灰色链霉菌RX-17溶菌酶R2的纯化及其酶学鉴定

从灰色链霉菌 (Streptomycesgriseus)RX 1 7的发酵液中 ,通过硫酸铵分级沉淀 ,CM SephadexC 5 0和CM SepharoseFastFlow离子交换层析 ,纯化得到了溶菌酶R2 .该酶分子量约为 2 4 8kD ,等电点约为 9 7,N端 1 5个氨基酸的顺序为DTSGVQGIDVSHWQG .R2酶溶解变链球菌Ingbritt(StreptococcusmutansIngbritt)的最适作用温度为 5 5℃ ,最适pH为 7 0 .5 0℃处理 1h ,R2酶残存酶活74 % ,碱性条件 (pH >9)下该酶保持稳定 .Zn2 + 、Cu2 + 、Fe2 + 、Cd2 + 、Pb2 + 可使酶完全失活 ,螯合剂、盐酸羟胺、溴替丁二酰亚胺及离子型去垢剂SDS抑制R2酶的溶菌作用 ,而非离子型去垢剂TritonX 1 0 0等则能促进溶菌 .R2酶溶菌谱广泛 ,能够溶解多种鸡卵清溶菌酶不能作用的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 .从对金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)的高活性来看 ,该酶应分类为 β 1 ,4 N ,6 O 二乙酰胞壁质酶 (β 1 ,4 N ,6 O diacetylmuramidase) .

Klebsiella sp.B-36的分离鉴定及产脂肪酶特性研究

从郑州西郊采集的土壤样品中筛选到一株产耐高温酸性脂肪酶菌株B-36,根据其形态、生理生化特征及16S rDNA序列分析初步鉴定为克雷伯氏菌(Klebsiella sp.)。对该菌株产脂肪酶特性研究结果表明:该酶的适宜作用温度为60℃,适宜pH 4.0,该酶在60℃热处理70 min酶活力可保持在80%以上,说明该酶具有良好的热稳定性。同时,该酶在酸性环境中静置1 h后还保持70%以上的酶活力,说明该酶在酸性条件下较稳定。金属离子Mg2+、Ca2+、Na+以及EDTA对酶有明显的激活作用,Fe3+、Cu2+及Zn2+对酶有抑制作用,K+对酶几乎没有影响。

Bispora sp. MEY-1来源的嗜酸海藻糖酶TreA酶学性质研究

酸性海藻糖酶作为生物催化剂在生物工业中广泛应用,挖掘酶学性质优良的酸性海藻糖基因具有重要意义。从Bispora sp.MEY-1中成功克隆出一个酸性海藻糖酶基因TreA,并在毕赤酵母GS115中实现高效表达。对纯化后的酸性海藻糖酶TreA进行酶学性质鉴定,其最适pH为4.0,在pH 2.2~5.0范围内,该酶能够维持60%以上的酶活力。TreA在偏酸条件下稳定效果比较好,在pH 1.0~4.0条件下处理1 h,可以剩余88%以上的酶活力。TreA的最适温度为60℃,在40~70℃之间都可以维持50%以上的酶活力,属于中高温酶。重组海藻糖酶TreA的比活为1913 U·mg^(-1),动力学参数K_m和V_(max)分别为0.67 mg·mL^(-1)和119μmol·min^(-1)·mg^(-1)。同时,还评估了不同金属离子或化学试剂对纯海藻糖酶TreA的酶活性影响及其蛋白酶抗性。极大丰富了海藻糖酶基因资源,促进了其在生物工业中的应用。