固定化牛肾氨基酰化酶拆分法制备D-丙氨酸

研究了以中空纤维固定化牛肾氨基酰化酶拆分 DL-Ala制备 D-Ala及反应的各种优化条件和固定化酶的动力学性质。实验结果表明 ,固定化酶反应的最适 p H为 7.0 ,最适反应温度为 3 0～ 3 5℃ ;固定化酶拆分反应的酶量选择为 5mg/ ml,时空体积 SV=1 .0 ,在 p H 7.0 ,3 0℃条件下的全拆分底物浓度为 0 .1 ml/ L。固定化酶常温 1周内拆分率稳定 ,但对热不稳定 ,4 0℃条件下放置 3 0 min活力下降 3 0 %。

重组芽孢杆菌脂肪酶拆分制备(R)-氟比洛芬

利用大肠杆菌M15表达芽孢杆菌的脂肪酶基因,重组蛋白经亲和色谱纯化,得到比活力为30.25u/mg的纯化酶。以纯化酶催化水解50mmol/L的氟比洛芬乙酯,在55℃、pH9.0的条件下,所得产物(R)-氟比洛芬ee值为99.6%。

2-氨基丁酸的酶拆分

为了得到右旋的2-氨基丁酸，对2-氨基丁酸的拆分进行了研究．通过从猪肾中提取的氨基酰化酶选择性地水解（R，S）-2-N-乙酰氨基丁酸，得到了（S）-2-氨基丁酸，旋光度=＋21．58℃（C=2，5mol／LHCl），收率为71．8％．试验结果表明最佳拆分条件为：底物浓度为0．1mol／L；底物与酶质量比为100：1；pH6．8～7．0；温度为37℃；反应时间为24h．

两相体系中胰酶拆分DL-苯丙氨酸

将ＤＬ－苯丙氨酸与甲醇酯化得ＤＬ－苯丙氨酸甲酯盐酸盐，在甲苯／水两相体系中用碳酸氢钠中和ＤＬ－苯丙氨酸甲酯盐酸盐得游离ＤＬ－苯丙氨酸甲酯，在甲苯／水两相体系中用胰酶拆分ＤＬ－苯丙氨酸甲酯得到Ｌ－苯丙氨酸和Ｄ－苯丙氨酸甲酯，取得了各步反应的最优条件，并将Ｄ－苯丙氨酸甲酯外消旋得到ＤＬ－苯丙氨酸甲酯继续用于拆分。拆分摩尔收率为６１．４％，所得Ｌ－苯丙氨酸粗品纯度为９２．２％，重结晶后为９８．６％，［α］２５Ｄ＝－３０．

有机相固定化脂肪酶催化拆分环戊烯酮的研究

利用 Pseudomonas Cepacia sp游离脂肪酶及其固相酶在非水相中催化外消旋体酯交换反应 ,对拟除虫菊酯手性农药中间体 (± ) - 4 -羟基 - 3-甲基 - 2 - (2 -丙烯基 ) - 2 -环戊烯 - 1-酮进行了拆分 ,考察了有机溶剂、水含量对酶活的影响。在实验确定的反应条件下 ,固相酶的酶活、热稳定性及操作稳定性优于游离酶 ,但选择性下降 ,目标产物的光学纯度分别为 73.5% ee和 94 .4 % ee。

酶法拆分D,L-苯丙氨酸制备D-苯丙氨酸

在固定化青霉素酰化酶(IPA-750)存在下,通过N-苯乙酰-D,L-苯丙氨酸(2)的选择性水解完成了酶法拆分D,L-苯丙氨酸(1)制备D-苯丙氨酸(5)的过程。选择性水解的较适宜反应条件为:22.83g,m(2)∶m(IPA-750)=6∶1,pH7.0,于30℃反应5h,产物为N-苯乙酰-D-苯丙氨酸(4)和L-苯丙氨酸(3,收率63%,光学纯度99%)。4用6mol·L-1盐酸于120℃水解反应8h,经脱盐处理得5,收率67%,光学纯度91%。3在含醋酸酐的醋酸溶液中进行消旋化处理,得到100%消旋的1可继续进行下一轮酶法拆分。

酶催化转酯化拆分反应中的a-氰基-3-苯氧基苄醇的液相色谱测定

采用正相高效液相色谱法测定了手性α-氰基-3-苯氧基苄醇(CPBA)的含量,采用Sumichiral OA-4400手性柱,正己烷:二氯乙烷:乙醇=87:10:3为流动相,UV检测器(λ=254nm),外标法峰面积定量.线性关系良好,回收率在100.0%～102.2%之间.并使用该法测定酶转酯化反应过程的S-CPBA的含量及ee值.

脂肪酶催化拆分环戊烯酮动力学研究

考察了４种不同来源的脂肪酶对环戊烯酮的拆分活性；从中选择ＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｓＣｅｐａｃｉａＬｉｐａｓｅ为实验用酶，考察了影响酶拆分反应动力学的几种因素，结果表明酶拆分的最适温度为４０℃，ｐＨ值为７．０；反应过程存在严重的底物抑制，反应最终得到质量分数为４６．５％单一旋光纯的（Ｒ）－环戊烯酮。

双液相反应体系中脂肪酶催化拆分缩水甘油酯

利用脂肪酶作为催化剂在双液相反应体系中对外消旋缩水甘油酯进行立体选择性的酯水解反应.考察了影响该拆分反应的因素,确定了最适酶源为猪胰脂肪酶;最适底物为缩水甘油丁酯;其它最适反应条件:pH为7.6;温度为27℃;反应时间为4h.在最适条件下,当酶促拆分反应的转化率为60.6%时,缩水甘油丁酯的光学纯度可以达到93.3%以上.

酶催化拆分制备手性2-氯-1-(2，4-二氟苯基)乙醇及光学活性抗真菌药物的合成

用Pseudomonas stutzeri脂肪酶催化转酯化反应动力学拆分外消旋体法制备高对映体纯的手性2-氯-1-(2,4-二氟苯基)乙醇,得到95.8%ee值的(R)-异构体和94.5%ee值的(S)-异构体,以此手性醇为关键中间体合成了4种具有抗真菌活性的光学活性化合物α-氯代苄氧基-β-(1-咪唑基)-2,4-二氟乙苯硝酸盐.纸片扩散法测试体外抗真菌活性结果表明,对各种念珠菌(Candida species)(R)-5a和(R)-5b具有与氟康唑相当的抗菌活性,特别是对氟康唑耐药的烟曲霉菌(Aspergillus fumigatus),5a,5b及其两种光学活性异构体均有优异的抗菌活性,而且(R)-异构体的活性明显高于(S)-异构体和外消旋体.

磁性固定化青霉素酰化酶催化拆分(R,S)-2-氯苯甘氨酸甲酯

将青霉素酰化酶(PGA)固定于饱和磁化率为6.5 emu/g、富含环氧基的大孔磁性聚合物微球(GM)上,所得磁性固定化酶PGA/GM用于在水相中催化(R,S)-2-氯苯甘氨酸甲酯(2-CGM)发生不对称水解反应;在20℃下反应48 h,所得(S)-2-CGM和(R)-2-氯苯甘氨酸的对映体过量值分别为98.0%和58.8%,底物总转化率为62.5%。PGA经GM固定化后,催化(R,S)-2-CGM水解反应的活性和对映体选择性均有显著提高。PGA/GM具有较强的磁响应性,在外加磁场的作用下能进行快速分离和洗涤,机械损失小;经6次循环使用,其活性和对映体选择性未出现大幅衰减。

S42-26利用连续流体装置酶拆分取代亚磺酰基乙酸甲酯

消旋的取代业磺酰皋乙酸甲酯存pH7．5磷酸缓冲液和氯苯中，在脂肪酶AK催化下水解为S型的酸，R型的酯不水解。利用连续流体装置补允缓冲液，并将溶于上层（水层）的酸移除，而位于下层（氯苯层）的酯继续反应，实现连续拆分，

乙酰化酶动力学拆分N-乙酰色氨酸

在应用 Donald方法的基础上 ,通过选择性水解合成了 DL-N-乙酰色氨酸 ,在酰基水解酶的作用下 ,可将DL-N-乙酰色氨酸拆分成 L-和 D-色氨酸 ,两种对映体的光学纯度都在 98%以上。

除虫菊酯中间体拆分用酶的菌种筛选

通过定性实验和以橄榄油为底物的酶活性测定,选定产生脂酶的菌株6株;再以待拆分的R.S烯丙醇酮的醋酸酯为底物,通过酶水解实验,获得有水解酯键能力的菌株3株,总水解率最高为36.5 ％。

酶促酯化拆分-化学消旋串联法制备(S)-布洛芬

以(±)-布洛芬为原料、南极假丝酵母脂肪酶B(CALB)为催化剂,通过对映选择性酯化反应拆分布洛芬,对醇的种类及用量、反应介质、底物物质的量比、酶用量、干燥剂种类及添加量、温度、时间进行了优化。在1 mL环己烷、0.0206 g(0.1 mmol)(±)-布洛芬、0.0444 g(0.6 mmol)异丁醇、添加量为40 g/L 5A分子筛、15 mg CALB、温度60℃、时间48 h的条件下,以56%的收率、100%的对映体过量值得到了纯的(S)-布洛芬。接着对上述拆分时生成的(R)-布洛芬异丁酯进行酸性水解;然后以二异丙基氨基锂为催化剂,对水解生成的(R)-布洛芬进行化学消旋得到(±)-布洛芬,再进行酶促酯化拆分。该酶促酯化拆分-化学消旋串联法可循环进行多次,从而提高(±)-布洛芬的利用率。

化学-酶催化动态动力学拆分工艺中多相催化剂的研究进展

利用外消旋体进行化学-酶催化动态动力学拆分是制备单一手性化合物的有效手段之一。论述了近几年用于动态动力学拆分工艺中的固定化脂肪酶和固相外消旋化多相催化剂的研究进展,介绍了过渡金属配合物、酸性β-沸石和酸性树脂等固相外旋消化催化剂与固定化脂肪酶配伍,用于化学-酶催化动态动力学拆分工艺的催化效果。

酶催化拆分外消旋药物的研究进展

外消旋药物中通常存在不同的对映异构体,但在药物中往往只有一种对映体才具有实际的疗效,这不仅可以排除由于无效(不良)对映体所引起的毒副作用,还能减少药物剂量和人体对无效对映体的代谢负担,对药物动力学及剂量有更好的控制,提高药物的专一性。脂肪酶作为一种特殊有效的生物酶催化剂,利用其高度立体选择性将外消旋体拆分成单一光学异构体,底物转化率和对映体选择性较高,反应条件温和且副反应较少。文章对酶催化拆分外消旋化合物的现状和影响因素进行了综述。

不动杆菌静息细胞催化拆分外消旋环戊酮醇乙酸酯反应条件的优化

考察了反应条件对不动杆菌Acinetobactersp .YQ2 31催化外消旋环戊酮醇乙酸酯对映选择性水解的反应速度和对映选择性的影响 .确定的最佳酶反应条件为 pH 8 0 ,温度 5 0℃ .不同乳化剂对对映选择性的影响不同 ,以壬基酚聚氧乙烯醚的效果最好 ,当其加入量为 15 g/L 时 ,反应的对映选择性最高 .产物环戊酮醇对酶活性有显著的抑制作用 .细胞中的酯酶优先水解 (R) 环戊酮醇乙酸酯 ,生成 (R) 环戊酮醇 ,在底物浓度为 2 5 0mmol/L时 ,对映体比率 (E值 )可达 5 0 .

一类含噻唑环非天然氨基酸的合成及其拆分

用乙酰基转移酶拆分3－（今噻唑基）－DL-乙酰丙氨酸可直接得到供合成多肽药物使用的L-型氨基酸．该方法合成路线短，分离效果好（e．e．值在99％以上）.类似地合成并拆分了3－（2－R－4噻唑基）-丙氨酸（R=CH3，Ph），获得同样好的效果．

复合诱变选育高产脂肪酶黑曲霉菌株及其固定化酶性质

通过硫酸二乙酯(DES)和微波复合诱变,获得遗传性状稳定的高产脂肪酶黑曲霉突变菌株CM2,酶活达174.93U/mL。对菌株CM2培养条件的优化,以橄榄油和(NH4)2SO4为最佳碳、氮源,在28℃、pH7.5的条件下,发酵CM2菌株68h,脂肪酶活为180.52U/mL。大孔树脂固定化脂肪酶在35～55℃和pH7.5～9.5之间有很好的稳定性。游离酶和固定化酶的表观失活活化能分别为52.6842kJ/mol和30.8391kJ/mol,固定化酶对温度的敏感度降低,耐受性增强。在微水相中脂肪酶催化2-辛醇和乙酸乙烯酯不对称酯交换反应中,(S)-乙酸辛酯的对映选择性高(游离酶e.e.S85.7%;固定化酶e.e.S87.7%),显示了该固定化酶在2-辛醇的手性拆分方面具有良好的应用前景。