点突变的酶学检测技术

研究点突变有助于深入认识高等生物的遗传特性、解释个体的表型差异、揭示基因和蛋白质的正常功能、变异的成因以及不同个体对环境变化的响应机制,对功能基因组学研究和建立分子标记都具有重要意义。本文在概述点突变常用的非酶学检测技术基础上,重点介绍了不同酶学检测系统的原理和方法,并对影响点突变酶学检测效果的因素进行了讨论。

用于免疫电镜酶学检测的改良固定液

免疫电镜技术对组织标本的固定具有较高的要求.我们经试验将经典的Carson-Millong固定液的成分加以改进,对35例标本进行葡萄糖醛酸酶及α_1胰蛋白酶的定位、定量研究,取得良好效果。现介绍如下。 1 改良固定液的配制 1.1 经典Carson-Millong固定液的配制 NaH_2PO_4·H_2O9.3g充分溶解于蒸馏水225ml中,NaOH 1.

酶学检测在法医学领域中的应用进展

近年来,随着免疫组织化学等技术的改进与发展,酶学检测逐渐在法医学实验室中开展起来。在法医学研究和实践中,酶学检测技术正展现出越来越广泛的应用前景。大量研究资料表明,酶学检测在推断死亡时间、损伤形成时间、致死原因、体液分析、种属鉴别等领域发挥着重要作用。该文对近几十年来国内外相关文献进行综述,以期为相关研究提供参考。

血清酶学检测在诊断病毒性肝炎中的价值

我院自1999年1月引进美国生产的BECKMAN CX9型全自动生化分析仪,对多种血清醇进行检测,现将其与肝炎有关的结果分析如下:1 资料与方法1.1 临床资料 ①正常对照组50例;②肝病组116例,男91例,女25例,年龄19～71岁,均为我院住院病人。诊断分类依据1995年全国病毒性肝炎会议修订的诊断标准。其中急性肝炎34例,慢性肝炎52例（轻度21例,中度15例,重度16例）,重型肝炎18例（亚重肝12例,慢重肝16例）,活动性肝硬变12例。1.2 方法 晨间空腹抽血,分离血清,采用美国生产的BECK-MAN CX9型全自动生化分析仪同时测定多种血清酶。2 结果 （见附表）。

胃癌及癌前期状态的胃粘膜酶学检测

胃粘膜酶学检测报道尚少,为了探讨胃癌及癌前期状态的生化辅助检查指标,笔者对140例胃粘膜标本进行了γ-谷氨酰转肽酶(γ-GT)、乳酸脱氢酶(LDH)、碱性磷酸酶(AKP)测定,现予报道.1 材料与方法1. 1 检测对象 140例中男96例,女44例.平均年龄46岁.其中胃癌29例,慢性浅表性胃炎41例,慢性萎缩性胃炎70例,其中肠上皮化生33例.所有病例均由病理确诊,慢性浅表性胃炎及慢性萎缩性胃炎均为胃镜复查病例.1.2 方法 经胃镜在病灶处活检粘膜组织一块,用生理盐水洗净血液,置于0.25mol/L庶糖溶液10ml中,在4℃条件用电动匀浆器20000转/分匀浆,经3000g×15分钟离心后取上清液待检.酶活性采用中科院中生公司提供的LDH、γ-GT、AKP试剂盒,并按其说明操作.仪器为荷兰产ZSP-M半自动生化分析仪.组织蛋白采用紫外吸收法测定胃粘膜组织液上清液的蛋白质含量.酶活性测定单位是U/L,蛋白质测定单位是如g/L,以酶活力单位U/L,除以蛋白质g/L,求得酶活性比U/g,排除粘膜大小及干湿度等影响.1.3 各组均值的统计学假设检验用t检验.

黄曲霉毒素的酶学检测方法及应用

黄曲霉毒素是由黄曲霉菌产生的一种次级代谢产物,对人和动物都有很大的伤害。黄曲霉毒素会通过被污染的谷物、粮食、饲料等以及通过用污染的饲料喂养动物而进入人体,从而对人畜产生致癌、致畸等危害,因此,准确地检测食品中的黄曲霉毒素含量具有重要的意义。本文论述了黄曲霉毒素的酶学检测方法,并就其应用进行讨论。

脑脊液蛋白与酶学检测对新生儿化脓性脑膜炎的诊断价值分析

目的:检测新生儿化脓性脑膜炎脑脊液中天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、β2微球蛋白(β2-MG)、乳酸脱氢酶(LDH)、C-反应蛋白(CRP)的水平,探讨蛋白含量变化指标与酶活性对新生儿化脓性脑膜炎的诊断价值,为临床抗菌药物的使用提供有效参考数据。方法:选取2012年7月-2013年7月汕头市潮阳区大峰医院收治的新生儿化脓性脑膜炎患儿(观察组)及正常新生儿(对照组)各60例为研究对象,分别用免疫比浊法检测β2-MG、CRP的水平和连续监测法检测LDH、AST活性,分离培养法检测病原菌。结果:新生儿化脓性脑膜炎脑脊液的β2-MG、CRP、AST、LDH、水平均高,差异有统计学意义(P<0.05);通过分离培养法检测出的病原菌分别为革兰阴性球菌和革兰阳性性杆菌,占有比例依次为18(30.00%)、42(70.00%),治疗效果比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:脑脊液β2-MG、CRP、AST、LDH水平升高,能有效帮助诊断新生儿化脓性脑膜炎,革兰阴性球菌和革兰阳性杆菌是引起新生儿化脓性脑膜炎的主要因素。

遗传性白质脑病的酶学检测分析

目的探讨酶学检测对遗传性白质脑病的诊断价值。方法回顾分析2008年10月至2010年10月首都医科大学宣武医院临床表现、家族史及影像学检查等表现为脑白质病变的患者。采用荧人工合成底物法检测外周血白细胞常见的6种溶酶体酶活性。结果通过入组研究方法的158例中,共筛查出10例阳性结果,分别是GM2神经节苷脂贮积症3例(其中Sandhoff病2例,Tay-Sachs病1例),异染性脑白质营养不良(MLD)3例,球形细胞脑白质营养不良(Krabbe)3例,GM1神经节苷脂贮积症1例。结论对于进行性精神运动迟滞或倒退的患者,外周血白细胞酶活性检测有助于高危人群筛查和部分遗传性白质脑病确诊。

心肌酶学检测对早期发现MP患儿心肌损害的临床价值

支原体肺炎是肺炎支原体引起的急性呼吸道感染伴肺炎，是学龄儿童及青少年常见的一种肺炎，肺炎常可合并心肌损害及其他器官和系统功能紊乱，其中心肌损伤多见。近年来，国内外对肺炎所致的心肌损伤标志物研究较多，其中心肌酶谱、天冬氨酸氨基转移酶（AST）、肌红蛋白（cTn-I）均是心肌细胞损伤、衰竭死亡较好的标志。为了探索支原体肺炎引起的心肌损伤，我科对2011年1月至2013年10月收治的支原体肺炎患儿及正常健康对照组的心肌酶谱、AST、 cTn-I的检测结果进行比较，现将结果汇报如下。

肝脏疾病酶学检测的进展

酶学检测在各种肝脏疾病的诊断中占有重要的位置。近年来国外陆续报道了一些新的特异性较高和诊断价值较大的诊断酶,为肝脏疾病的诊断提供了更客观、更灵敏和更准确的生化指标。本文就这方面的某些进展作一介绍。

酶学检测在肝病诊断中的临床应用

随着检验医学的不断发展,检验仪器、试剂、方法的不断更新,血清酶活力的检测在生化领域中更是发展迅速,尤其用于肝病的辅助诊断、分型以及预后。我们对144例急性肝炎(AH),慢性肝炎(CH),重症肝炎(SH),肝硬化(LC),肝癌(HCC)和阻塞性黄疸(OI)患者的血清同时测定丙氨酸氨基移换酶(ALT)、门冬氨酸氨基移换酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)。

以干血纸片为载体的酶学检测在戈谢病筛查及诊断中的应用

干血纸片（dried blood spots,DBS）法是一种便捷的临床血液样本采集和运输技术,它既保证了待检测样品的生物稳定性又便于储存和运输,是罕见遗传代谢性疾病筛查和诊断的有效工具.DBS早在20世纪60年代就已被用于苯丙酮尿症的新生儿筛查[1].近年来,随着自动化检验技术的发展,DBS在遗传代谢类疾病的诊断及筛查中的应用价值日渐突显[2].戈谢病是一种罕见的常染色体隐性遗传代谢类疾病,临床表现为多脏器受累并呈进行性加重,并可危及生命.DBS技术的发展使戈谢病的筛查和诊断工作有了很大的进展,多个研究中心不断对方法进行优化,大大的提升了临床戈谢病筛查和诊断的准确性.目前,多个国家已经针对新生儿开展了大规模的戈谢病筛查工作,极大的改善了戈谢病的治疗情况.现综述DBS为载体进行的戈谢病筛查和诊断,为开展新生儿及高危戈谢病患者的筛查提供借鉴和参考.

血样低温放置时间对黏多糖贮积症酶学检测的影响

目的探讨4℃条件下血样放置时间对黏多糖贮积症(MPS)酶学检测的影响。方法选择2020年1月5日至9日,采集自5例健康志愿者(男性为2例,女性为3例,年龄为24~30岁)的血样各6管为研究对象。将其依次命名为血样1、2、3、4、5(研究组)。将采集的5×6管血样,置于4℃条件保存,于不同放置时间点(0、24、48、72、96、120 h)对其进行MPS酶学检测。同时收集本院医学遗传科20例健康受试者进行外周血细胞染色体检查后的剩余血样,将其混合与研究组同批次检测作为MPS酶活性正常值(对照组)。①观察研究组血样放置不同时间点,血浆颜色变化,并进行血浆游离血红蛋白(f-Hb)检测,评估血样溶血情况。②进行白细胞分离,并检测放置不同时间点白细胞中α-硫酸艾杜糖醛酸酶(IDUA)、α-N-乙酰葡萄糖胺酶(NAGLU)和β-葡萄糖醛酸酶(GUSB)活性水平,比较各种酶活性水平在不同检测时间点的差异。所有受试者均签署临床研究知情同意书,本研究遵循的程序符合四川大学华西第二医院伦理委员会制定的伦理学批准,并得到该委员会批准(审批文号:20180094)。结果①血样在放置72 h时血浆颜色开始逐渐变红,放置时间越长,变红的程度越深;血浆f-Hb水平提示放置72 h呈增高趋势,并且随着放置时间延长,溶血程度也越来越严重。②血样1~5放置24、48、72、96、120 h时,IDUA、NAGLU活性水平分别与自身未放置血样比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。③血样1~5在放置24、48、72、96 h的GUSB活性水平分别与未放置血样比较,差异亦均无统计学意义(P>0.05);但是,放置120 h时GUSB活性水平明显低于未放置血样,2组比较,差异有统计学意义(t=4.601、P=0.002)。结论综合溶血情况和酶活性水平等多种因素,建议进行MPS酶学检测的外周血血样于采集后72 h(3 d)内送达检测实验室,72~120 h(3~5 d)送达实验室的血样,需取决于血样自身质量和待检测溶酶体酶类型,于120 h(5 d)时送达的检测失败可能性极大。

粘多糖贮积症Ⅱ型的酶学诊断、产前诊断及临床分析

目的检测硫酸艾杜糖-2-硫酸酯酶酶活性,对粘多糖贮积症Ⅱ型疾病进行诊断及产前诊断。方法设置荧光检测仪激发波长355μm,发射波长460μm,检测处理后的血浆或细胞上清液。结果共测17标本,门诊患者10例,其中1例为女性,硫酸艾杜糖-2-硫酸酯酶酶活性均异常;胎儿产前诊断7例,根据酶活性结果判定5例正常,2例患病。结论荧光酶学方法检测粘多糖贮积症Ⅱ型疾病操作快速、诊断明确。