酶联免疫双抗体夹心法检测牛初乳素中免疫球蛋白IgG

〔目的〕建立检测牛初乳素为原料的保健食品中免疫球蛋白IgG的常用酶联免疫双抗体夹心法。〔方法〕分离纯化小牛血清中IgG,以牛IgG免疫新西兰兔,获得抗牛IgG的血清,分离纯化,制备兔抗牛IgG。〔结果〕1000ng/孔兔抗牛IgG饮被酶联板,3倍比稀释牛IgG,夹心法检测。〔结果〕在牛IgG0.031mg/ml-2.50mg/ml范围,浓度与吸光度值线性相关,方程为:y=0.358+0.767x,相关系数为r=0.995,当添加50mmIgG时,回收率为88.4％,变异系数为6.1％。〔结论〕该方法具有特异性强、快速、灵敏和分析成本低等特点。

用酶标抗体免疫组化法测定性交后阴道内容物中精子的ABO血型

应用间接酶标抗体免疫组化法测出了53例新鲜精液、5例陈旧精斑及40例阴道分泌液中的精子与阴道脱落上皮细胞的ABO血型,30例精子与不同血型分泌型阴道分泌液孵育,未发现精子吸附阴道液中血型物质的现象,同时发现人类睾丸曲精细管中部份生精细胞、精子细胞,精子;直细精管部份上皮细胞、精液、精子;睾丸网大部份上皮细胞及副睾管中的精液与精子均含ABH抗原,故认为精子上的ABH抗原主要是精子固有抗原,13例性交后阴道内容物中精子的ABO型测定结果:7例与供者血型吻合,6例不吻合。6例中5例从O型精子中测出了女方分泌型阴道分泌液中的A或AB物质,1例B型精子未测出B及H抗原,文中对这种现象进行了讨论。

巨细胞病毒IgM抗体捕捉酶标法的建立及应用

建立巨细胞病毒 (CMV)IgM抗体捕捉酶标法 (AC -ELISA) ,并用该法调查 1917例杭州市不同人群的巨细胞病毒感染情况。结果显示 ,抗原浓度、抗CMV抗体酶结合物浓度对测定效果都有不同程度的影响 ,用最适的实验条件建立的AC -ELISA法检测杭州市不同人群 ,表明儿童组CMV感染率高于成人组 ,工人组的感染率高于其他职业人群。以本方法测定CMV -IgM抗体的敏感性和特异性较高 。

双抗体夹心酶联免疫吸附法检测鱼糜制品中鸡蛋卵白蛋白

目的建立双抗体夹心酶联免疫吸附(sandwich enzyme linked immunosorbent assay,sELISA)法检测鸡蛋卵白蛋白(ovalbumin,OVA)的方法,组装定量检测鱼糜制品中OVA含量的ELISA检测试剂盒。方法确定各步骤反应时间,使用棋盘法确定捕获抗体和检测抗体的最佳工作浓度,建立检测方法并对其性能进行评价。结果反应最佳条件为:抗原孵育20 min,检测抗体孵育20min,酶促反应显色10 min。兔抗OVA抗体为捕获抗体,工作质量浓度为1μg/mL,辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)标记兔抗OVA抗体为检测抗体,1:5000(V:V)稀释。采用四参数逻辑曲线拟合标准曲线,所建立sELISA方法的检测范围为8.5~200.0 ng/mL,检出限为3.5 ng/mL,定量限为8.5 ng/mL。批次内和批次间的变异系数分别为2.31%~4.58%和6.06%~12.23%;鱼糜基质中的回收率为80%~130%;测得28种常见食物样品中4种样品的交叉反应率小于0.002%;试剂盒在4℃保存6个月期间,标准品检测结果的变异系数为4.29%~18.91%。结论建立的方法快速、灵敏、准确、稳定性好,可用于鱼糜制品中鸡蛋OVA的定量检测。

酶标抗体法在研究免疫性内耳病中的应用

采用豚鼠耳蜗制作抗原片，用酶标抗体法检测，筛选临床上疑为免疫性内耳病的病人血清。通过不断改进，基本上建立了具有准确、可靠、简单、重复性好等优点的检测方法。为研究免疫性内耳病提供了一种手段，为临床对免疫性内耳病的诊断、疗效评估及预后等提供了参考依据。

抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组E.coli L-天冬酰胺酶及药代动力学研究

目的 建立大鼠血浆中重组E .coliL 天冬酰胺酶的抗体夹心酶联免疫吸附测定法 ,并进行药代动力学研究。方法 应用重组E .coliL 天冬酰胺酶免疫家兔 ,分离IgG ,用DEAE 纤维素柱色谱纯化 ,辣根过氧化物酶标记抗体 ,建立抗体夹心酶联免疫吸附法 ,测定大鼠血浆中重组E .coliL 天冬酰胺酶浓度。结果 方法的线性范围为 1～6 4U·L- 1 ,血药浓度与时间的关系符合二房室模型 ,初期和末端的T1 2 分别为 0 5 0～ 0 5 7h和 2 4 5～ 3 0 2h ,AUC与剂量成正比。结论 建立的抗体夹心酶联免疫吸附法在灵敏度、特异性、线性范围、精密度和回收率等方面 ,满足药代动力学研究要求。实验方法和重组E .coliL

双抗体夹心酶联免疫吸附法检测杏仁过敏原苦杏仁球蛋白

提取中国甜杏仁过敏原蛋白苦杏仁球蛋白,分别制备兔和鼠多克隆抗体,建立双抗体夹心酶联免疫吸附(ELISA)法。结果表明:对甜杏仁中苦杏仁球蛋白的检测限为(6.36±1.02)μg/L;对中国苦杏仁及美国大杏仁中苦杏仁球蛋白的检测限分别为(12.11±1.70)μg/L和(18.95±1.52)μg/L,且与常见的14种植物性蛋白没有交叉反应,表明该方法具有良好的特异性。将该方法用于法式小面包、饼干和脱脂牛乳中杏仁过敏原的检测,苦杏仁球蛋白的添加回收率为78.94%～125.15%,且相对标准偏差均低于5.81%。

GP_（125）酶标记抗体法测定细胞增殖活性

利用与细胞增殖有关的抗原ＧＰ_（１２５）和Ｂ_３抗体结合，形成抗原抗体复合物，再同酶结合形成抗原－抗体－酶复合物。该复合物与ＡＢＴＳ－Ｈ_２Ｏ_２发生颜色反应，在一定波长下可测定细胞增殖。本法亦可测定细胞活化剂效应及抗癌药物的抑瘤效应，是一种测定细胞增殖活动性的非放射性方法。

抗体夹心酶免疫吸附法测定重组E.coli水蛭素HV3研究

将重组E. coli水蛭素HV3和BSA交联后免疫豚鼠和家兔,DEAE-纤维素柱层析纯化IgG.用这两种抗体和酶标二抗羊抗兔IgG-HRP建立三抗体夹心酶联免疫吸附法,测定重组E. coli水蛭素HV3的含量.本测定方法的线性范围为0～2 ng/ml,灵敏度为0.04 ng/ml.建立的三抗体夹心酶联免疫吸附法测定重组E.coli水蛭素HV3具有良好的精密度、回收率、灵敏度和特异性.

用酶标抗体法检测蚕微粒子孢子

用酶标抗体间接法和酶标抗体ＰＡＰ法检测蚕微粒子孢子，二种方法检测结果一致，被检材料与阳性对照中的孢子被染成褐色，从而可以确定为蚕微粒子孢子。二种方法比较，间接法相对简单，ＰＡＰ法敏感性更高，均为重要的蚕微粒子孢子的鉴别诊断方法。

用酶标抗人IgG单克隆抗体直接ELISA法检测微量血痕种属的研究

用酶标抗人ＩｇＧ单克隆抗体直接ＥＬＩＳＡ法检测微量血痕种属的研究湖南省公安科研所（４１０００６）聂绍禄单克隆抗体问世以来，已在法医学中开始进行应用研究，它的主要特征是具有高度的特异性和敏感性，据Ｔａｉｎａｌｃｍ等（１９８４）报道指出，抗人ＭｃＡｂ与常...

人C-反应蛋白磁微粒化学发光酶免疫测定法的建立

人C-反应蛋白(C-reactive protein,CRP)是炎症以及各种相关疾病如病毒感染、心血管疾病等诊断、治疗和预后的临床检测指标。为了建立一种快速、准确的CRP定量免疫测定方法,将表达纯化的重组CRP作为抗原免疫小鼠,获得了5株稳定分泌抗体的单克隆抗体细胞株,采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法(double antibody sandwich enzyme-linked immunosorbent assay,DAS-ELISA)初步鉴定筛选的抗人CRP单克隆抗体,并分别选择mAb 9D6和mAb 9G4作为捕获抗体与检测抗体,建立用于人CRP检测的化学发光酶免疫测定法(chemiluminescence enzyme immunoassay,CLEIA),最后通过测定分析临床血清CRP样本,评价CLEIA的性能。结果显示,基于9D6/9G4-AP单克隆抗体对的CLEIA测定范围为0.1767~500μg/L(可扩展至100 mg/L);所建立的CLEIA与医院采用的免疫散射比浊法(R^(2):0.9496,P<0.0001)表现出良好的相关性,且Bland-Altman分析中96.36%(106/110)的点在95%一致性界限范围内显示两种检测方法具有较好的一致性。结果初步表明,建立的分析方法在临床诊断中具有较好的应用前景。

改良双抗体夹心酶联免疫法测定重组人活性蛋白C含量的研究

研究用ELISA法直接定量检测细胞培养液中的重组人活性蛋白C(rhAPC)。用改良双抗体夹心酶联免疫检测法进行定量分析。用棋盘滴定法对包被抗体、反应一抗和辣根过氧化物酶(HRP)标记二抗的适宜工作浓度进行了选择,并对实验条件进行优化,参考品标准曲线线性相关性较好。改良双抗体夹心酶联免疫检测法可用于直接定量分析细胞培养液中的rhAPC水平。

大鼠血浆中重组人钙调磷酸酶B亚基的ELISA双抗体夹心法测定及其药动学研究

目的:建立大鼠血浆中重组人钙调磷酸酶B亚基(rhCNB)的测定方法,并研究其药动学特征。方法:采用酶联免疫吸附(ELISA)双抗体夹心法,将1μg/ml的rhCNB单克隆抗体mAb包板,加入待测样品,再加入rhCNB多克隆抗体pAb(稀释比例为1∶5 000)和辣根过氧化酶(HRP)标记抗免疫球蛋白G(IgG)(稀释比例为1∶10 000),以四甲基联苯胺显色,用酶标仪在450 nm波长处测定吸光度(OD值)。测定6只大鼠iv 2.5 mg/kg rhCNB后2、15、30、60、120、240、480、720 min的血药浓度,以BAPP 3.0软件计算药动学参数。结果:rhCNB检测质量浓度的线性范围为0.195~12.5 ng/ml(r^2=0.995 0),定量下限为0.195 ng/ml,准确度为97.300%~103.622%(RSD均小于7.5%,n=6);批内、批间和反复冻融3次的RSD均不大于8.5%(n=6、18、15)。该药在大鼠体内的药动学特征符合二室模型,AUC_(0-720 min)为173.038 mg·min/L、t_(1/2)为94.62 min。结论:建立的方法特异性强、灵敏度高、准确度及精密度好,可用于生物样品中rhCNB的定量检测和药动学研究。

分析酶联免疫法筛查HIV抗体的艾滋病诊断价值

目的:针对临床在对艾滋病病毒感染者及患者进行诊断的过程中以酶联免疫法筛查HIV抗体进行诊断的具体效果进行分析。方法:按照对比诊断的方式展开本次研究,所纳HIV抗体阳性者,共计为66例,为疾控中心在2015年1月至2019年12月所筛查的HIV抗体阳性者,所有被检测者首先按照常规胶体金法进行检测,胶体金阳性者展开酶联免疫法筛查HIV抗体,分析诊断效果。结合艾滋病确证实验室最终60例被检测者得到确证阳性结果,酶联免疫法筛查检测中61例测定为阳性,5例为阴性,而常规胶体金法检测中,66例测定为阳性,0例为阴性。在准确率上,酶联免疫法筛查为98.48%(65/66),而常规胶体金法则为90.61%(60/66),对比可知,酶联免疫法存在有明显优势(P=0.018,χ2=9.836)。结果:结合与最终确证实验相比,酶联免疫法筛查HIV抗体在诊断准确率、阳性率上均存在有明显优势(P<0.05)。结论:结合观察可以发现,与常规胶体金法诊断相比,酶联免疫法存在有更高的准确性,可促使该部分患者尽快得到确诊,对于提升临床对该部分患者的诊断效率等均存在有较为重要的作用。临床在对艾滋病感染者及患者进行诊断过程中以酶联免疫法筛查HIV抗体进行诊断存在有较高的准确性,可促使感染者及患者尽快得到确诊。

应用酶标抗体法检查牛粪便及瘤胃内容物中的大肠杆菌O157

O157(E.Coli O157)大肠杆菌是肠出血性大肠杆菌中最多见的1个血清型,人食入被大肠杆菌污染的食物会引发食物中毒.1996年,日本暴发了O157导致的人群感染,近期在韩国、中国台湾等国家和地区均有O157感染的报道,1998年中华人民共和国皇岗出入境检验检疫局(深圳)从香港进口的冰鲜鱼中检出了O157大肠杆菌.为保护我国畜牧业生产安全和人民健康,防止O157大肠杆菌在我国蔓延,建立快速诊断技术是十分必要的.

用酶标抗体法检测蚕微粒子孢子效果好

杭州动植物检疫局万嘉群用酶标抗体间接法和酶标抗体PAP法检测蚕微粒子孢子。两种方法检测结果基本一致。被检材料及阳性对照中带有表面抗原的孢子,能和第一抗体发生反应,被染成褐色。间接法与PAP比较表明,PAP法就是不将酶直接标于兔抗鼠抗体上,而是直接将酶注射给大白鼠,获得抗酶抗体,再将抗体依靠免疫机制与酶反应形成复合物,然后再加在第二抗体上,因此。

黄瓜绿斑驳花叶病毒病快速检测法与酶联免疫双抗体夹心检测法的比较及其在生产上的应用

采用快速检测法(浙江大学和安德珍各自生产的试剂盒)和酶联免疫双抗体夹心法对棚栽嫁接西瓜疑似感病植株叶片和显症植株叶片进行黄瓜绿斑驳花叶病毒检测,结果发现,疑似感病叶片中,阳性率:DAS-ELISA法86.36%>浙大快速检测法59.09%>安德珍快速检测法34.09%,DASELISA法与快速检测法之间的阳性率差异极显著(χ~2=25.03,P<0.01),与浙大快速检测法符合率72.72%,与安德珍快速检测法符合率为47.72%,2家快速检测法之间的阳性率有显著性差异(χ~2=4.57,P<0.05);显症病叶中,阳性检出率浙大快速检测法高于安德珍快速检测法,当样品在冰箱中保存后,快速检测法的阳性检出率会下降,影响检测结果。