欧文氏菌乳糖酶的分离纯化及其酶学性质研究

对欧文氏菌Erwinia sp.E5株所产β-半乳糖苷酶进行分离纯化,所得纯酶的比酶活为554.92U/mg.蛋白质。对纯化得到的酶进行酶学性质研究,其最适反应温度为40℃,在20℃保持40%以上的酶活力;该酶最适反应pH为7.0,在pH 6.5体系中保持95%的酶活力;Mg2+和Na+对该酶具有激活作用,而Ca2+为弱抑制剂。乳糖水解试验显示该酶在乳糖含量小于10%的反应体系中具有较高反应速率。

重组苯丙氨酸脱氢酶的分离纯化及酶学性质

苯丙氨酸脱氢酶(L-phenylalanine dehydrogenase,EC 1.4.1.20,PDH)在临床上可用作苯丙酮尿症的检测用酶,工业上可用于合成手性氨基酸与手性催化反应,但来自野生菌的PDH产量较低而且纯化困难,限制了其大规模的使用。基因重组酶的开发为解决该问题提供了一个可行的思路。为了研究重组PDH的分离纯化和酶学性质,利用基因工程菌发酵诱导PDH表达,采用双水相分离和离子交换柱色谱得到纯化酶,通过研究酶反应最适温度、最适pH值、动力学参数及热稳定性等得到重组酶的酶学性质。实验发现,纯化后的PDH纯度达到95%,酶反应最适温度为60℃,最适pH值为10.5、酶学动力参数K_m为(4.27±0.28)mmol/L,k_(cat)/K_m为(1.26±0.03)L/(mmol·s),重组酶在50℃高温下10min仍能保持较高活性,具有较好的热稳定性,为该酶在工业化中的应用提供了重要基础数据。

红树林微生物DH-2胞外蛋白酶的性质及产酶条件优化

从大亚湾红树林土壤样品中分离得到产蛋白酶菌株,鉴定所产胞外蛋白酶的酶学性质以及菌株的最佳发酵培养条件。采用平板透明圈法筛选菌株,福林酚显色法测定蛋白酶的酶活,通过单因素和正交试验确定其最佳发酵培养基以及发酵条件。从壤样品中分离得到一株产蛋白酶的枯草芽孢杆菌DH-2,该菌株分泌的蛋白酶最适反应pH和温度分别为8.0和65℃,50℃保温处理60 min后,剩余酶活仍保留80%以上。该蛋白酶对多种金属离子、有机溶剂及表面活性剂均有较好的耐受性。确定该菌株产蛋白酶的最适条件:1%(m/V,下同)可溶性淀粉,1%胰蛋白胨、1%NaCl,初始pH 5.5及7%的接种量,40℃培养36 h。在最适条件下测得其发酵液的酶活为236.30 U/mL,约为初筛时的酶活的8倍。该蛋白酶具有较为广阔的作用温度和pH范围,金属离子、有机溶剂及表面活性剂耐受性好,酶的性质比较稳定。