG)在大肠杆菌中实现了可溶高表达。在pH7.0、25℃的体外环境下,重组蛋白经24h即可完全转化为MTG,且最高酶活力为0.23U/mL(菌体浓度稀释至OD600nm为1.0时测得)。重组型MTG的酶比活力和Km值分别为14.3U/mg、69.4mmol/L,与野生型MTG相近;且圆二色谱显示二者具有相似的二级结构,说明内含肽的插入对于MTG的功能和结构无显著影响。

燃煤污染型砷中毒患者外周血中丝裂酶原活化蛋白激酶信号通路相关基因mRNA转录表达情况

目的 检测燃煤污染型砷中毒患者外周血淋巴细胞中丝裂酶原活化蛋白激酶（MAPK）中ERK1、ERK2、JNK1、P38基因mRNA的转录表达情况.方法 2006年12月在贵州省燃煤型砷中毒病区兴仁县交乐村选择燃煤污染型砷中毒患者70例,其中轻、中、重度患者分别为31、25、14例,同时选取12 km以外有相似生活习惯、无燃用高砷煤史、经健康体检无异常、年龄性别匹配的大果朵村村民30名作为对照组.检测环境介质、粮食和观察对象尿、发中砷含量；采集外周血,Trizol法提取外周血淋巴细胞中总RNA,反转录获得cDNA.采用实时荧光定量PCR（QT-PCR）检测外周血淋巴细胞中MAPK信号通路中相关基因（ERK1、ERK2、JNK1、P38）mRNA转录表达.结果 燃煤型砷中毒病区环境介质中室内空气、室外空气、煤、辣椒和玉米中砷含量[中位数（四分位数）]分别为0.079（0.053 ～0.117） mg/m3、0.007（0.002～0.015） mg/m3、93.010（39.460 ～ 211.740） mg/kg、3.460（0.550～ 16.760）mg/kg和1.500（0.300 ～4.140） mg/kg,均超出国家卫生标准.土壤、大米和饮用水中砷含量分别为12.130（4.230 ～24.820）、0.650 （0.300～0.980）和0.043 （0.012～0.089） mg/kg,砷含量均在国家卫生参考标准之内.与对照组[（26.97±9.71）μg/g肌酐]相比,燃煤污染型砷中毒患者尿砷含量[（71.48±22.74）μg/g肌酐]较高,差异有统计学意义（F=90.38,P＜0.01）；与对照组[（1.58±1.07） μg/g]相比,砷中毒患者发砷含量[（4.45±2.78） μg/g]增高,差异有统计学意义（F =48.22,P＜0.01）；砷中毒患者外周血淋巴细胞中ERK2、JNKl mRNA相对表达量[中位数（四分位数）]分别为0.0667（0.0378 ～0.1371）、0.0013 （0.0009～0.0025）,低于对照组[0.1744（0.1009 ～0.1985）和0.0022（0.0017 ～0.0030）],差异有统计学意义（x2值分别为15.10,14.25,P＜0.01）.轻、中、重度砷中毒患者外周血淋巴细胞中ERK2mRNA相对表达量分别为0.0818（0.0408 ～0.1509）、0.0582（0.0154～0.1699）、0.0588（0.0399～0.1034）,低于对照组0.1744 （0.1099～0.1985）,差异有统计学意义（Z值分别为-2.89,-3.19,-2.67,P＜0.01）；JNKl mRNA相对表达量分别为0.0012（0.0007～0.001 57）、0.0019 （0.0011 ～0.0035）、0.0013（0.0010 ～0.0026）,与对照组0.0022（0.0017～0.0030）相比,轻度组表达量减少,差异有统计学意义（Z=-3.72,P＜0.01）.结论 砷可致中毒患者外周血淋巴细胞中MAPK信号通路中ERK2和JNK1 mRNA转录水平发生改变,表明MAPK信号通路参与了燃煤污染型砷中毒的发生和发展过程.

胰腺癌组织中血管内皮生长因子和尿激酶型血纤维蛋白溶菌酶原活化剂基因表达与血管生成的关系及临床意义

目的探讨胰腺癌组织中血管内皮生长因子(VEGF)和尿激酶型血纤维蛋白溶菌酶原活化剂(uPA)表达与血管生成的关系及其临床意义。方法采用免疫组织化学法检测30例胰腺癌组织及6例正常胰腺组织中VEGF和uPA表达情况,分析其与肿瘤组织微血管密度(MVD)的关系。结果胰腺癌组织中VEGF和uPA的阳性表达率分别为53.3%和63.3%。胰腺癌中的MVD明显高于正常组织(P=0.017)。VEGF和uPA表达与MVD有关(P<0.05)。MVD在Ⅰ、Ⅱ期和Ⅲ期胰腺癌组间表达差异有统计学意义(F=4.297,P=0.047),VEGF表达与肿瘤有无淋巴结转移有关(2=4.852,P=0.028)。VEGF在Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期胰腺癌肿瘤组织中表达差异有统计学意义(2=6.914,P=0.032)。uPA在肿瘤大小中的表达差异有统计学意义(2=410.435,P=0.001)。MVD与生存期之间存在负相关(r=0.472,P=0.017)。组织分化程度是影响胰腺癌生存期的危险因素。结论血管生成在胰腺癌的发生、发展过程中起重要作用,VEGF和uPA在胰腺癌组织中过度表达可为肿瘤细胞的浸润创造条件。抗血管生成治疗可能有助于提高胰腺癌的治疗效果。

重症肺炎患者血浆纤溶酶原活化剂、纤溶酶原活化抑制剂1水平变化及临床意义研究

背景重症肺炎是临床常见危重症,患者常伴有严重低血压、低氧血症等症状。凝血功能在疾病的发生、发展中具有重要作用,但传统凝血功能检测难以全面评估患者机体凝血状态,而纤溶酶原活化剂(PA)、纤溶酶原活化抑制剂1(PAI-1)较传统凝血功能检测更便捷、更准确,可为临床评估重症肺炎患者凝血状态提供更全面的信息。目的分析重症肺炎患者血浆PA、PAI-1水平变化及其临床意义。方法选取2016年10月—2019年4月河北省老年病医院收治的重症肺炎患者122例为研究组,其中中青年(20~59岁)47例,老年(≥60岁)75例。另选取本院同期体检健康人群122例为对照组。分别比较两组受试者及研究组不同年龄患者血浆u-PA、t-PA、PAI-1、C反应蛋白(CRP)、降钙素原(PCT)水平;采用Pearson相关分析探讨重症肺炎患者血浆u-PA、t-PA、PAI-1水平与CRP、PCT水平的相关性。随访1个月,比较不同预后老年重症肺炎患者血浆u-PA、t-PA、PAI-1、CPR、PCT水平。绘制受试者工作特征曲线(ROC曲线)以评估血浆u-PA、t-PA、PAI-1水平及其联合对老年重症肺炎患者预后的预测价值。结果研究组血浆u-PA、t-PA、PAI-1、CRP、PCT水平高于对照组(P<0.05)。老年重症肺炎患者血浆u-PA、t-PA、PAI-1、CRP、PCT水平高于中青年重症肺炎患者(P<0.05)。Pearson相关分析结果显示,重症肺炎患者血浆u-PA、t-PA、PAI-1水平与CRP、PCT水平均呈正相关(P<0.05)。随访1个月,老年重症肺炎患者死亡23例,生存52例。老年重症肺炎死亡患者血浆u-PA、t-PA、PAI-1、CRP、PCT水平高于生存患者(P<0.05)。ROC曲线分析结果显示,血浆u-PA、t-PA、PAI-1水平联合预测老年重症肺炎患者预后的曲线下面积(AUC)均大于单一指标对应的AUC(P<0.05)。结论血浆u-PA、t-PA、PAI-1水平随重症肺炎患者年龄的增加及病情严重程度的加重而升高,可提示机体凝血、纤溶功能紊乱及感染程度,而三者联合对老年重症肺炎患者预后具有较高的预测价值。

低分子肝素和阿司匹林对复发性流产患者血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1和组织型纤溶酶原活化因子水平的影响

目的：探讨低分子肝素和阿司匹林对复发性流产患者的疗效及对患者血浆纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI-1）及组织型纤溶酶原活化因子（t-PA）水平的影响。方法选取门诊或住院保胎治疗的复发性流产患者70例为治疗组，按照治疗方法的不同分为传统治疗组与肝素治疗组，同时选取同期正常早期妊娠30例为对照组，经治疗后记录三组的妊娠结局等信息并比较三组的妊娠结局及血浆 PAI-1及 t-PA 水平。结果34例传统治疗组患者中21例妊娠成功，妊娠成功率63．56％；36例肝素治疗组患者中28例妊娠成功，妊娠成功率83．58％，差异有统计学意义（P ＜0．05）。肝素治疗组患者治疗后血浆 PAI-1水平为（0．56±0.26）AU ／mL，比治疗前显著降低（P ＜0．05），而 t-PA 水平差异无统计学意义（P ＞0．05）；传统治疗组血浆PAI-1与 t-PA 治疗前后差异均无统计学意义（P ＞0．05）。两治疗组患者不良反应、血小板及凝血功能等指标比较差异均无统计学意义。结论肝素联合阿司匹林能改善复发性流产患者凝血状态，显著提高治疗效果，且具有较好的安全性。