Rubisco及其活化酶定位于豌豆和蚕豆叶绿体中

运用免疫金标记电镜技术研究了豆科C3植物豌豆(PisumsativumL.)和蚕豆(ViciafabaL.)叶片中Rubisco及其活化酶(RCA)的细胞定位,结果表明:两种植物叶片解剖结构及叶绿体超微结构相似,叶肉细胞叶绿体具有发达的基粒片层,Rubisco和RCA免疫金标记颗粒主要分布于叶绿体的间质中,在基粒片层上很少,在表皮的气孔保卫细胞叶绿体内也有免疫金颗粒标记,在细胞质、液泡、线粒体等细胞器中无特异性标记。两种植物光合作用关键酶在叶绿体中定位的相似性,体现了C3植物在光合器结构与功能上具有共性。

枸杞果实ATP酶超微细胞化学定位研究

运用常规ATP酶超微细胞化学定位技术,对宁夏枸杞果实发育不同阶段的韧皮部和果肉库薄壁细胞ATP酶分布进行了观察研究。结果显示,在果实发育过程中SE/CC复合体与周围韧皮薄壁细胞间存在共质体隔离,韧皮薄壁细胞及果肉库薄壁细胞的胞间连丝较少,但是与果肉库薄壁细胞相邻的韧皮薄壁细胞的胞间连丝较多。囊泡和膜泡在筛管、韧皮薄壁细胞和库薄壁细胞中很丰富,并且质膜、囊泡膜、液泡膜上ATP酶沉淀物在韧皮部各细胞分布较少,在果肉库薄壁细胞分布较多,特别是在果实第二次快速生长期,果肉库薄壁细胞膜系统、细胞壁和胞间隙的ATP酶活性剧烈增强。此外,果肉库薄壁细胞的质膜ATP酶具极性分布特点。由此得出,枸杞果实韧皮部卸载是一种需要能量驱动的过程,其卸载途径主要以质外体途径为主,在从韧皮部向果肉库薄壁细胞卸出时可能为共质体和质外体途径共存。膜泡运输是枸杞果实同化物卸出和转运的重要方式,而韧皮薄壁细胞在同化物卸出和转运过程中承担了主要转运角色;果肉库薄壁细胞进行主动和定向卸载、积累同化物的能力很强。

施氏假单胞菌JHY01菌株毒死蜱降解酶的定位及其提取条件的优化

对具有降解有机磷农药毒死蜱作用的施氏假单胞菌JHY01菌株的降解酶进行定位,测得其胞外酶、胞内酶、细胞碎片中残留酶对毒死蜱的降解率分别为8.41%、79.85%、77.14%。由此确定该菌株的有机磷降解酶主要为胞内酶。采用超声波破碎方法提取降解酶,对降解酶提取条件进行正交优化,结果显示,最佳超声波(超声波碎仪Sonics-VCX500,功率500W,频率20kHz)破碎条件是:菌体重量:缓冲液体积为1:4(g/ml),总辐射次数30次,每次辐射4s,间隔4s。在此条件下所提取的粗酶液酶活力最高,对毒死蜱的降解效率可达84.47%。

一株生孢噬纤维菌的纤维素酶的定位研究

生孢噬纤维细菌Sporocytophagasp.JL-01是能够降解纤维素的滑动细菌,通过对该菌株发酵上清液、荚膜液、超声波破碎后的上清液、破碎细胞碎片及完整细胞的CMC酶活、滤纸酶活的研究,对其所产生的纤维素酶在细胞上的定位进行了研究.结果显示:生孢噬纤维细菌Sporocytophagasp.JL-01可通过细胞质膜向细胞外分泌CMC酶,而其滤纸纤维素酶则存在于细胞质膜上.

异噁草松降解酶的定位及酶学性质研究

对可降解异噁草松的降解菌W2的降解酶进行定位试验,测得其细胞碎片悬浮液、胞外酶和胞内酶对异噁草松的降解率分别为36.28%,8.71%和62.27%,因此确定降解异噁草松的主要活性物质位于降解菌细胞内,属于胞内酶。应用气相色谱法研究异噁草松降解酶的酶学性质,结果表明:最佳酶促反应时间为60min,最佳酶液添加量为0.3mL,最适pH为7.5,最适反应温度为35℃,米氏常数Km=2.668×10-4 mmol/mL,最大反应速率Vmax=0.322×10-4 mmol/min。

三唑磷农药降解酶的定位及酶学性质研究

采用超声波破碎法破碎三唑磷农药降解菌芽孢杆菌TAP-1,研究不同细胞组分对三唑磷农药的降解率,应用液相色谱法研究三唑磷农药降解酶的酶学性质。结果表明,胞外酶、胞间粗酶液和胞内酶对三唑磷的降解率分别为2.8(±0.34)%、12.8(±2.44)%和84.4(±6.71)%。菌株TAP-1降解三唑磷农药的主要活性物质位于降解菌细胞内,属于胞内酶组分。该酶最适作用pH值为6.5~7.0,在pH 5.0~7.5之间,酶活力均能保持在最高酶活力的68%以上。最适反应温度为30℃,在25~40℃温度范围内能保持75%以上的降解活性。不同化学试剂和金属离子对酶活性产生不同的影响。巯基修饰剂、EDTA、Hg^(2+)和Mn^(2+)对酶活性有抑制作用。Mg^(2+)、Co^(2+)和Fe^(3+)对酶活性有促进作用。该降解酶米氏常数(Km)为23.02μmol/L,最大反应速度(Vmax)为0.738μmol/mg·min。

氟磺胺草醚降解酶的定位及其酶学性质的研究

[目的]对氟磺胺草醚降解菌提取的降解酶进行定位,探讨其最适的酶促反应条件。[方法]通过采用紫外分光光度法测定酶活力来对氟磺胺草醚降解菌株F12提取的降解酶进行定位,并研究其酶学性质。[结果]氟磺胺草醚降解菌株F12降解酶属于胞外酶,最适的酶促反应时间为30 min,最佳的酶浓度为1.0 ml,最适pH为7.5,最适反应温度为35℃,最适添加药浓度为150 mg/L。[结论]试验结果为规模化生产氟磺胺草醚降解酶制剂及治理污染土壤提供了理论依据。

大肠癌患者外周血淋巴细胞光镜酶定位与活性研究

采用光镜酶细胞化学方法，探讨39例大肠癌患者外周血淋巴细胞Mg^2+ -ATP酶与G-6-P酶活性变化与肿瘤生物学行为关系。结果表明：(1)Mg^2+-ATP酶定位在淋巴细胞膜下方，G-6-P酶定位在细胞质内，定位准确；(2)两种酶阳性率在大肠癌患者组明显低于正常对照组(P＜0．01)；(3)两种酶阳性率在低分化癌组低于高分化癌组(P＜0．01)；(4)两种酶阳性率在无淋巴结转移组高于有转移组(P＜0．01．P＜0．05)。结果提示：大肠癌患者外周血淋巴细胞Mg^2+ -ATP酶与G-6-P酶活性下降可能是大肠癌患者免疫功能逐渐下降的主要原因之一，应用光镜酶细胞化学方法检测大肠癌患者外周血淋巴细胞酶活性变化可作为判定肿瘤生物学行为及预后的重要指标。

甘蔗叶不同部位ATP酶活性细胞化学定位

甘蔗叶片,叶鞘和肥厚带韧皮部 ATP 酶活性定位于筛管、伴胞的质膜、内质网和某些伴胞细胞基质、小囊泡和发育成熟的液泡上;叶片韧皮部薄壁细胞、厚壁细胞和厚壁通道细胞质膜及小囊泡中亦显示有 ATP 水解产物;维管束鞘细咆与厚壁细胞或厚壁通道细胞所构成的细胞间隙上也存在有 ATP 酶活性反应产物沉淀。甘蔗叶片大、中、小三种维管束,从小维管束到大维管束,面向细胞间隙的细胞表面上的 ATP 酶活性逐渐增强,而维管束鞘细胞质膜上的 ATP 酶活性则趋于减弱;同一维管束内则以韧皮部细胞的 ATP 酶活性最强。维管束鞘细胞与叶肉细胞之间存在很多的胞间连丝,并表现出高的 ATP 酶活性。讨论了 ATP 酶活性的分布状态与叶肉细胞的光合产物向韧皮部运输的关系。

小麦天然钙调素抗体制备及酶标免疫组化定位

以小麦不修饰的天然钙调素(CaM)制备抗体.免疫学特性分析表明,小麦CaM抗体不能与牛脑CaM发生交叉反应,而可与多种植物CaM发生良好的交叉反应,即所得抗体对多种植物CaM是专一的.酶标免疫组化法在烟草愈伤组织细胞定位表明,细胞质CaM含量较高;在细胞核中,特别是核仁中亦含有CaM.

pH-酶触型盐酸小檗碱结肠定位片大鼠体内的释药研究

目的：对pH-酶触型盐酸小檗碱结肠定位片在大鼠体内的释药特点进行研究。方法：将pH-酶触型盐酸小檗碱结肠定位片（Ф3mm）大鼠灌胃给药,在各时间点将大鼠处死,取出胃肠道,采用HPLC检测,内标法分别测得大鼠各段胃肠道内容物中盐酸小檗碱的含量,研究药物在胃肠道各部位内容物中含量的经时变化,评价其释药特性。结果：盐酸小檗碱在胃肠道内容物中的线性范围为0.1-20.0μg.mL-1,线性关系良好（r〉0.999）,定量限为0.1μg.mL-1;药物于6-14h在盲肠和结肠内具有较高的药物浓度。结论：pH-酶触型盐酸小檗碱结肠定位片具有较好的结肠定位释药特性。

大白鼠甲状腺细胞膜系统3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶活性的电镜细胞化学定位

本研究用酶电镜细胞化学法观察了大白鼠甲状腺细胞3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶活性的定位。结果证明,3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶的活性定位于甲状腺滤泡细胞的顶部细胞膜和微绒毛,在内质网则存在于膜的外表面,在甲状腺滤泡细胞核也位于核膜的外表面。在甲状腺滤泡上皮细胞之间的微血管内皮细胞膜上也观察到了大量3′,5′-环核苷酸磷酸二酯酶的阳性反应颗粒。

温光诱导甜菜当年抽薹过程中细胞色素氧化酶的分析

通过温光条件诱导甜菜 (Beta vulgaris L .)当年抽薹的过程中 ,诱导株内部发生着复杂而综合的生理和生化过程 ,在低温春化后细胞色素氧化酶活性表现出较高水平 ,以后随着生育的进程而逐渐降低 ,与对照组差异显著。试验设计中首次运用甜菜材料进行了细胞色素氧化酶的超微细胞化学定位 ,并与上述结果相互佐证 。

温光诱导甜菜当年抽薹过程中过氧化物酶的研究

通过温光条件诱导甜菜 (BetaVulgarisL .)当年抽薹的过程中 ,诱导株内部发生复杂的生理和生化变化 ,在低温春化后过氧化物酶活性表现出较高水平 ,以后随着生育的进程而逐渐降低 ,与对照组比较差异显著 ,并从过氧化物酶的同工酶酶谱、过氧化物酶的超微细胞化学定位的角度加以证明。

酒酒球菌31MBR的β-D-葡萄糖苷酶活性

以对-硝苯-β-葡萄糖苷为底物,采用分光光度法对酒酒球菌31MBR的β-D-葡萄糖苷酶活性进行了初步研究。结果表明:酒酒球菌31MBR具有很高的β-D-葡萄糖苷酶活性,该酶为胞内酶,且主要为可溶性酶,酶活在对数生长中期最高且随着生长时间的延长呈下降趋势。β-D-葡萄糖苷酶为结构酶,但在纤维二糖和熊果苷的诱导下酶活均有不同程度的提高。酒酒球菌31MBR具有β-D-葡萄糖苷酶活性对增加葡萄酒香气和提高葡萄酒品质具有重要意义。

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶

介绍了尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶定位、酶学特征及其基因的克隆。

烟草花发育过程中花药和花粉IAA分布规律的研究

以烟草(Nicotiana tabacumL.)花药为材料,通过4,’6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)染色详细观察花粉发育过程,获得了花药发育时期与花蕾大小的对应关系;通过吲哚乙酸(IAA)单克隆抗体、免疫组织化学技术以及DR5∶∶GUS转基因植株的GUS活性对花药和花粉发育过程中生长素的分布规律进行了研究。免疫酶标记结果表明,在不同的花药发育时期IAA水平呈现出明显的差别。小孢子母细胞时期,IAA在整个花药中均有分布,并且在小孢子母细胞发育晚期,IAA信号集中在小孢子母细胞的细胞核中;随着小孢子母细胞减数分裂后形成四分体,IAA信号逐渐减弱,四分体中几乎没有信号;单核花粉期的花药中IAA信号进一步减弱,仅存在于花药壁中;待小孢子继续发育为成熟二核期时,花粉和整个花药组织中均出现较强的IAA信号。GUS活性检测结果表明,烟草DR5∶∶GUS转基因植株中花药和花粉粒的GUS信号与IAA免疫酶定位结果基本一致。总的来说,IAA在烟草花药和花粉中的积累呈现出由强到弱、再由弱到强的分布规律,暗示IAA在被子植物花药和花粉发育过程中可能起着较为重要的作用。

毒死蜱降解菌株的分离鉴定及降解条件优化

目的:分离筛选出毒死蜱降解菌株,研究其生长特性及降解特性,菌株降解酶的定位及降解广谱性研究。方法:取自长白山区周边农田土,利用以毒死蜱为碳源的无机盐培养基对土壤中的微生物进行富集培养,通过形态学观察、生理生化鉴定以及16S rRNA分子测序确定菌属。菌株毒死蜱降解酶的定位,菌株对敌敌畏、氧化乐果、甲基对硫磷、水胺硫磷、乙草胺和莠去津广谱降解的测定,通过单因素实验和正交试验对菌株降解毒死蜱条件进行优化。结果:筛选到一株毒死蜱降解菌Pseudomonas aeruginosa AY-1,经初步鉴定为铜绿假单胞菌,其毒死蜱降解酶为胞内酶,对敌敌畏、氧化乐果、甲基对硫磷、水胺硫磷、乙草胺和莠去津具有良好的广谱降解能力,经正交试验优化后,最适降解条件为35℃,pH=8,底物浓度为100 mg/L,降解效率为75.09%。结论:菌株Pseudomonas aeruginosa AY-1对毒死蜱具有较高的降解能力,对有机磷农药有一定的广谱降解效果,在有机磷农药污染环境修复及去除食用农作物表面有机磷农药残留方面极具应用潜力。

棉花PTS2受体基因(GhPex7)的克隆及表达分析

利用cDNA AFLP差异片段F0 10 ,通过RACE延伸、EST检索等方法获得了一个棉花过氧化物酶体定位信号2受体蛋白基因 (peroxisomaltargetingsignaltype 2receptor,GhPex7p)的编码序列。该cDNA包含一个 95 4bp的开放阅读框 ,编码 317个氨基酸 ,推测其等电点为 5 6 0 3。同源性分析表明 :推测GhPex7与拟南芥、酵母、果蝇、小鼠和人的Pex7p基因存在序列相似性 ,其中与拟南芥的同源性最高 ,为 83% ,并具有 3段WD 4 0蛋白家族的保守域 ,与拟南芥AtPex7的编码蛋白同类。Southern杂交结果表明该基因在陆地棉基因组中存在两个拷贝。Northernblotting和RT PCR分析表明该基因在棉花根、茎、叶、花、胚珠和纤维中均表达 ,但茎、叶组织中的表达水平明显高于胚珠和纤维。