酶性氧化合成茶黄素条件优化的研究

利用提取粗酶液在单因素试验和正交试验进行合成茶黄素以及在此基础上利用捣碎茶鲜叶(不提取粗酶液)直接进行合成茶黄素试验以确定最优反应条件。结果表明,在本试验反应体系中,茶黄素酶促合成的最佳条件(茶黄素总量)为:温度为30℃,反应体系的最佳pH值为4.8,底物浓度为0.9g/100ml,酶源物浓度为28g/100ml(以鲜叶重量计),通氧量为0.4L/min,最佳反应终止时间是40min。其中温度和pH值是反应体系中两个极其重要的影响因素(P<0.05);通氧量也是影响茶黄素酶性合成的必不可少的条件之一。

内皮源性一氧化氮合酶的活性调节

内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)代谢精氨酸产生的一氧化氮(NO)在调节血管的稳态中发挥着重要作用,内皮功能失调所致疾病多与NO的释放和活性受损有关。近年来关于eNOS活性词节的研究很多,机制主要包括乙酰化修饰所决定的亚细胞定位,蛋白-蛋白相互作用以及磷酸化修饰。许多体液因子和机械刺激可通过不同的方式调节eNOS活性。为了更好地认识eNOS的活性调节,本文就该领域最新的研究进展进行归纳总结。

内皮源性一氧化氮合酶基因多态性与缺血性脑卒中相关性研究

目的通过病例对照研究,探讨内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)基因多态性与缺血性脑卒中的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)和限制性片断长度多态性(RFLP)技术,对452例缺血性脑卒中患者和153例健康对照人群的eNOS基因rs3918181位点进行基因多态性检测。结果大动脉粥样硬化型脑梗死组的基因型与等位基因频率与正常对照组比较P>0.05,无统计学意义。腔隙性脑梗死组eNOS基因AA+AG基因型频率明显高于对照组,相对于GG基因型,暴露于AA+AG基因型人群的OR值为1.644(95%CI 1.124～2.405)。腔隙性脑梗死A等位基因频率也显著高于对照组,相对于G等位基因,A等位基因OR值为1.419(95%CI 1.061～1.898)。结论内皮源性一氧化氮合酶(e-NOS)基因rs3918181位点多态性与腔隙性脑梗死相关;A等位基因可能增加中国汉族人罹患腔隙性脑梗死的风险。

内皮细胞性一氧化氮合酶基因可变性重复序列多态性与脑梗死的关系

目的 探讨内皮细胞性一氧化氮合酶 (eNOS)基因内含子 4可变性重复序列 (VNTR)的多态性与脑梗死 (CI)的关系。方法 应用聚合酶链反应 (PCR)技术 ,检测 15 2例CI患者的基因型 ,并与对照组比较。应用多元回归分析进行风险因素独立性分析。结果 CI组eNOS基因ab基因型的频率 (2 2 .36 % )明显高于对照组 (12 .2 8% ) ,a等位基因的频率 (12 .5 % )也明显高于对照组 (7.0 % ) ,差异均有显著性 (均P <0 0 5 )。ab基因型较bb基因型对CI的OR为 2 .0 5 (P <0 0 5 ) ,在用多元回归分析校正其他危险因素后OR为 1.98(P <0 0 5 ) ;CI组患者患高血压、高血脂、糖尿病及吸烟的比例较对照组为高 (均P <0 0 1) ,CI组患者年龄也较对照组高 (P <0 0 5 )。结论 eNOS基因ab基因型与CI有相关性 ,等位基因a可能是CI的独立危险因素。

电针调节抑郁症双重状态的神经元性一氧化氮合酶机制

目的对电针治疗抑郁症双重状态的神经元性一氧化氮合酶(nNOS)机制研究进行初步探讨。方法通过对近几年来发表的相关文献进行总结与分析,探讨nNOS可能是电针调节抑郁症双重状态的机制之一。结果 1)抑郁症双重状态-焦虑和抑郁与nNOS密切相关,即:慢性应激早期大鼠海马nNOS活性增高,介导焦虑样行为;慢性应激晚期大鼠海马nNOS活性降低,介导抑郁样行为。2)nNOS可能是电针调节抑郁症双重状态的机制之一,即:电针减少慢性应激早期大鼠海马nNOS的释放,达到抗焦虑样作用;电针提高慢性应激晚期大鼠海马nNOS的表达,达到抗抑郁样作用。结论 nNOS可能是电针调节抑郁症双重状态的机制之一。

内源性一氧化氮合酶抑制物与子痫前期关系的研究

目的:探讨子痫前期患者血浆内源性一氧化氮合酶抑制物-非对称性二甲基精氨酸(asymmetric dimethylarginine,ADMA)及胎盘内皮性一氧化氮合酶(endothelial nitricoxide synthase,eNOS)的表达与子痫前期的关系。方法:2004年1月至2005年1月广州医学院第三附属医院住院分娩的子痫前期孕妇30例,正常晚期妊娠10例,早孕12例。用高效液相色谱法(HPLC)测定血浆ADMA,免疫组化法检测胎盘组织中eNOS。结果:子痫前期组ADMA水平明显高于正常晚期妊娠组,分别为17.97±7.25μg/ml和10.27±1.67μg/ml,两组差异有统计学意义(P<0.01)。而子痫前期组胎盘eNOS表达则明显低于正常晚期妊娠组,两组差异有统计学意义(P<0.05)。结论:子痫前期患者体内eNOS抑制物ADMA升高,胎盘eNOS活性下降,提示ADMA作为eNOS的抑制调节因子在子痫前期病理生理改变中可能起重要作用。

髓性过氧化物酶与动脉粥样硬化相关性研究进展

髓性过氧化物酶是由活化的吞噬细胞分泌的相对分子质量为 75× 2kDa的一种血红素蛋白。它能通过作用于氯化物和酪氨酸 ,分别生成次氯酸和酪氨酰基 ,启动低密度脂蛋白的过氧化 ,产生氧化型低密度脂蛋白 。

糖尿病大鼠视网膜神经源性一氧化氮合酶表达及乙酰胆碱酯酶的变化

目的:观察糖尿病大鼠视网膜神经源性一氧化氮合酶(nNOS)蛋白和基因水平的表达以及乙酰胆碱酯酶(AchE)的变化。方法:注射链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型,于注射后12周和16周时将模型组及对照组大鼠的眼球冰冻切片。用原位杂交法、免疫组织化学法和组织化学法分别显示nNOS mRNA、nNOS和AchE阳性神经元或神经纤维,RS IMAGE软件进行图像分析处理。结果:与对照组比较,糖尿病大鼠视网膜nNOS mRNA、nNOS、AchE的光密度值均降低,12、16周都有显著性差异。结论:糖尿病大鼠视网膜nNOS基因转录和表达均下降,AchE含量降低,导致了NO水平下降,成为糖尿病性视网膜病变的主要因素之一。

内皮源性一氧化氮合酶基因G894T多态性与脑梗死的关联性研究

目的 探讨内皮源性一氧化氮合酶 (e NOS)基因 G894T多态性与脑梗死的关系。方法 取病例组 1 4 8例 ,对照组 1 0 9例 ,各例抽取新鲜静脉血 5 ml,提取 DNA后 ,通过 PCR- RFL P法进行基因分型。结果 病例组和对照组各基因型分布 GG、GT、TT分别是 83.1 % ,1 4 .2 % ,2 .7% ,对照 90 .8% ,9.2 % ,0 .0 0 % (χ2 =3.1 78,P=0 .0 75) ,符合 Hardy- Weinberg平衡 ,两组统计学上无明显差异。但 T等位基因频率在病例组中较对照组明显升高 (P=0 .0 2 7) ,相对危险度 1 .33(95% CI:0 .61 7～ 0 .92 2 )。病例组中 ACE D等位基因频率亦较对照组明显升高 (P=0 .0 1 7)。病例组 T等位基因携带者的血浆胆固醇水平较 GG纯合子患者明显升高 (P=0 .0 2 5) ,而在对照组中并无此差异。结论 e NOS基因 G894T突变可能是国人脑梗死的遗传学危险因素 ,其致病机理可能与 ACE D缺失型及血浆胆固醇水平有协同作用。

ANCA相关性血管炎存在血管内皮细胞血栓调节蛋白以及内皮源性一氧化氮合酶弥漫性丢失

目的探索ANCA相关性血管炎(antineutrophil cytoplasmic antibody-associated vasculitis,AAV)微小动脉和静脉的血管内皮细胞膜结合性血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)、内皮源性一氧化氮合酶(endothelial-nitricoxide synthase,eNOS)的表达规律。方法 12例经过临床、血清免疫学检查证实的AAV患者,2例Wegerner肉芽肿、5例显微镜下多血管炎和5例Churg-Strause综合征。Birmingham血管炎活动评分提示疾病处于活动期。均进行腓肠神经活检标本的常规组织学染色以及以抗CD68、CD3、CD20、血栓调节蛋白(thrombomodulin,TM)、eNOS以及第八因子(von Willebrand factor,vWF)抗体为第一抗体的免疫组织化学染色,以正常血管为对照。结果 12例患者的腓肠神经病理检查发现9例活动性血管炎,可见大量CD68阳性单核细胞和CD3阳性淋巴细胞浸润。和对照组相比,所有患者微小动脉和毛细血管内皮细胞eNOS和TM减低或消失,包括无炎细胞浸润血管,其中eNOS的下降程度较TM更明显。Churg-Strause综合征的血管内皮细胞eNOS和TM下降最显著。结论 AAV外周血管存在血管内皮细胞TM和eNOS弥漫性下降,两者下降程度在AAV不同亚型之间存在差异。

乙酸铜对黄鳝白细胞及过氧化氢酶活性的影响

目的以黄鳝为材料研究不同浓度的乙酸铜对黄鳝外周血白细胞数目、肝脏过氧化氢酶(CAT)活性的影响。方法采用鱼类致突变实验方法,以0.25,1.00,3.00,9.00,15.00,30.00mg/kg不同剂量乙酸铜处理黄鳝。结果在低剂量范围内,随着乙酸铜剂量的增加黄鳝外周血白细胞的数目下降,而CAT活性升高;至1.00mg/kg时白细胞的数目达最低值,至3.00mg/kg剂量时CAT活性达最大值;剂量再增加,白细胞的数目上升、CAT活性下降。结论一定剂量乙酸铜能明显影响黄鳝外周血白细胞数目及CAT活性,且乙酸铜的作用具有双向性。

剥夺异相睡眠导致大鼠海马中神经元性一氧化氮合酶阳性细胞表达减少与记忆维持

目的:揭示记忆是否在异相睡眠中得到加强和巩固,取消异相睡眠是否导致记忆维持能力下降及其下降的机制.神经元性一氧化氮合酶(neuronal n itric oxide synthase,nNOS)是否参与记忆中枢海马结构调节,剥夺异相睡眠(para-doxical sleep deprivation,PSD)是否改变它们在海马的表达.方法:①采用小平台法建立PSD大鼠动物模型.应用Morris水迷宫测试系统检测大鼠空间参考记忆获得及维持的变化;②海马的nNOS免疫组化研究:PSD 24,48和72 h后,立即取脑、固定、行冰冻切片(片厚25μm)、SABC法免疫组化染色、光镜下进行观察分析、摄像.结果:①PSD可造成大鼠空间参考记忆维持能力的损伤;②PSD组大鼠海马中nNOS免疫反应阳性细胞在CA1,CA2,CA3,CA4及锥体细胞层、颗粒层、齿状回稀疏,数目较相应的大平台组(tank control groups,TCgroup)、正常饲养组(control groups,CC group)明显减少(P<0.05).而TC组与CC组相比较无明显变化.结论:①PSD可以造成大鼠空间记忆的巩固障碍,异相睡眠与空间记忆维持有关;②PSD可以造成海马nNOS阳性细胞的表达减少,海马中的nNOS可能参与了大鼠空间记忆巩固的过程.

内皮细胞性一氧化氮合酶基因多态性与缺血性脑卒中的相关性研究

目的 探讨大连地区汉族人内皮细胞性一氧化氮合酶 (ecNOS)基因多态性与缺血性脑卒中的关系。方法 应用聚合酶链反应对 170例缺血性脑卒中群体及 90例非脑血管病群体ecNOS基因第 4号内含子多态性进行分析。结果 在缺血性脑卒中组中 ,高血压、糖尿病、吸烟、纤维蛋白原、颈内动脉狭窄与对照组比较 ,有显著性差异 (均P <0 .0 5 )。非条件性Logistic回归分析证实 ,ecNOS基因多态性不是缺血性脑卒中的独立危险因素。结论 ecNOS

缺氧状态下内皮源性一氧化氮合酶与大鼠肺血管结构重建的关系

目的 探讨内皮源性一氧化氮合酶 (eNOS)对缺氧大鼠肺血管结构重建的影响。方法 将大鼠随分为2组 :常氧组 (n =12 )、低氧组 (n =12 )。以光学显微镜观测 2组大鼠中型肺动脉及小型肺动脉的相对中膜厚度(RMT)。应用eNOS的抗体经免疫组织化学技术对 2组大鼠肺动脉内皮细胞进行定位及半定量分析。结果 低氧组大鼠中型肺动脉及小型肺动脉RMT均高于常氧组 (P <0 .0 1) ;2组大鼠各级肺动脉内皮细胞中均有eNOS的表达 ,常氧组较低氧组表达增强 (P <0 .0 1) ;中型肺动脉内皮细胞中eNOS的表达与相应中型肺动脉RMT之间呈负相关 (r为 - 0 .875 7,P <0 .0 1) ;小型肺动脉内皮细胞中eNOS的表达与相应小型肺动脉RMT之间呈负相关(r为 - 0 .80 4 1,P <0 .0 1)。结论 缺氧大鼠肺动脉中eNOS含量下降参与肺血管结构重建。

61名新生儿髓性过氧化物酶的测定

髓性过氧化物酶(Myeloperoxidase MPO)是中性粒细胞内一种重要杀菌物质。MPO缺乏时,白细胞杀菌功能减弱,临床上可出现反复的细菌感染。测定初生婴儿MPO活性,有助于了解围生期免疫特点和白细胞的发育规律。为此我们测定了61名初生婴儿粒细胞MPO活性,并以健康成人作为对照,以资比较。材料和方法测定对象:61名初生婴儿均为在我院产科出生后1～4天的足月顺产婴儿,出生体重为2.8～3.5kg,其中男婴30名,女婴31名;健康成人年龄在20～40岁之间,男34名,女27名,无新近感染及慢性病史。方法:采用Kaplon报告的简易MPO染色法,染色后在油镜下计数100个中性粒细胞。

北京新生儿内皮源性一氧化氮合酶894G/T及4a/bVNTR基因多态性分布

目的探讨内皮源性一氧化氮合酶(eNOS)894G/T及4a/b VNTR基因多态性在北京新生儿群体中的分布特征及其与既往文献报道其他种族该基因多态性的分布差异.方法收集原代培养新生儿脐静脉内皮细胞、提取基因组DNA,应用聚合酶链反应检测eNOS 894G/T及4a/b VNTR基因多态性.通过Pubmed、中国知网及万方数据检索2005~2019年文献报道的部分其他种族该基因多态性分布情况.结果①222例北京新生儿eNOS基因894G/T多态性中GG、GT、TT基因型频率分别为81.53%、17.12%、1.35%,与文献报道北京成年汉族人(χ^2=0.104,P=0.949)、印度人(χ^2=3.425,P=0.180)、非洲人(χ^2=2.248,P=0.325)及韩国人(χ^2=4.138,P=0.126)比较差异无统计学意义,而与阿拉伯人(χ^2=15.734,P=0.000)及土耳其人(χ^2=31.245,P=0.000)比较差异有统计学意义.②274例北京新生儿eNOS基因4a/b VNTR的aa、ab、bb基因型频率分别为1.10%、12.77%、86.13%,与文献报道北京成年汉族人(χ^2=1.829,P=0.401)、河南汉族人(χ^2=0.869,P=0.647)、韩国人(χ^2=5.346,P=0.069)比较差异无统计学意义;与其他种族人群比较,印度人(χ^2=40.226,P=0.000)、非洲人(χ^2=138.515,P=0.000)、阿拉伯人(χ^2=48.655,P=0.000)、土耳其人(χ^2=27.751,P=0.000)、意大利人(χ^2=20.261,P=0.000)比较差异有统计学意义.结论我国北京新生儿eNOS 894G/T基因多态性与部分亚洲人、非洲人相同,与阿拉伯及土耳其人不同;而4a/b VNTR基因多态性与国内汉族人、韩国人相同,与国外其他种族不相同.

神经元型一氧化氮合酶在心脏功能调节中的作用

神经元型一氧化氮合酶(nNOS)不仅在神经细胞中表达,也存在于心肌细胞。生理状况下,nNOS源性的一氧化氮(NO)通过自分泌以负反馈的调节方式维持细胞内Ca2+浓度稳态,防止细胞内Ca2+浓度超载,对于维持正常的心功能具有重要意义。病理状况下,nNOS的活性发生明显变化,nNOS源性的NO可能参与了心脏疾病的发生和发展。