基于酶反应动力学理论优化脂肪酶活力测定体系

为了提高棕榈酸对硝基苯酯(p-NPP)法测定脂肪酶活力的灵敏度和准确度,以来源于Rhizopus oryzae的脂肪酶Lipase F-AP 15为研究对象,首先对其最适反应pH和反应温度进行优化,然后将表面活性剂作为激活因子引入酶活力测定体系,探究影响机制,并依据酶反应动力学理论优化测定条件(底物浓度、酶质量浓度、反应时间),对优化的p-NPP法的重复性和准确性进行了检验,最后以另一个来源的脂肪酶Lipase-PPL为模型,以同样思路与方法改进与优化其酶活力测定体系,以考察优化方法和思路的适用性。结果表明:表面活性剂PEG 8000的引入使得覆盖在脂肪酶活性位点的α-螺旋结构被重排而打开,脂肪酶由封闭构象转为并保持在活化构象,脂肪酶活性增强;优化测定体系的最适条件为pH 8.0、反应温度30℃、酶质量浓度1.00 mg/mL、底物浓度6 mmol/L、反应时间5 min,在此条件下测得的酶活力是常用p-NPP法(pH 8.0、反应温度30℃、酶质量浓度2.50 mg/mL、底物浓度10 mmol/L、反应时间8 min)测得酶活力的1.4倍;重复性和准确性试验显示,优化p-NPP法重复测定结果的相对标准偏差为1.21%,加标回收率为95.60%,均优于常用p-NPP法;优化方法和思路适用于其他来源的脂肪酶活力测定体系的优化。综上,通过将表面活性剂引入p-NPP法的脂肪酶活力测定体系,以酶反应动力学理论为指导优化测定条件,明显提高了方法的灵敏度,并有效保证了测定结果的重复性和准确性,缩短了检测时间,节省了检测成本。

连续流酶反应器的研究

文章以酶法合成头孢羟氨苄在两种酶反应器的反应为例,对不同反应器依次进行对比,在反应过程中按时取样,利用高效液相色谱仪进行定量分析,追踪母核7-ADCA转化率或者回收率。对不同酶反应器设备在生产中的应用进行比较,实验结果表明,在其他物料配比、温度等工艺条件一致的情况下,连续流酶反应器转化率高于普通液相酶反应设备。

基于聚合酶反应和发夹型核酸适体的蛋白质荧光检测新方法

设计合成了一种发夹型核酸适体（Aptamer），结合聚合酶反应建立了蛋白质荧光分析新方法．该核酸适体同时作为蛋白质配体和聚合反应模板，与靶蛋白特异结合后，其构象发生了变化，启动聚合反应，从而在未直接标记核酸适体的情况下，通过监测聚合反应进程来检测蛋白质的浓度．采用该方法检测凝血酶的线性范围为0．5～8nmoL／L，检测下限为0．5nmoL／L，为蛋白质检测提供了一种简便快速的非直接标记的荧光分析方法，有望在蛋白质组学的研究中得到广泛的应用．

卵形鲳鲹消化酶活性的研究Ⅳ 养殖水温和酶反应温度对幼鱼酶活性的影响

比较研究了不同的养殖水温和酶反应温度对卵形鲳鲹幼鱼（体重为0.82±0.15 g）消化酶活性的影响。在第一组试验,将卵形鲳鲹幼鱼分别在19℃、22℃、25℃、28℃和31℃各温度下养殖7 d,然后在相同的酶反应温度下测定其消化酶活性;第二组试验,将卵形鲳鲹幼鱼在25~26℃驯养7 d,然后分别在15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃、45℃和50℃的酶反应温度下测定其消化酶活性。结果表明,在19~31℃养殖水温下,卵形鲳鲹幼鱼蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性随水温上升均呈先上升后下降的趋势;蛋白酶活性在28℃时最高,淀粉酶活性在25℃时最高,脂肪酶活性在22℃时最高。在15~50℃的酶反应温度范围内,卵形鲳鲹幼鱼蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶活性随温度上升均呈先上升后下降的趋势;蛋白酶活性在40℃时最高,淀粉酶活性在35℃时最高,脂肪酶活性在40℃时最高;与养殖水温相比,其最适反应温度明显偏高。

芯片式流通池顺序注射可更新表面反射光谱法用于酶反应检测

将芯片式流通池顺序注射可更新表面反射光谱法用于酶反应检测。HRP催化H2 O2 氧化BPR底物的反应用于对H2 O2 的检测。此反应体系与葡萄糖氧化酶联用 。

动力学分析方法检测酶反应活性中间体的研究

提出了一种检测酶反应活性中间体的动力学新方法．利用中间体的反应活性，加入合适的竞争剂使中间体在转化为产物的同时能与竞争剂反应．监测中间体与竞争剂反应的动力学过程以获得中间体信息．该法既能研究自由基中间体，也能研究非自由基中间体，便于研究快反应和跟踪动态过程．用该法对辣根过氧化物酶催化过氧化氢氧化去甲肾上腺素的中间过程进行了研究．

酶反应提取技术在中药化学成分提取中的应用

酶反应提取技术(生物酶解提取技术)是利用酶反应所具有高度专一性的特点,通过适当的酶选择性地破坏植物细胞壁,使植物细胞内的成分更容易溶解、扩散的原理而应用于中药有效成分提取的新技术。该技术不但具有条件温和、易除杂质、节约能耗、浸出率高、设备简易、减少热敏成分降解等优势,而且具有应用于大规模工业化生产的潜力。其应用前景十分广阔,已经广泛用于中药多糖类、生物碱类、黄酮类、皂苷类、蛋白质类、有机酸类等成分的提取。我们就该技术的应用进展及方法特点做一系统性概述,以期新技术能够更加合理而有效的应用于中药化学成分的提取。

超声波对酶反应的影响

综述介绍了超声波在不同条件下对各种酶反应的影响情况。对超声波声强、频率、底物浓度、溶剂。

反胶团酶反应-膜分离技术研究进展

将反胶团酶反应与膜分离相结合被认为是使反胶团酶反应技术工业化的最有前途的方法。文中介绍反胶团酶反应－膜分离技术的研究现状，探讨了今后进一步研究开发的方向。

NAG微量酶反应比色法的影响因素的探讨

本文讨论了应用NAG酶反应比色法检测细胞的数量,功能状态及影响该方法的诸因素,并与氚标胸腺嘧啶核苷(~3H—TdR)标记法进行了比较。结果表明:1、在一定条件下,细胞浓度与OD值呈正相关关系,可检出4×10~3/孔的细胞变化;外周淋巴细胞经丝裂原刺激后,OD值明显降低(P<0.01);2、该方法比~3H—TdR掺入法稳定,在某些试验中可代替同位素标记法,既避免了同位素的有害影响,又减少昂贵设备;3、该方法敏感稳定、简便实用。

固定化酶反应器及其在蛋白质组研究中的应用

综述了近年来国内外酶固定化载体的研究进展,侧重于无机材料和有机聚合物材料上的固定化酶方法;此外,也介绍了固定化胰蛋白酶反应器与分离系统联用在蛋白质样品分析中的应用,并展望了固定化酶反应器的研究方向及其在蛋白质组中的应用前景。

半导体制冷控温酶反应检测仪

介绍了一种适合进行酶反应动力学分析的仪器。仪器主要由微控制器、仪器放大器、模块电源、半导体制冷器、单色器、可动比色皿架和光电倍增管等组成。活动比色皿架的温度可以调节并恒定在所需要的温度 ,温度的控制范围为 5℃～ 6 0℃ ,在恒温状态温度的波动范围为 0 .1K。

产黄芪甲苷酶的酶反应条件

为提高黄芪甲苷产率，研究了微生物所产的黄芪甲苷糖苷酶将3个糖基黄芪皂苷转化为黄芪甲苷的酶性质。该酶的最佳反应条件为：反应温度为35℃，底物质量浓度为30mg／mL，pH5．0，酶反应时间28h，K^＋、Na^＋对提纯酶有激活作用，Zn^2＋、Fe^3＋对酶有抑制作用，其中Fe^3＋抑制作用显著。在20～60℃、pH4．0～7．0时，酶活力相对稳定。在最佳酶反应条件下，黄芪甲苷的产率为8．7％。

利用酶反应热效应检测过氧化氢酶活性

为了探索酶活性测定的新方法 ,降低酶活性常规测试中干扰因素的影响 ,提高酶活性测定的准确性 ,利用低电势电位差计及热电偶换能器检测过氧化氢酶活性 .结果表明 ,测定时的 H2 O2 质量分数以 9.6 %为好 ,可以用于酶活性从 0 .5 u至 3.5 u酶活力的检测 ;当 H2 O2 质量分数在 2 .4 %～ 7.2 %时 ,酶反应速率与底物浓度有线性关系 ;当底物质量分数超过 9.6 %时 。

反胶团酶反应过程开发研究进展

反胶团酶反应具有水相与有机相酶反应的共同优点 ,因而受到人们的重视。制约其实际应用的重要原因在于如何解决酶的重复利用问题。最初人们采用水溶液萃取法回收酶 ,但由于条件苛刻 ,酶活回收率较低。相变法利用温度的改变使体系分相以实现酶的回收 ,操作简便 ,但仍有较大的酶活损失。连续流两相离心反应器可以实现反胶团酶反应的连续操作且酶的损失很小 ,但该反应器传质速率较低因而转化率不高。膜反应器是反胶团酶反应中研究最多也最有应用前途的一种反应器形式。文中介绍了反胶团酶反应中酶重复利用的方法 ,对其过程开发的最新进展进行了综述。

反胶团酶反应研究进展

介绍了酶在反胶团中的主要特性,对反胶团酶反应的应用、动力学和过程开发的最新进展进行了综述。

一类酶反应底物的光化学荧光研究

研究了对位取代酚类酶反应底物的光化学荧光反应机理，指出光子不仅可以取代过氧化物酶，而且可以取代氧化剂（Ｈ_２Ｏ_２）。用于测定多种酶反应底物，结果满意。

多层开管毛细管酶反应器的制备及在蛋白质酶切中的应用

以石英毛细管作为酶固定化的载体,在毛细管内壁上逐步合成树枝形大分子聚酰胺-胺(PAMAM),再通过交联剂戊二醛将胰蛋白酶直接键合到该大分子的末端氨基上,并对酶固定化条件进行了优化,制备了多层酶反应器.利用该酶反应器对马心细胞色素C等蛋白质进行了酶切,并对酶切的条件进行了优化.实验结果表明,该固定化酶反应器具有较高的酶切效率、良好的重现性和稳定性,可用于蛋白质组学的研究.

计算机图象识别辅助菌种筛选及对甾体激素微生物酶反应的研究

将分形理论和计算机图象纹理分析技术移植到微生物发酵研究中，对菌落和菌丝体形态的定量描述进行了探讨。并利用菌种的分维特征作为筛选高产菌株的直观指标，有效地提高了菌种筛选工作的效率与准确度。探讨了沃氏底物霉菌转化的工艺过程，并以生物全息观念与分形理论为依托，在分形尺度上对生物体形态及其发育过程进行了描述，建立起菌体生长的形态动力学模型，并与生长（浓度）动力学模型相结合，设计出可判别理论最佳投料点的酶活描述模型。